应用：目的基因表达的差异检测目的基因表达的亚细胞定位目的基因表达的相互作用研究目的基因瞬转/稳转细胞系的蛋白定位研究实验原理细胞免疫化学与免疫组织化学实验都是依据抗原抗体反应和化学显色的原理，采用标记的特异性抗体对组织或细胞内抗原的分布进行原位检测技术。细胞免疫化学将培养处理后的细胞爬片、固定、破膜、封闭后，加入一抗与抗原蛋白结合，再加入标记有荧光素的二抗与一抗进行反应，最后通过激光共聚焦扫描显微镜进行荧光拍摄来显示细胞中靶蛋白的表达变化和定位实验流程

简介：瑞金特生物实验中心引进美国安捷伦公司的液相色谱质谱联用仪。形成了高通量、高灵敏度和高分辨率的规模化蛋白质分析支撑技术体系，为促进蛋白质组学及相关研究的发展，共享先进的技术资源，近年来生物质谱实验室蛋白质/多肽质谱鉴定、生物工程药物结构确证和蛋白质组学多项成熟的分析技术已为国内外客户提供了广泛的服务。设备仪器：美国安捷伦公司Agilent （xct-6330） 型号的液相色谱仪，MS为美国热电公司的TSQ型号质谱仪；质谱仪采用ESI（电喷雾电离）离子源，MS/MS 串连四极杆分析器。可在线检测极性有机化合物、核酸、多肽、小分子蛋白质及其化学修饰产品的实际分子量，并对送检样品进行分子量鉴定，纯度及修饰效果分析。质量范围M/Z 10～2,000 分辨率R=2M设备应用：芯片/质谱 (HPLC-Chip/MS) ——显著提高了纳流液-质联用分析结果的灵敏度，可靠性和分析速度 安捷伦推出了世界第一台的基于微流控技术的纳流液相色谱芯片-质谱平台。 这项技术将主要用于蛋白质组学和药物分析方面。其核心是采用可重复使用的聚合物液相色谱芯片取代传统的液相色谱柱。这个平台将多维色谱集成在一块芯片上，采用插拔式设计，操作简单与标准液相色谱/质谱联用仪相比， 它的其灵敏度提高了3,500倍。尽管芯片的体积很小，但是可以容纳最长20 厘米的有C18填料的色谱柱。液相色谱/芯片作为一个模块与安捷伦的所有6000系列液-质联用仪完全兼容。 液相色谱-芯片技术主要应用蛋白质组学研究和药物标靶研究等领域。有关 的应用发表在许多国际知名的杂志上，如Analytical Chemistry; Electrophoresis, PNS上液相色谱芯片产品主要包括七种类型的芯片涵盖大分子和小分子的应用：* 酶解蛋白质鉴定芯片 #1 * 酶解蛋白质鉴定芯片#2 * 寡聚糖的芯片 * 直接进样芯片* 小分子芯片 * 质谱校正和诊断芯片 * 全蛋白质分析芯片测试范围：多肽、蛋白质的电喷雾质谱分子量测定以及天然产物分子、生物大分子、有机分子的质谱测试和研究送检样品要求：样品应尽量不含盐份、离子表面活性剂、去垢剂及一些难挥发性盐。样品送检量、溶解方式以及未知可否做质谱检测的样品可与我们的工作人员联系以便提高检测效率。（送样单请附带检测样品的品名及精确计算分子量）送样须知：A：样品量：50pmol干粉或1ug/uL以上（一般测试）、100pmol干粉或1ug/uL以上（MALDI串联质谱分析）、100ug干粉以上（二硫键分析、糖基化分析，磷酸化分析，其他修饰分析）、10ug干粉以上（SDS-PAGE或IEF）；B：盐含量：挥发性无机盐，<20mM，请勿使用PBS、SDS和尿素等质谱干扰物质；C：考马斯亮蓝染色样品可全部接收，银染过程中不得使用戊二醛作为固定剂；D：请告知样品是否有修饰，并请注明修饰方式。主要应用 :* 蛋白质组学研究 * 寡聚糖和糖蛋白的研究 * 小分子化合物分析* 药物发现和研发 * 食品和环境样品分析检测报告：从收到样品起1-2个工作日内可给出样品的检测报告，以电子邮件的形式发给您并附带检测结果分析。包括结果有：一级质谱：质谱图、肽段分子量、数据库检索结果； 二级质谱：质谱图、肽段分子量、数据库检索结果、肽段氨基酸序列、修饰位点等；

