实验动物   小鼠，4-6周  造模方法 1、动脉血栓造模：实验组和对照组小鼠麻醉后，充分暴露小鼠颈总动脉，用浸过10%FeCl3的1X2mm滤纸覆盖于颈总动脉上3分钟，然后移除滤纸，激光多普勒记录血栓形成曲线。 2、下腔静脉血栓：实验组和对照组小鼠将腹腔内小肠等器官拖出放置于小鼠左侧，暴露出下腔静脉，动作要轻柔，避免损伤器官，拖出的器官用浸润过生理盐水的纱布包裹，防止长期置于空气中造成脱水。移至体视显微镜下，钝性分离血管周围结缔组织暴露下腔静脉及其分支，在肾静脉下方将腹主动脉和下腔静脉剥离开，然后用7/0缝合线将下腔静脉结扎，之后逐个将其分支结扎。按解剖位置将肠道等器官放回腹腔，在腹腔中加人1％氨苄溶液0.2 mL（抗生素），防止感染。用5/0缝合线逐层缝合腹腔，术后置于25~28℃的环境中，直至小鼠复苏，即可正常饲养。 

实验动物     C57BL/6小鼠，SPF级，雄性，5~6周龄，体重18~20g  造模方法       幽门螺杆菌（Hp）感染小鼠动物模型的建立：取新鲜培养的菌液，0.25ml/只灌胃感染小鼠，隔天灌胃一次，共灌胃3次。每次灌胃幽门螺杆菌前禁食12h，灌胃完成后2h后进食。        PCR检测幽门螺杆菌感染结果：幽门螺杆菌感染结束后一周，对小鼠进行感染检测，以确造模是否成功。检测前小鼠禁食24h，小鼠处死后，取出胃部组织，沿胃大弯剪开胃部，使用无菌PBS冲洗胃部残渣。取胃腺部随机分为2份，一份用于Hp尿素酶检测，一份用于PCR检测。 

实验动物健康 SD 大鼠，雄性，SPF级，体重 180～220g。  造模方法1、固定：将已麻醉的大鼠仰卧位置于固定板或垫上，以绵绳分别拴住大鼠 4 只爪，另一绵绳勾住大鼠上齿，绵绳另一头分别栓在固定板四角及顶部的钉子上。2、切口：剪去腹部手术野的毛，以碘酒及酒精消毒，于剑突下 37.5px 沿腹中线切开皮肤及肌层，以止血钳夹住切口两边的肌层，拉开切口找出肾脏 右手食指伸入腹腔摸着肾脏，左手指从腹部外侧配合将肾脏轻轻挤出，用浸有生理盐水的棉球或纱布包住，用左手食指与拇指将其固定。3、分离肾动脉：以眼科镊子小心分离肾蒂部筋膜，以玻璃分针沿肾静脉下方分离肾动脉，在近主动脉端用 U 型银夹（内径为 0.2~0.25mm）套上，用镊子夹紧银夹口部。4、缝合：以手术专用的缝合针、线，缝合手术切口。

实验动物     6-8周龄，的Balb / cJ雌性，体重18-24g造模方法       将32只雌鼠随机分为2组，每组16只，模型组小鼠给予慢性束缚刺激：小鼠在50ml离心管中经受每日6小时束缚应激，与每周两次的过夜照明组合，连续束缚应激21天，束缚期间无法获得食物和水。每天束缚应激结束后，小鼠被放回原鼠笼。对照组不接受束缚应激，但每天模型组接受束缚应激期间进行断水断粮。最后一次慢性束缚刺激结束后的2天内，对小鼠进行为学测试，以评价造模是否成功。

实验动物 Balb/c小鼠，5周龄，雌性  造模方法        小鼠称重后肌肉注射麻醉，尾部75％乙醇消毒，测量距尾根部2 cm处尾巴直径。在距尾根部1 cm处环行切除尾巴皮肤约3 mm，同时将深筋膜去除。于尾尖皮内注射亚甲基蓝注射液0.1 ml，观察皮肤切除部位与两侧尾部血管伴行的淋巴管显色情况。将显露的淋巴管切除，断端与创缘皮肤均进行烧灼以防止淋巴管再通。手术创口以凡士林纱布包扎，定期观察其愈合情况以及尾部水肿情况。假手术组只在皮肤切口中注射亚甲基蓝注射液0.1 ml，不进行灼烧处理。

