实时荧光定量PCR的化学原理
1、染料法:SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有激发波长的染料。在游离状态下,SYBR Green I不能发出荧光,一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强。
2、探针法:TaqMan 探针法是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号。
PCR实验流程
一、引物设计
二、RNA提取
三、CDNA逆转录
四、PCR扩增
五、数据导出和分析
客户需要提供;
基本检测信息:1、样本类型(组织、血液、细胞、DNA、RNA、cDNA)及种属;实验的目的(靶基因的mRNA、MicroRNA或lncRNA定量、单核苷酸多态性分析、甲基化检测);需要检测基因的中英文名称。
2、样本量:PCR检测样本根据不同组织中DNA和RNA丰度高低,所需要的样本量也不同,一般组织样本不低于50mg、细胞样本不低于10^5,全血样本不少于300ul就可以检测多个基因;(建议动物组织或临床样本每组不低于6例,细胞样本建议做三复孔(提取逆转录后扩增时同一样本加三个平行孔),便于统计分析)
实验周期:
PCR实验周期为10个工作日
实验外包:
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
9.SCI论文:SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等