提供基于Ion torrent平台的基因检测服务：快速准确地得到多个基因，多个样本的基因突变情况， 为疾病的诊断，治疗提供基因水平的参考意见。。肿瘤基因靶向测序a.  Cancer Hotspot Panel V2：靶向50个原癌及抑癌基因，覆盖约2800个已知外显子突变位点，最高4000 X测序深度。b.  Comprehensive Cancer Panel：靶向409个引用次数最多及突变最频繁的关键原癌及抑癌基因，350 X以上测序深度。c.  BCRA1/2 Panel：特异性针对乳腺癌/宫颈癌BCRA1/2检测，1000 X以上测序深度。Angelina Jolie通过基因诊断降低乳腺癌发病风险引起全球热议。d.  Colon and Lung Cancer Panel：特异性靶向结肠癌、肺癌相关22个基因热点区域，1500 X以上的测序深度。遗传病基因检测:Inherited Disease Panel：涵盖 700多种常见孟德尔遗传病相关的328个基因当基因组位置的测序覆盖度>20x时，生殖细胞系突变检测>90% 神经肌肉疾病涉及237种疾病中88个基因心脏病涉及143种疾病中61个基因发育疾病涉及143种疾病中61个基因代谢疾病涉及44种疾病中28个基因其他典型遗传性疾病涉及196种疾病中75个基因。定制化靶基因测序:我们还可采用Ion AmpliSeq™ Custom Panel：根据研究兴趣设计并定制目的基因的测序服务，可灵活选择测序深度。目前已经给多个医院客户做过多个大型定制化服务。1 微生物多样性测序产品介绍微生物多样性测序（又称扩增子测序）是利用二/三代测序平台，对16S rDNA/18S rDNA/ITS/功能基因等特定区段PCR产物进行高通量测序，突破传统微生物不可培养的缺点，获得环境样本中的微生物群落结构、进化关系以及微生物与环境相关性等信息。适用范围医学领域：常见疾病与人体微生物的关系动物领域：瘤胃产甲烷菌类群研究等农业领域：农业耕作等环境领域：雾霾处理、污水治理、石油降解、酸性矿水处理等特殊极端环境：气候变化导致的环境变化研究实验流程：：分析流程技术参数样本类型土壤：10 g；粪便：3-5 g；血液：10   mL；污泥：5-10 g；  DNA：总量 ≥ 4 μg、浓度 ≥ 50 ng/μL、1.8 < OD260/280 < 2.0平台选择Illumina   PE250/300、PacBio平台推荐测序量土壤：2-3万；粪便：2-3万；肠粘膜：1-2万；胃液：1-2万；  水样：>1万；沉积物：>1万；皮肤表面：1-2万2. DNA常规测序测序特色a.  取样快高效快捷的专业物流，每天两次取样，保证样品第一时间到达实验室。b.  瑞金特生物测序单序列读长可达800～900bp。c.  瑞金特生物提供的可靠碱基，质量值均在Q20以上。d.  操作精专业的技术人员，严格SOP双重质控，样品数据真实可靠。e.  效率高质粒和已纯化PCR产物，24h出结果，菌和未纯化PCR 产物，36～40h出结果。a.  不怕难瑞金特生物结合自主研发的试剂及BI dGTP BigDye terminator v3.0等昂贵试剂，能有效解决高GC、发夹结构等难题。免费服务根据不同的需求，我们还可以为合作伙伴免费提供：a.  测序引物设计和评估b.  序列拼接c.  DNA序列的基本分析d.   Primer Walking引物设计e.   菌液活化3. EST测序EST（Expressed Sequence Tag）表达序列标签是指随机从构建的cDNA文库中挑选克隆，并进行5'端和3'端一次性测序所获得的短cDNA部分序列，一般长度为150～500bp。虽然EST只是完整基因的一部分，但是其序列长度已足以代表该基因，因此可以采用EST特异性地标记基因。目前，EST的数目比GenBank中其他核苷酸序列多，所以在EST 库中更容易搜寻到新的基因，它已被广泛地应用于基因的识别。另外，由于EST 来源于特定组织在特定环境下总mRNA所构建的cDNA文库，因此EST也能说明该组织中各基因的表达水平。EST测序的应用a.  基因表达谱分析b.  SSR标记的发掘c.  作为构建分子标记连锁图谱的探针生物信息分析1. 基本信息分析a.从峰图到序列的转化，去除低质量的序列和载体序列b.序列拼接c. EST注释d. ORF预测及分析e. 