铝诱导痴呆模型是以阿尔茨海默型痴呆的铝中毒假说为基础的。铝具有神经毒性,据报道,阿尔茨海默型痴呆者脑组织内铝的含量明显比正常人高,其原因可能是病人血液中铁蛋白有缺陷,无法将血液中的铝适当的清除,多余的铝进入大脑后参与形成神经元纤维缠结和老年斑,损伤神经元,导致神经元纤维变性,大脑皮质萎缩。模型制作方法: Wistar大鼠,雄性,体重200-220g。大鼠每天灌胃三氯化铝500mg/kg,连续30天。观测指标与分析 : 海马内淀粉样前提蛋白阳性神经元数量计数:与正常组相比,模型组大鼠背海马和齿状回内前提蛋白阳性神经元明显增加。

B16小鼠黑色素瘤人工肺移植模型【实验原理】 B16是C57BL/6小鼠耳根部皮肤上发现的自发性黑色素瘤,以后又在该瘤株中筛选出肺部高转移的集落株,小鼠静脉内移植后主要形成肺转移瘤,肺外转移极少。该瘤细胞注入静脉内,在短时间内直接把大量瘤细胞输入血液循环,不经过癌转移的前几个过程,故称为“人工转移”模型,以区别于“自发性转移”模型。该模型体现了肿瘤细胞进入血液循环后癌转移的几个步骤,对于研究肿瘤细胞在循环系统中的生成能力,瘤细胞附着、穿越靶器官血管的能力和探讨癌转移的器官特异性则有其独特的优势。【操作步骤】 取体外对数生长期的B16小鼠黑色素瘤细胞,经胰酶消化,以磷酸缓冲液配置成瘤细胞悬液,浓度为2.5*105/ml,,相应宿主尾静脉接种0.2ml/只。随机分组进行实验,3周后以颈椎脱臼法处死小鼠,称小鼠体重,剖取肺,称肺重,用解剖显微镜计数各肺叶的转移集落数,转移集落成黑色或灰黑色,相互间不融合。【结果计算】 计算给药组平均肺集落数与阴性对照组的平均肺集落数,计算肺转移抑制率。实验热线：19931682702（同微信）

肿瘤细胞皮下接种成瘤模型操作流程: 1. 挑选合适成瘤的细胞进行培养; 2. 按照一定的细胞量(1×106-107cells)注射裸鼠; 3. 饲养裸鼠至肉眼可见瘤体; 4. 测量瘤体大小(长径,短径,连续2-4周,2-3天一次); 5. 裸鼠拍照、摘取瘤体,进行后续处理。

细胞划痕愈合法是测定细胞迁移运动与愈合能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移及修复能力。特点: 1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。2. 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。传统实验方法 实验步骤: 1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。2. 细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。3. 细胞铺满板底后,用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法最大的缺陷。)4. 吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。 5. 加入无血清培养基,拍照记录。6. 将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。7. 根据收集图片数据分析实验结果。

脑胶质瘤模型制作：1、常规术前大鼠禁食禁水,腹腔注射麻醉后(10%水合氯醛按300mg/kg),将大鼠取俯卧位固定于脑立体定向仪(江湾Ⅱ型)上。2、剪去头顶部眼裂至外耳道之间的毛发,常规消毒铺敷后,于右顶叶处(矢状缝旁开3mm,冠状缝前1mm)用直径1mm的牙科钻小心钻穿颅骨,以20μl微量进样器抽取配好的细胞悬液10μl,缓慢垂直颅骨板进针6mm,回退1mm,缓慢(约2μl/min)注入4μl细胞悬液。3、留针5min后缓慢拔针。用骨蜡封闭骨孔,生理盐水冲洗术野,缝合头皮,常规饲养。

模型制作方法  新西兰白兔,体重2-2.5kg,雌雄兼用。参照图开胸冠状动脉左室支结扎/开放为心肌缺血再灌注模型的分法予以改进。实验前禁食12小时,耳缘静脉麻醉,将其仰卧固定预实验台上。沿颈部正中剪开,实施气管插管。沿胸骨左缘逐层切开胸壁软组织,剪断2-4肋骨,扩开切口,暴露心脏,剪开心包膜,用自制拉钩将心包膜对称、均匀牵拉并固定,在冠状动脉左室支离主动脉根部约8-10mm处,用眼科圆形弯针穿1根2-0丝线以备结扎。观察45min以上,使血液动力学各项指标稳定,收紧结扎线是动脉左室支缺血40min,然后放松结扎线,在灌注120min。观察160min.观测指标与分析1、心肌中INOS反转录PCR测定;2、心肌iNOS蛋白表达水平的检测;3、心肌细胞中iNOSmRNA原位杂交观察。实验专线：19931682702（同微信）

模型制作方法:SD大鼠,7日龄,体重12-16g,雌雄兼用。模型组动物麻醉,结扎左侧颈总动脉,缝合切口,放回原饲养环境中回复2小时,置动物于2000ml密闭容器中,通入含有8%氧气的混合气体,流量为3l/min。2小时后恢复正常供氧。制成左侧大脑半球缺氧动物模型。观测指标与分析:(1)脑组织病理学检查;(2)脑组织细胞凋亡检测;(3)闹组织缺氧诱导因子(HIF)-1amRNA表达水平检测;(4)脑组织半胱天冬酶表达水平的检测;(5)脑组织碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的检测;(6)脑神经干细胞的检测;(7)脑组织胶原纤维酸性蛋白检测;(8)脑组织c-fos基因表达水平;(9)学习、记忆功能检查;(10)脑组织单胺类神经递质含量测定;(11)脑组织MDA和SOD水平测定;(12)脑纹状体组织Par-4蛋白表达水平检测;(13)脑组织钙离子含量测定;(14)热休克蛋白70表达水平检测;(15)脑组织白介素-1β含量测定;(16)脑组织一氧化氮含量测定。实验热线：19931682702（同微信）

