实验试剂 PBS，0.5%Triton X-100(DPBS配)，3%H2 O2 ，封闭血清 (5%正常二抗血清DPBS液)，一抗(PBS配，滴度1：200，湿盒)，二抗工作液(湿盒)，C液(湿盒)，DAB显色液，苏木素，树胶实验设备 20mm盖玻片，90mm培养皿，电子显微镜实验步骤 1. 将已消毒的20mm盖玻片置于90mm培养皿中，按2×104 /ml的细胞密度将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，5天后进行免疫细胞组织化学染色鉴定。2. PBS清洗标本 3次各 1 min。3. 冰丙酮固定 15 min。4. 空气干燥 5min。5. PBS清洗标本 3次各 2 min。6. 0.5%Triton X-100(DPBS配) 孵育 1次 20 min。7. PBS清洗标本 3次各 2 min。8. 3%H2 O2 孵育 15 min。9. DPBS清洗标本 3次各 2 min。10. 封闭血清孵育(5%正常二抗血清DPBS液)20min。11. 一抗孵育(PBS配，滴度1：200，湿盒)4℃过夜或37℃ 60 min。阴性对照最好用一抗来源血清，否则用PBS液12. PBS清洗标本 3次各 5 min。13. 二抗工作液孵育(湿盒) 37℃，30 min。14. PBS清洗标本 3次各 5 min。15. C液(湿盒) 37℃，30 min。16. PBS清洗标本 3次各 5 min。17. DAB显色(避光，镜下观察至棕色)约3~10min。18. 蒸馏水洗 2次 1 min。19. 苏木素复染 0.5~1min。20. 自来水洗 30min。21. 树胶封片。注意事项 1. 良好的细胞爬片是进行免疫组织细胞的基础，要获得良好细胞爬片须注意：   1) 对于粘附分子较少的细胞爬片时间要达5天以上，这样细胞爬片才较牢固，冲洗时不易脱片；   2) 接种的细胞密度适中，以2×104 /ml为宜，若细胞密度太高，5天后细胞连接成片冲洗时易脱片；2. 冰丙酮固定后玻片可密闭保存于4℃冰箱，冰丙酮固定时会使细胞收缩，可用80%冰丙酮或2%多聚甲醛固定。3. 冲洗时只须轻轻振荡培养皿，(不可用吸管太用力吹，易脱片)。4. 加一抗、二抗后冲洗时第一次须将玻片倾斜。5. Triton X-100表面活性剂，脱去细胞膜中最主要的成分脂质，对于抗原表达在胞浆或胞核者方使用，对于抗原表达在胞浆者时间要控制好，使其破坏细胞膜而核膜破坏较少。 

原代细胞分离：体外将动物某组织，经酶法或机械处理法分离成单细胞，并在合适的培养基中筛选出特定细胞，使得目的细胞得以生存、生长和繁殖，称为原代细胞分离。 原代细胞分离服务特点:1. 细胞纯度高：原代分离得到的目的细胞蕞高纯度可达到95%以上；2. 细胞活力强：原代分离的细胞一般不能长久传代，提供P0-P3代的细胞，活力达80%以上，无污染；3. 多种鉴定方式：可根据需求提供流式细胞检测、免疫细胞化学、Realtime PCR及蛋白印迹等多种检测方法。

Edu细胞增殖检测EdU可以在DNA复制的时候掺入到新合成的DNA链中,通过一个“Click”反应,把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面,这样我们就能通过检测荧光而知道细胞的增殖情况了。 操作步骤1. 细胞培养：取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段2. 药物处理：根据实验需要进行各种药物处理3. EdU标记：用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液 (试剂A)，制备适量50μM EdU培养基； 注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度             (1~10μM)；           a.如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；             b.配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。4. 细胞固定5. Apollo染色6. 图像获取及分析

细胞划痕介绍：细胞划痕是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。 细胞划痕内容：材料：6 孔板（其他的也可以，但感觉6孔比较好，大小适中）、marker笔直尺、20微升枪头（灭菌）、无血清培养基、PBS步骤：能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）1．先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2．在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。3．第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。4．用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。5．放入37度5%co2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。 细胞划痕注意事项：一般做划痕实验，都是在无血清或者底血清状态下培养的，否则细胞增殖就不能忽略。按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，这就解决了前后观察时位置不固定的问题。

细胞粘附是指细胞之间及细胞与细胞外基质之间的粘附。细胞粘附是维持形态结构与功能的生物现象，是细胞间信息交流的一种形式。而信息交流的可溶递质称细胞粘附分子(Cell Adhesion Molecule，CAM)。CAM是一类独立的分子结构，是通过识别与其粘附的特异性受体而发生相互间的粘附现象。细胞的生长、发育、分化及代谢状态和外界细胞因子、免疫、动脉粥样硬化、炎症介质反应等均可影响细胞粘附，细胞粘附也可能是肿瘤细胞易发生浸润、转移等现象的分子基础。样本的保存与运输复苏好的细胞，灌满培养基常温运输；冻存细胞液氮保存运输；实验外包: 1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变可分为三个时期：I期，细胞核呈波纹状或折缝样，部分染色质浓缩；II期，细胞核染色质高度凝聚、边缘化；III期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。Hoechst为一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，与双链DNA结合后在荧光显微镜下能够观察细胞核的形态变化，常被应用于细胞凋亡的检测。细胞的保存于运输；复苏好的细胞，灌满培养基常温运输；冻存细胞液氮保存运输；实验外包: 1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等