化妆品中的功效活性成分是通过经皮吸收到达皮肤各层而发挥作用的，许多在体外试验中表现良好的活性物质在消费者实际使用过程中并未达到理想的功效结果，这与活性物的经皮吸收性能密切相关。

斑马鱼的皮肤结构与人体高度相似，因此活性成分在活体斑马鱼上的经皮吸收结果可以反映在人体皮肤上的吸收状况。

【评价原理】

    通过高效液相色谱法定量检测养鱼用水在孵育斑马鱼一段时间后的活性成分含量变化反映活性成分经斑马鱼的皮肤吸收状况，含量的减少量即为斑马鱼的经皮吸收量。

【实验方案】

我们将受试的斑马鱼分为三组，分别为正常对照组（不含活性物）、活性物对照组（不含鱼）和受试物组。在相同的温、湿度条件下孵育一段时间，在孵育前后分别检测各组中活性成分的含量。

【结果展示】

图1. 活性成分在不同组别中的色谱图

可以看到，受试物组的斑马鱼养鱼用水中的活性成分，在孵育后发生减少，减少量即为经皮吸收量。

【评价结论】

1、正常对照组的鱼水中未检测到活性成分，说明该方法不存在基体干扰；

2、活性物对照组孵育前后活性物含量无明显变化，说明在没有斑马鱼存在的孵育条件下活性物含量不发生变化；

3、受试物组，孵育后活性物含量明显低于孵育前，说明活性成分被经皮吸收至斑马鱼体内，经皮吸收量即为鱼水中的减少量。

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【评价原理】

斑马鱼与人类生理结构和功能高度相似。斑马鱼消化道的解剖结构和细胞结构与人类消化道相似，具有同心圆层的内上皮、结缔组织、环状肌肉和外纵肌层。因此，可利用斑马鱼模型评价调节胃肠功效。

饲喂特异性的荧光染料（呈红色），在斑马鱼体内荧光染料不被其他组织干扰，且不会被吸收，荧光染料的残留量取决于胃肠道蠕动功能。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用胃肠调节剂组。模型对照组与服用胃肠调节剂组都摄入了等量的荧光染料（荧光染料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用胃肠调剂组在摄入荧光染料的之后摄入多潘立酮（吗丁啉）之类的胃肠调节剂。

服用一段时间胃肠调节剂后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼胃肠道荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胃肠道表型图

可以看到，胃肠调节剂组肠道荧光强度明显比模型对照组弱，说明胃肠调节剂通过促进胃肠道蠕动将荧光染料排出体外。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用胃肠调节剂组的胃肠道荧光情况比模型对照组明显减弱。

2.本实验证实了多潘立酮（吗丁啉）具有明显的胃肠调节功效。

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【评价原理】

蛋黄粉中60%为脂类，用蛋黄粉喂食斑马鱼，可以使斑马鱼血液中的脂肪含量快速升高，从而建立斑马鱼高血脂症模型。

经过油红O特异性脂肪染色（与组织内甘油三酯等脂肪滴结合呈橘红色），高血脂斑马鱼血管内肉眼可见明显的脂质聚积，通过静脉注射，可见荧光标记胆固醇的积累。

我们评价斑马鱼降低血脂功效有4个指标：1.斑马鱼血脂表型图；2.斑马鱼总甘油三脂含量；3.斑马鱼胆固醇表型图；4.斑马鱼总胆固醇含量。

【实验方案】

我们先将测试斑马鱼喂食蛋黄粉和荧光标记的胆固醇（蛋黄粉和荧光标记的胆固醇通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内），建立高血脂模型后，再将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用降脂剂组，服用降脂组摄入阿托伐他汀钙、辛伐他汀、洛伐他汀之类的降脂剂。

服用一段时间降脂剂后，我们对斑马鱼整体做脂肪特异性染色，观察体内甘油三酯聚积的变化，以及观察体内胆固醇的聚积情况，同时利用甘油三酯和胆固醇试剂盒检测斑马鱼体内甘油三酯和胆固醇含量的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼血脂表型图

橘红色脂滴为血脂

可以看到，服用降脂剂组的血脂聚积情况与模型对照组比较明显减少。

图2. 斑马鱼胆固醇表型图

红色为荧光胆固醇

可以看到，服用降脂剂组的胆固醇荧光强度与模型对照组比较明显减少。

图3. 斑马鱼总胆固醇含量（mmol/gprot）

与模型对照组比较，** p < 0.01

从生化指标可以看出，服用降脂剂组的斑马鱼整体总胆固醇含量与模型对照组比较明显降低。

图4. 斑马鱼甘油三酯含量（mmol/gprot）

与模型对照组比较，*** p < 0.001

从实验结果可以看出，服用降脂剂组的斑马鱼整体甘油三酯含量与模型对照组比较明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用降脂产品组的血脂聚积情况与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了阿托伐他汀钙、辛伐他汀、洛伐他汀类降脂产品具有显著的降脂降胆固醇作用。