实验动物    SPF级8周龄健康雄性BALB/c，体重20±2g  造模方法    小鼠自由饮用5% DSS溶液（5mg DSS溶于100ml蒸馏水），连续7天。正常对照组每天自由饮用蒸馏水（100ml）。鉴定方法：        测定小鼠体重、进行隐血试验和观察粪便性状，计算DAI；造模结束后第2天随机处死几只小鼠，观察结肠充血水肿情况；结肠组织HE染色，观察黏膜充血、水肿、糜烂、溃疡等的形成及炎症细胞浸润。确定模型是否建立成功。

实验动物     BALB/C小鼠，6周龄，20±2g  造模方法      适应性喂养后，禁食12h，在此期间自由饮水。腹腔注射1%链脲酶素（STZ）440mg/kg，小鼠每日注射一次，连续5d，注射后可自由饮食水。禁食8h后，采集尾静脉血检测血糖，空腹血＞16.7mmol/L，则认为造模成功。

实验动物    SPF 级雌性 BALB/c 小鼠，6~8周龄，16~20g  造模方法         于第1、8天以10%卵白蛋白（OVA）致敏液1ml腹腔注射致敏；第15天以OVA激发液开始雾化激发，并将大鼠置于一透明密闭的容器（1000px*1250px*1500px）中，给予大鼠1% OVA  60ml雾化吸入，中等雾量，1次/天，每次30min，每周激发5次，以大鼠出现呼吸加快、口唇发绀、站立不稳等表现为激发成功，连续激发8周。正常对照组以生理盐水进行腹腔注射及雾化吸入。

实验动物    健康，雄性，SD大鼠，（250+50）g 造模方法       大鼠麻醉后，经口气管插管，连接小动物呼吸机。在胸骨左缘扪及心脏搏动处纵行切开皮肤约75px，逐层钝性分离皮下组织、肌肉，于第四肋间开胸并以开睑器固定，小心提起心包并剪开，轻压右侧胸腔，充分暴露心脏、血管。在肺动脉圆锥和左心耳之间，以左冠状静脉主干为标志，用棉签拨起左心耳，于左心耳根部下方2mm处进针，进针深度0.5mm，实验组以6/0缝线结扎左冠状动脉前降支，对照组在相同位置进针穿线，但不结扎动脉。完成后清楚胸腔内积血，并立即关胸并用注射器抽空胸腔内气体，以恢复负压，将肌肉层和皮肤分别缝合。术后给于青霉素80万U肌注3天。

动物规格   SPF 级，成年、雄性，Scid 小鼠  造模方法1、电凝法制作小鼠右侧MCAO 模型（客户没有提供操作方法，以下为文献上的）：大鼠侧卧位固定于手术台，沿左（右）外耳道与左（右）眼外眦连线的重点垂直于连线切开皮肤约50px，手术显微镜下暴露颧骨弓和颞前窝，在颧骨和鳞状骨联合的前下方约2mm处钻孔开颅。显微镜下刺破硬脑膜，在嗅束与大脑中动脉交界处轻挑起大脑中动脉，电凝烧灼嗅束内1mm至大脑下静脉之间的大脑中动脉。假手术仅挑起大脑中动脉而不电凝灼烧。术中注意止血，术后缝合切口，腹腔注射0.2ml生理盐水，以补充术中和术后的体液流失，大鼠保持侧卧位，保温维持肛温在37℃左右，注意保存呼吸道通畅。2、线栓法

1、高脂饮食建立ApoE-/-小鼠AS模型实验动物  第8周龄ApoE-/-雄性小鼠，体重23-25g造模方法       高脂饮食配方：按照3%胆同醇、0.5%胆酸钠、5%白糖、10%猪油、5%蛋黄粉、76.5%标准饲料比例配制而成。        ApoE-/-小鼠36只，普通饲料适应性喂养lW后，随机分配到普通饮食对照组、高脂饮食组、高质饮食+小剂量黄芩苷组和高脂饮食+大剂量黄芩苷组，每组9只。对照组继续给予普通饲料喂养；其余27只用高脂饲料喂养(3-7g/d)，喂养6周后高脂饮食+大、小剂量黄芩苷组给予黄芩苷灌胃，普通饮食对照组和高脂饮食组给予等量生理盐水。  检验：          石蜡切片做HE染色观察粥样硬化血管段的内膜和斑块等病理形态学特征病根据公式计算斑块相对面积（斑块相对面积=斑块面积/血管腔面枳），判断AS模型是否成功。