一.固定、脱水、包埋取组织放入4%多聚甲醛里面固定3-4小时,时间根据标本大小适当调整。取适当大小组织放入包埋盒中,进行脱水。每个染缸液体体积约200ml,每次脱水可以装20个包埋盒。依次进入:75%酒精1.5小时、95%酒精1.5小时、95%酒精1小时、无水乙醇1.5小时、无水乙醇1小时、二甲苯一号0.5小时、二甲苯二号0.5小时。打开包埋机,分别开启冷台,冷点,石蜡槽,组织槽进行工作。然后用铁饭盒承装石蜡块并放入包埋机组织槽中加热溶解。将脱水后的组织连同包埋盒依次放入机器组织槽中,然后再放入石蜡饭盒一号进行第二遍浸蜡,然后石蜡饭盒二号,进行三次浸蜡。选大小符合的模具,先调整机器滴蜡的速度,不宜过快防止有气泡。然后在模具中滴入液体石蜡,然后从饭盒二号中拿出浸后的包埋盒,打开用镊子取出组织放入模具中。然后用包埋盒的另一半盖住模具,再滴入少许石蜡后放到冷台上冷却。按上述步骤继续包埋下一个蜡块。二.切片、制片打开切片机,固定蜡块(可提前4度冰箱预冷一下),调整刀片和蜡块的距离。然后调整切片厚度,先粗切,看到完整的蜡片并且有组织后切换厚度,调整到自己想要切的厚度。用力均匀,右手摇动切片,左手用毛笔接片。如片子打卷,可以用毛笔按着蜡片的边缘再缓慢切,这样可以得到相对平整的片子。用毛笔和镊子将片子或者带状片子托起,放入水槽中展片,水温在40度左右。然后用防脱片载玻片轻轻捞起,载玻片的边缘尽量不要触碰水槽底部,防止底部气泡上浮残留在片子上。然后标注切片编号放到烤片机上烤片30分钟。三.组织化学染色室温脱蜡、水化:二甲苯一号10分钟、二甲苯二号8分钟、二甲苯三号8分钟、无水乙醇5分钟、90%乙醇3分钟、80%乙醇3分钟、70%乙醇3分钟。蒸馏水3分钟*3次,PBS3分钟*3次。热抗原修复,换新的切片架,放入水化后的切片。配置抗原修复液(一包柠檬酸钠粉末配置2升PBS溶液),用铁饭盒或者锅加热煮沸。温度控制在96-98度。然后将切片放入热锅中15分钟,最后自然冷却室温。PBS五分钟*2次,蒸馏水3分钟*2次。免疫组化笔画圈:取出组织,甩干水分,可用吸水纸吸干水珠。用组化笔画圈围住组织,圆圈完整。灭活内源酶活性:将切片放入湿盒中,盒中加入少量蒸馏水,滴加3%过氧化氢(二抗试剂盒中A一滴或者50微升,剂量详见二抗说明书),室温孵育10分钟。PBS三分钟*3次,蒸馏水水洗三分钟。封闭非特异性位点:甩干水分,吸干水珠,加山羊血清封闭液(二抗试剂盒B一滴或者50微升),放入湿盒内,室温10分钟。甩掉封闭液,滴加一抗盖住组织,然后放入湿盒内4摄氏度过夜。(一抗浓度见抗体说明书,提前稀释后分装,并在负二十度冰箱保存。每张片子一抗剂量不定,看组织面积大小,xxxxx癌组织一张20微升左右。第二天,4度冰箱取出湿盒,室温复温30分钟,PBS三分钟*三次,蒸馏水洗涤三分钟。甩干水分,吸干水珠,滴加二抗(二抗试剂盒C)一滴或者50微升,室温孵育10分钟。PBS三分钟*三次,蒸馏水水洗三分钟。每张片子滴加一滴或者50微升链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液(二抗试剂盒D),室温孵育10分钟,PBS三分钟*三次,蒸馏水水洗三分钟。每张片子滴加两滴或者100微升DAB溶液,显微镜下观察3-10分钟。染色合适即可终止染色,自来水冲洗。苏木素复染,1-2分钟,细胞核变蓝色即可终止,自来水或者PBS冲洗反蓝(可用0.5%氨水反蓝)。1%盐酸酒精分化3秒,自来水冲洗三分钟。脱水:70%酒精1分钟、80%酒精1分钟、95%酒精2分钟、无水乙醇4分钟、二甲苯一号3分钟、二甲苯二号3分钟。凉干片子后滴加适量中性树胶封片,盖上盖玻片,小心气泡。晾干半天即可。显微镜/全景扫描下拍照实验热线：19931682702（同微信）

简介:蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。原理:Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。Western Blot显色的方法主要有以下几种:i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下(二抗用HRP标记):反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。实验热线：19931682702（同微信）

细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。细胞的生长需要营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。细胞培养泛指所有体外培养,其含义是指从动物活体体内取出组织,于模拟体内生理环境等特定的体内条件下,进行孵育培养,使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域,成为最重要的基础科学之一。优点1、能长期传代,保持活性,便于监控检测结构功能和生命活动。2、培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响3、可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化(变异、分化)。可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。4、研究范围和细胞来源广泛,选择性广。5、不同代次细胞可长期保存,既可开展同代次不同条件和方法研究,又可观察不同代次的动态变化。6、耗资少、经济、成本低、可大量培养,利于生物制品的生产。实验热线：19931682702（同微信）