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【评价原理】

炎症是免疫系统对组织损伤和感染的一种反应，主要特点就是白细胞（粒细胞、巨噬细胞）会聚集在感染组织周围。斑马鱼的免疫系统非常类似于哺乳动物。创伤发生时，中性粒细胞、巨噬细胞对创伤性炎症几乎同时作出应答，中性粒细胞迁移速度快，先募集到损伤部位，随后巨噬细胞才到达。数小时后，炎症开始消退，巨噬细胞和中性粒细胞离开损伤部位。硫酸铜损伤斑马鱼神经丘（斑马鱼体表侧线器的末稍器官），造成神经丘细胞死亡，斑鱼的中性粒细胞发生免疫应答，聚集在神经丘周围，吞噬死亡的细胞 。

采用转基因中性粒细胞荧光鱼（呈绿色），可在荧光显微镜在观察到斑马鱼体表侧线上的中性粒细胞比正常斑马鱼明显增多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中正常对照组未摄入硫酸铜，模型对照组和服用/注射抗炎药组均摄入硫酸铜（硫酸铜通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射抗炎药组在摄入硫酸铜之前摄入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸之类的抗炎药。

服用一段时间抗炎药后，我们观察斑马鱼体表侧线上的中性粒细胞数量，并通过Q-PCR检测TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体表侧线上中性粒细胞表型图

黄色箭头所指为中性粒细胞

可以看到，服用/注射抗炎药组侧线上中性粒细胞与正常对照组相似，未出现中性粒细胞募集情况。

以IL-1β基因为例，提供柱状图。

图2. 斑马鱼IL-1β基因相对表达量

与模型对照组比较，**p < 0.01

可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，IL-1β基因表达明显下调。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗炎药组侧线上中性粒细胞数量与正常对照组数量相当，未出现模型对照组中性粒细胞募集情况，且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症因子明显下调。

2.本实验证实了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸具有显著的抗炎作用，且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。持续的高血糖水平导致糖尿病并发症发生，高血糖累及中枢和周围神经病变，出现神经炎症。感觉神经受损较为多见，出现麻木、触电、发热、蚁行感，运动神经受损则出现肌力下降。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病的神经并发症。

用中性粒细胞荧光与运动神经荧光杂交品系斑马鱼（呈绿色），患有高血糖的斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目增多，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖产品。

服用一段时间降糖产品后，我们用荧光显微镜观察斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目。

【结果展示】

图1. 斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目

黄色框线内绿色荧光点代表中性粒细胞

可以看到，模型对照组的周围运动神经中性粒细胞数目较正常对照组明显增多，而降糖产品组斑马鱼明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了松花蛹虫草之类的降糖产品具有神经炎症消退功效。

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【评价原理】

斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。当生物暴露在环境污染物中，生物可能会发生氧化应激，主要表现为活性氧（ROS）产生和消耗的不平衡。在需氧生物的活细胞中，活性氧被一种由水和脂溶性低分子量自由基清除剂、特异性抗氧化酶组成的抗氧化防御机制解毒。

 应用ROS特异性荧光检测试剂，它的水解产物能被ROS氧化为高荧光物质，用多功能酶标仪检测荧光值反映氧化应激的程度。本方法已被授予国家发明专利。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是底物对照组、正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内），并加入ROS特异性荧光检测试剂。

服用供试品一段时间后，我们使用酶标仪对斑马鱼体内ROS进行荧光定量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内ROS荧光值

可以看到，服用供试品组斑马鱼体内荧光值比正常对照组有明显升高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的斑马鱼ROS水平明显高于正常对照组，与正常对照组存在显著性差异。

2.本实验证实了该供试品诱发斑马鱼氧化应激。

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【评价原理】

多发性硬化是以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫病，可能是遗传易感个体与环境因素作用而发生的神经免疫过程，由于其发病率较高，成慢性病程和倾向于年轻人罹患，而成为最重要的神经系统疾病之一。研究表明斑马鱼的髓鞘少突胶质细胞的结构特性和细胞谱系关系与哺乳动物具有高度的可比性。斑马鱼体内与髓鞘形成相关的基因与哺乳动物具有很好的同源性。尽管这些基因与哺乳动物有些不同，但高度保守的基因序列足够表达出功能类似的蛋白。

溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，能诱导斑马鱼脑脊髓神经细胞髓鞘损伤。经过特异性荧光染色，髓鞘损伤的斑马鱼荧光比正常斑马鱼弱很多，可以在荧光显微镜下明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用髓鞘保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用髓鞘保护剂组都摄入了等量的溴化乙锭（溴化乙锭通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用髓鞘保护剂组先摄入溴化乙锭再摄入L-甲状腺素钠之类的髓鞘保护剂。

