实验原理DNA甲基化存在于大多数真核生物中，一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区，起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%处于基因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶，在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基，在反应完成时被保留，我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序，就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高，是甲基化检测的金标准。实验流程

实验原理早期的shRNA载体多采用RNA聚合酶III型启动子介导shRNA的表达，RNA聚合酶III型启动子如鼠源的U6启动子和人源的H1启动子可以在哺乳动物细胞中表达小分子RNA。随着miRNA干扰机制的深入研究，发展出第二代shRNA载体，即采用RNA聚合酶II型启动子CMV表达含侧翼序列的miRNA模拟物。该载体模拟miRNA的加工，表达出来的shRNA进入RISC沉默复合物的效率要比RNA聚合酶III型启动子表达的shRNA高数十倍，抑制效率更好，且可以和EGFP协同表达，方便观察转染效率。实验流程

实验原理miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区，抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端，与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞，先后加入两种底物荧光素，通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认miRNA对靶基因的调控效果。实验流程

ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务技术流程1、把抗原或抗体包被在固相载体上2、加入受检标本反应3、加入酶标抗原或抗体4、加入底物催化酶显色5、加入终止液终止显色反应6、通过比色进行抗原或抗体的定性定量分析客户须知a.液体类标本（细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等）；b.样本量：每个样本收集体积=120ul*检测指标数；c.样本保存：请尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集样本，请将样本及时分装标号后，置-20℃或-70℃保存；d.请提前告诉我们：您样本的种属（人、大鼠、小鼠、兔、猪等）、样本数量、待测指标。报告内容及标准a.ELISA标准曲线；b.详细的实验步骤；c.完整的实验报告（试剂耗材，实验方法，实验结果及结果说明）。收费标准及服务周期收费标准及服务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变，详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。质量保证：适合检测包括血清、血浆、尿液、细胞培养上清、组织匀浆，细胞裂解液等标本灵敏度极高。

SNP（single nucleotide polymorphism），即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态，已广泛应用于群体遗传学和疾病相关基因的研究，在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中发挥着重要作用。直接法测序在SNP的检测方法中，通过PCR扩增后直接测序是十分有效的方法，被公认为是SNP检测的“金标准”。在测序峰图中，纯合型SNP的测序峰为单一峰型，而杂合型的为双峰，所以非常容易区分。采用这种方法，SNP检出率接近100%。技术路线优势a.  检出率接近100%。b.  免费提供SNP位点查找，可以发现新的SNP位点。c.  实验周期短：正常情况下一周内出结果。d.   结题报告送样要求a.  请提供血液、组织或DNA样品，及准确的基因名称（基因ID）、序列或者详细的SNP位点信息。b.  血液：样品需用EDTA抗凝，总量大于1 ml，采集后于－20℃或－80℃保存。c.  组织：样品可为新鲜组织（最好保存于－80℃）、石蜡包埋的组织或95%乙醇中固定的组织，总量≥10mg。样品－70℃邮寄至本公司（干冰或液氮运送）以保证样品质量。d.   基因组DNA：浓度≥20ng/μl，总体积≥20μl。所需样品量根据实验要求做相应调整。

实验原理基因的化学合成即人工合成寡核甘酸片段，通过PCR拼接的方法，获得所需要的基因表达序列或者启动子等功能性元件片段。基因化学合成使合成任何基因序列成为可能。实验流程

体外定点突变技术通过PCR等方法向目的DNA片段中引入所需变化，包括碱基的添加、删除、点突变等。此技术能迅速、高效的提高DNA所表1  基因定点突变体外定点突变技术通过PCR等方法向目的DNA片段中引入所需变化，包括碱基的添加、删除、点突变等。此技术能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是实验室中改造、优化基因常用的手段，也是研究蛋白质结构和功能之间复杂关系的有力工具。可根据不同的研究目的，为您量身定做不同的实验方案。1基因定点突变服务特色a.  可对任何位置的位点进行突变。b.  可对含有重复序列或高GC序列进行突变。  提供结果a.  高纯度质粒，总量约2μgb.  含有重组质粒的菌液c.  测序原始图谱和序列d.  实验报告（实验流程、质控点）2  PCR定点突变实验原理PCR定点突变是根据突变方案设计合成覆盖突变位点的双向引物，通过PCR向目的DNA片段中引入所需的变化，如碱基的插入、删除、替换等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。实验流程

实验原理miRNA是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码RNA，大小约20~25个核苷酸。我们根据成熟miRNA序列信息，合成含有茎环结构的前体miRNA连接至含侧翼序列的表达载体中，将其转染/病毒包装感染进入细胞后，由II型启动子（CMV）启动表达，经核酸酶的剪切加工，组装RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。实验流程

实验原理与化学合成的siRNA和shRNA质粒载体相比，利用慢病毒或腺病毒表达shRNA，一方面可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞，提高shRNA导入细胞的效率，另一方面病毒介导可延长RNAi的时间，尤其慢病毒感染后可以整合到宿主细胞基因组，进行稳转筛选。实验流程

实验原理继植物中发现基因沉默现象后，动物细胞中的双链RNA诱导的基因沉默现象也被阐明，并于2006年获得诺贝尔医学奖的肯定，足以说明RNAi技术在医学领域即将发挥的开创性作用。siRNA（Small interfering RNA)是21-25核苷酸的小分子RNA，由Dicer酶加工双链RNA而成。siRNA与体内多种酶类结合形成RNA诱导的沉默复合物（RISC），从而激发与之互补的目标mRNA的降解。天然的RNAi现象存在于包括人类在内的动植物体内，在调节基因表达和预防病毒感染方面起到重要作用。实验流程