包埋，就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。 

石蜡包埋白片是指已经切好但尚未染色的片子，是用切片机从蜡块上切下来的一张厚度3-5微米的蜡片，然后贴在载玻片上，由于没有用盖玻片盖在组织上，容易被刮下来，从而破坏形态。石蜡白片未经染色，可以用于HE染色，行免疫组化检查，特殊染色等病理形态学检查；没有封片，因此可以把组织刮下来行基因检测等分子病理学检查。拿到白片要注意，不能用手去触摸蜡片，也不要把玻片打碎，两张白片之间不能相互接触。

一、组织和细胞标本类型：（一） 组织标本类：1、 石蜡切片：组织形态保存好2、 冰冻切片：抗原性保存好（二）细胞标本类：1、组织印片 2、细胞培养片（细胞爬片） 3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。2、组织取材注意事项：（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。（2）注意防止人为因素的影响 刀和剪要快，避免挤压。（3）组织块的大小 厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。三、活细胞标本的制备法（1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。（2）将细胞直接培养在盖玻片上。（3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。 

SYBR Green染料法相对定量SYBR Green染料法：荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。我们公司供利用荧光定量PCR的方法对样品中的基因表达情况进行相对定量或绝对定量分析的技术服务。相对定量 (mRNA表达量分析)：基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和内参基因同时分别进行定量，然后求出对于内参基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。内参基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对内参基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。

原代细胞分离：体外将动物某组织，经酶法或机械处理法分离成单细胞，并在合适的培养基中筛选出特定细胞，使得目的细胞得以生存、生长和繁殖，称为原代细胞分离。 原代细胞分离服务特点:1. 细胞纯度高：原代分离得到的目的细胞蕞高纯度可达到95%以上；2. 细胞活力强：原代分离的细胞一般不能长久传代，提供P0-P3代的细胞，活力达80%以上，无污染；3. 多种鉴定方式：可根据需求提供流式细胞检测、免疫细胞化学、Realtime PCR及蛋白印迹等多种检测方法。

酶联免疫吸附测定（Enzyme linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合，然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。实验样本:血清，血浆，组织，尿液，细胞上清，其它样本保存：-20°保存实验外包:1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

Edu细胞增殖检测EdU可以在DNA复制的时候掺入到新合成的DNA链中,通过一个“Click”反应,把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面,这样我们就能通过检测荧光而知道细胞的增殖情况了。 操作步骤1. 细胞培养：取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段2. 药物处理：根据实验需要进行各种药物处理3. EdU标记：用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液 (试剂A)，制备适量50μM EdU培养基； 注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度             (1~10μM)；           a.如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；             b.配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。4. 细胞固定5. Apollo染色6. 图像获取及分析

实时荧光定量PCR的化学原理1、染料法：SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有激发波长的染料。在游离状态下，SYBR Green I不能发出荧光，一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。2、探针法：TaqMan 探针法是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。PCR实验流程一、引物设计二、RNA提取三、CDNA逆转录四、PCR扩增五、数据导出和分析客户需要提供；基本检测信息：1、样本类型（组织、血液、细胞、DNA、RNA、cDNA）及种属；实验的目的（靶基因的mRNA、MicroRNA或lncRNA定量、单核苷酸多态性分析、甲基化检测）；需要检测基因的中英文名称。2、样本量：PCR检测样本根据不同组织中DNA和RNA丰度高低，所需要的样本量也不同，一般组织样本不低于50mg、细胞样本不低于10^5，全血样本不少于300ul就可以检测多个基因；（建议动物组织或临床样本每组不低于6例，细胞样本建议做三复孔（提取逆转录后扩增时同一样本加三个平行孔），便于统计分析）实验周期：PCR实验周期为10个工作日实验外包:1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

荧光素酶检测荧光素酶报告基因表达的转录调工常备用来研究培养细胞的生物学特性。荧光素梅是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性荧光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的荧光素酶。◇服务内容：1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒；2）将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其他相关的细胞系，如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素没基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比；3）加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，生产荧光素，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的火星，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。客户提供：    荧光素酶，需要培养的细胞系，靶启动子信息，转录因子信息等。实验外包:1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等