服用髓鞘保护剂后，我们对斑马鱼整体进行荧光染色，对斑马鱼髓鞘进行定量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼多发性硬化症表型图

黄色箭头为斑马鱼髓鞘细胞

可以看到，模型对照组的髓鞘细胞荧光强度较正常对照组明显减弱，服用髓鞘保护剂组的髓鞘细胞荧光强度明显增强。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用髓鞘保护剂组的髓鞘细胞荧光强度明显增强，并未出现模型对照组明显髓鞘损伤的情况。

2.本实验证实了L-甲状腺素钠具有明显治疗多发性硬化症的功效。

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【评价原理】

斑马鱼心血管系统的发育与人高度相似，虽然斑马鱼是单心房单心室，但其心脏结构及功能与人高度保守。同时，由于斑马鱼具有透明易观察等优点，开始被大量应用于心血管疾病研究和药物心血管毒性评价当中。

羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性，诱发心脏出血。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用改善心脏出血药物组都摄入了等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。药物组在摄入辛伐他汀的同时摄入淫羊藿苷之类的改善心脏出血药物。

服用改善心脏出血药物一段时间后，我们通过解剖显微镜对斑马鱼进行心脏出血发生率的统计；对斑马鱼进行行为学分析；通过心跳血流分析系统采集斑马鱼血流影像，并分析血流速度改善作用。

【结果展示】

图1. 斑马鱼改善心脏出血表型图

可以看到，模型对照组的斑马鱼心脏有明显的出血，服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况与正常对照组比较相似，没有明显的心脏出血。

图2. 斑马鱼运动改善表型图

可以看到，模型对照组的运动距离明显减少，服用改善心脏出血药物组的运动距离与正常对照组比较相似，没有明显的运动减少。

图3. 斑马鱼改善血流柱状图

可以看到，模型组的血流速度明显减慢，服用改善心脏出血药物组的血流速度与模型对照组比较血流速度增加，没有明显的血流速度减慢。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况、运动距离、血流速度均有明显改善作用。

2.本实验证实了淫羊藿苷具有明显改善心脏出血的功效。

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【评价原理】

甲萘醌是一种氧化剂，通过细胞内还原酶系统（微粒体的P450还原酶和线粒体的呼吸链还原酶），产生不稳定的半醌，进入氧化还原循环，产生活性氧族。用甲萘醌可诱导斑马鱼建立氧化应激模型。

经过特异性荧光染色（呈绿色，主要定位于细胞核和线粒体），发生氧化应激反应斑马鱼全身明显比正常斑马鱼绿很多，可以用荧光显微镜下观察到斑马鱼体内的活性氧含量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和抗氧化剂组。其中正常对照组未摄入甲萘醌，模型对照组与抗氧化剂组都摄入了等量的甲萘醌（甲萘醌通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。抗氧化剂组在摄入甲萘醌之后摄入还原型谷胱甘肽之类的抗氧化剂。

服用一定时间抗氧化剂后，我们对斑马鱼整体做活性氧染色，观察整体绿色荧光强度的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼活性氧表型图

绿色荧光为活性氧

可以看到，抗氧化剂组的荧光强度较正常对照组强，但较模型对照组明显减弱。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，抗氧化剂组的荧光强度比模型对照组弱。

2.本实验证实了还原型谷胱甘肽具有明显抗氧化功效。

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【评价原理】

由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性，而且与其他的动物模型相比，斑马鱼具有个体小适合高通量化学筛选、幼鱼身体透明易于观察骨骼发育的特点，所以近年来以斑马鱼为模型的骨骼研究逐渐成为这一领域的热点。斑马鱼从前向后的脊椎发育过程是非连续的，而是分成两个不同的区域：前域（包括前3块椎骨）和后域（包括第4-31块椎骨）。将斑马鱼脊椎骨钙化过程分成两个不同区域是基于第2和第3椎骨的出现晚于第4椎骨。我们利用斑马鱼骨骼发育的规律，摄入生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨发育会加快。

脊椎骨染色应用与钙特异性结合的荧光染料（呈绿色），经荧光显微镜观察脊椎骨的数量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用生长发育促进剂组（维生素D3、碳酸钙之类的生长发育促进剂通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间生长发育促进剂后，我们对斑马鱼做骨骼特异性荧光染色，观察斑马鱼脊椎骨的发育情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼脊椎骨荧光图

黄色虚线区域为定量的脊椎骨

可以看到，服用生长发育促进剂的脊椎骨数量明显比正常对照组增多。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨数量比正常对照组增多。

2.本实验证实了维生素D3、碳酸钙具有明显促进生长发育功效。

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