基因注释（NR、NT数据库）2. 高级信息分析a.功能蛋白分析b.Interpro功能域分析c.序列属性及其对应Unigene的分析d. COG分析e. Pathway分析提供结果 1. 测序峰图及序列文件 2. 生物信息分析报告4.小基因组Shotgun测序鸟枪战略（Shotgun Strategy）又称随机测序战略，是由美国塞莱拉遗传公司创始人克雷格·文特尔发明，主要针对大片段的全长测序。此策略是将基因组DNA用机械方法随机打断成小片段，并连入合适的载体构建亚克隆文库，从中随机挑取克隆测序，再通过生物信息学方法对测得的序列进行拼接组装以获得大片段DNA的序列。构建不同插入片段大小的Shotgun文库（1.5～3 Kb、4～6 Kb、6～8 Kb等），可减少因基因组中的重复序列造成的错误拼装，提供更多Contigs之间的关联信息。Shotgun策略已广泛应用于包括基因组、叶绿体、线粒体、野生质粒、噬菌体、病毒以及Fosmid/Cosmid/BAC克隆等的全长测序。优势a.  成熟的Shotgun文库构建体系，确保您在最短时间拿到数据我们曾创造了10个工作日完成40 Kb Fosmid全长测序的记录。b.  专业的生物信息团队:能提供可靠精准的序列拼接结果，8～10倍覆盖率，phred-20质量标准，全长准确率大于99.99%，并可提供专业的生物信息分析。c.  丰富的实战经验:目前已成功完成了包括链霉菌、水稻、番茄、扬子鳄、熊猫、朱鹮等物种的Fosmid/BAC克隆全长测序1000余例，小鼠、蚯蚓、油菜花、大豆等物种的线粒体100余例，大肠杆菌的野生质粒、噬菌体、病毒等全长测序20余例。我们所提供的全长序列已被众多实验室用于发表学术论文。提供结果完整的实验报告（包含实验细节、质控点、数据拼接记录和完整序列）。收费标准5.BAC末端测序细菌人工染色体（Bacterial Artificial Chromosome，BAC）文库的构建是进行基因组研究的一项重要基础性工作，特别是对大基因组及超大基因组生物来说更是如此，在物理作图、基因图位克隆、基因结构和调控等研究中发挥了重要作用。BAC末端测序技术通过测定插入片段两端的序列，能够迅速而精确地进行序列拼装，并确定基因组序列结构的多态性，如倒置和易位等，在基因组全序列测序中有着举足轻重的作用。  BAC末端测序难点  一般来说，BAC测序比质粒或PCR产物的测序要困难得多。主要难点体现在以下几个方面：a.  BAC质粒插入片段长（一般大于100 Kb），容易形成二级结构，而二级结构区域后的DNA链可能会因延伸不够充分而造成测序异常。b.  BAC测序需要毫克级高纯度的DNA，从而获得充足信号，以利于准确的碱基信号检出和最大读长的获得。但是BAC质粒在细菌中为单拷贝或低拷贝，DNA提取和纯化难度很大。c.  测序反应完成后，产物需进行纯化才能上机（ABI3730xl）检测。常规的纯化方法不能够完全去除残留的荧光染料，这会导致序列彩图中出现严重的干扰峰。优势a.  DNA提取环节:利用自主研发的BAC克隆DNA提取试剂和独特的提取方法，瑞金特生物可以利用96孔深孔板进行BAC克隆的培养和批量化DNA提取，获得的BAC DNA的质量和纯度完全满足测序需求。b.  测序反应环节:对测序反应体系进行了优化，在反应体系中添加了以MgCl2为主要成分的自制缓冲液，增加了BigDye中Taq酶的活性，从而极大提高了测序的质量和成功率。c.  测序反应纯化环节:采用BigDye XTerminator纯化试剂盒，可稳定地去除BAC末端测序中的染料污染，从而消除了干扰峰的出现，并且能够显著增强测序数据的信号强度。

简介：瑞金特生物合成多肽采用逐步固相合成方法服务，利用微波技术处理反应体系，可以合成较长的复杂多肽。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，多肽的一个末端固定在特殊支持物上，通过循环步骤最终形成一条完整的多肽。肽链的设计：多肽是复杂的大分子，每条序列在物理和化学特性上都是独特的，研究人员设计多肽时应考虑到合成，纯化以及溶解等过程中的难度，从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议：如何降低肽链合成的难度： •减少序列长度 •减少疏水性残基数 •减少困难残基如何增强肽链的可溶性： •改变N端或C端 •缩短或加长序列 •加入可溶性残基 •通过置换一个或多个残基改变序列 •通过选用不同框架来改变序列多肽保存： •冻干多肽可在-20度保存或室温保存  •溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性PH（5-7）-20度保存。  •为避免样品的反复冻融，最好分成小样存放。多肽的溶解：大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水，稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽，建议用DMF，脲，guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。多肽的用途：主要用于抗体的制备，多肽疫苗，多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本中心提供不同纯度的多肽，多粗提产物到98%的医药级别，客户可根据需求进行选择。＞80% ：免疫学应用，多克隆抗体制备＞90%：SAR研究，生物测定＞95%：NMR，结晶化，体外生物测定＞98%：NMR，结晶化，敏感的生物测定服务范围：a.  普通线性肽，链长至189个氨基酸，毫克至克级，纯度可达99%b.  简单修饰肽：免费提供N端乙酰化，末端酰胺化c.  复杂修饰肽：脂肽，磷酸肽（Ser、Thr、Tyr），环肽（酰胺环、二硫键环），荧光标记肽（FAM、FITC），生物素标记肽（BIOTIN）、复合抗原肽（MAP）等 ┄d.  蛋白交联：KLH，BSA，OVAe.  含特殊氨基酸肽：含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物f.  不同纯度范围（粗肽、＞70%、＞80%、＞90%、＞95%、＞98%、＞99%）

简介：瑞金特生物合成多肽采用逐步固相合成方法服务，利用微波技术处理反应体系，可以合成较长的复杂多肽。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，多肽的一个末端固定在特殊支持物上，通过循环步骤最终形成一条完整的多肽。肽链的设计：多肽是复杂的大分子，每条序列在物理和化学特性上都是独特的，研究人员设计多肽时应考虑到合成，纯化以及溶解等过程中的难度，从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议：如何降低肽链合成的难度： •减少序列长度 •减少疏水性残基数 •减少困难残基如何增强肽链的可溶性： •改变N端或C端 •缩短或加长序列 •加入可溶性残基 •通过置换一个或多个残基改变序列 •通过选用不同框架来改变序列多肽保存： •冻干多肽可在-20度保存或室温保存  •溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性PH（5-7）-20度保存。  •为避免样品的反复冻融，最好分成小样存放。多肽的溶解：大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水，稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽，建议用DMF，脲，guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。多肽的用途：主要用于抗体的制备，多肽疫苗，多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本中心提供不同纯度的多肽，多粗提产物到98%的医药级别，客户可根据需求进行选择。＞80% ：免疫学应用，多克隆抗体制备＞90%：SAR研究，生物测定＞95%：NMR，结晶化，体外生物测定＞98%：NMR，结晶化，敏感的生物测定服务范围：a.  普通线性肽，链长至189个氨基酸，毫克至克级，纯度可达99%b.  简单修饰肽：免费提供N端乙酰化，末端酰胺化c.  复杂修饰肽：脂肽，磷酸肽（Ser、Thr、Tyr），环肽（酰胺环、二硫键环），荧光标记肽（FAM、FITC），生物素标记肽（BIOTIN）、复合抗原肽（MAP）等 ┄d.  蛋白交联：KLH，BSA，OVAe.  含特殊氨基酸肽：含有D型氨基酸及各种氨基酸衍生物f.  不同纯度范围（粗肽、＞70%、＞80%、＞90%、＞95%、＞98%、＞99%）

技术原理：数字PCR( 也可称单分子PCR)包括两部分内容：PCR 扩增和荧光信号分析。在PCR 扩增阶段，与传统技术不同，数字PCR需要将样品稀释到单分子水平，并平均分配到几十至几万个单元中进行反应。不同于qPCR 对每个循环进行实时荧光测定的方法，数字PCR 技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。数字PCR的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值，因此不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线，具有很好的准确度和重现性，可以实现绝对定量分析。在未来十年内，医学保健的目标是提供优质高效的个性化医疗。PCR 方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR，数字PCR 技术有着无可比拟的优势和广泛的应用前景。 数字PCR检测原理数字PCR检测流程应用领域：a.  突变/稀有变异检测（Mutation/Rare variant detection）b.  拷贝数变异（Copy-number variation）c.  进入外周循环（包括血液和粪便）的肿瘤组织核酸分析d.  无创产前筛查：e.  转化移植检测。f.  药理学（Pharmacogenetics）g.  基因表达分析（Gene ex pression analysis）-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品h.  线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析i.  数字PCR可以验证二代测序(NGS)

是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术。其基本原理是在电场的作用下将SDS-PAGE电泳分离的蛋白质转移至一种固相支持物，然后用特异性抗体来检测目的蛋白在样本中的表达情况。其检测蛋白质的灵敏度为ng级，并可以对目标蛋白进行定性和半定量的分析。主要实验步骤如下：a.  样本准备：样本背景分析，蛋白质的抽提和定量。b.  SDS-PAGE电泳。c.  蛋白质转移至一种固相支持物（NC膜或PVDF膜）。d.  封闭，一抗，二抗孵育。e.  化学发光法显色蛋白，分析结果。f.  提供详细的实验报告。客户需要提供的物品：a.  待检样本及相关背景说明。b. 特异性一抗及对应的二抗。

简介：瑞金特生物实验中心引进美国安捷伦公司的液相色谱质谱联用仪。形成了高通量、高灵敏度和高分辨率的规模化蛋白质分析支撑技术体系，为促进蛋白质组学及相关研究的发展，共享先进的技术资源，近年来生物质谱实验室蛋白质/多肽质谱鉴定、生物工程药物结构确证和蛋白质组学多项成熟的分析技术已为国内外客户提供了广泛的服务。设备仪器：美国安捷伦公司Agilent （xct-6330） 型号的液相色谱仪，MS为美国热电公司的TSQ型号质谱仪；质谱仪采用ESI（电喷雾电离）离子源，MS/MS 串连四极杆分析器。可在线检测极性有机化合物、核酸、多肽、小分子蛋白质及其化学修饰产品的实际分子量，并对送检样品进行分子量鉴定，纯度及修饰效果分析。质量范围M/Z 10～2,000 分辨率R=2M设备应用：芯片/质谱 (HPLC-Chip/MS) ——显著提高了纳流液-质联用分析结果的灵敏度，可靠性和分析速度 安捷伦推出了世界第一台的基于微流控技术的纳流液相色谱芯片-质谱平台。 这项技术将主要用于蛋白质组学和药物分析方面。其核心是采用可重复使用的聚合物液相色谱芯片取代传统的液相色谱柱。这个平台将多维色谱集成在一块芯片上，采用插拔式设计，操作简单与标准液相色谱/质谱联用仪相比， 它的其灵敏度提高了3,500倍。尽管芯片的体积很小，但是可以容纳最长20 厘米的有C18填料的色谱柱。液相色谱/芯片作为一个模块与安捷伦的所有6000系列液-质联用仪完全兼容。 液相色谱-芯片技术主要应用蛋白质组学研究和药物标靶研究等领域。有关 的应用发表在许多国际知名的杂志上，如Analytical Chemistry; Electrophoresis, PNS上液相色谱芯片产品主要包括七种类型的芯片涵盖大分子和小分子的应用：* 酶解蛋白质鉴定芯片 #1 * 酶解蛋白质鉴定芯片#2 * 寡聚糖的芯片 * 直接进样芯片* 小分子芯片 * 质谱校正和诊断芯片 * 全蛋白质分析芯片测试范围：多肽、蛋白质的电喷雾质谱分子量测定以及天然产物分子、生物大分子、有机分子的质谱测试和研究送检样品要求：样品应尽量不含盐份、离子表面活性剂、去垢剂及一些难挥发性盐。样品送检量、溶解方式以及未知可否做质谱检测的样品可与我们的工作人员联系以便提高检测效率。（送样单请附带检测样品的品名及精确计算分子量）送样须知：A：样品量：50pmol干粉或1ug/uL以上（一般测试）、100pmol干粉或1ug/uL以上（MALDI串联质谱分析）、100ug干粉以上（二硫键分析、糖基化分析，磷酸化分析，其他修饰分析）、10ug干粉以上（SDS-PAGE或IEF）；B：盐含量：挥发性无机盐，<20mM，请勿使用PBS、SDS和尿素等质谱干扰物质；C：考马斯亮蓝染色样品可全部接收，银染过程中不得使用戊二醛作为固定剂；D：请告知样品是否有修饰，并请注明修饰方式。主要应用 :* 蛋白质组学研究 * 寡聚糖和糖蛋白的研究 * 小分子化合物分析* 药物发现和研发 * 食品和环境样品分析检测报告：从收到样品起1-2个工作日内可给出样品的检测报告，以电子邮件的形式发给您并附带检测结果分析。包括结果有：一级质谱：质谱图、肽段分子量、数据库检索结果； 二级质谱：质谱图、肽段分子量、数据库检索结果、肽段氨基酸序列、修饰位点等；

实验原理DNA甲基化存在于大多数真核生物中，一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区，起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%处于基因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶，在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基，在反应完成时被保留，我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序，就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高，是甲基化检测的金标准。实验流程

实验原理早期的shRNA载体多采用RNA聚合酶III型启动子介导shRNA的表达，RNA聚合酶III型启动子如鼠源的U6启动子和人源的H1启动子可以在哺乳动物细胞中表达小分子RNA。随着miRNA干扰机制的深入研究，发展出第二代shRNA载体，即采用RNA聚合酶II型启动子CMV表达含侧翼序列的miRNA模拟物。该载体模拟miRNA的加工，表达出来的shRNA进入RISC沉默复合物的效率要比RNA聚合酶III型启动子表达的shRNA高数十倍，抑制效率更好，且可以和EGFP协同表达，方便观察转染效率。实验流程