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应用:目的基因表达的差异检测目的基因表达的亚细胞定位目的基因表达的相互作用研究目的基因瞬转/稳转细胞系的蛋白定位研究实验原理细胞免疫化学与免疫组织化学实验都是依据抗原抗体反应和化学显色的原理,采用标记的特异性抗体对组织或细胞内抗原的分布进行原位检测技术。细胞免疫化学将培养处理后的细胞爬片、固定、破膜、封闭后,加入一抗与抗原蛋白结合,再加入标记有荧光素的二抗与一抗进行反应,最后通过激光共聚焦扫描显微镜进行荧光拍摄来显示细胞中靶蛋白的表达变化和定位实验流程

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ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务技术流程1、把抗原或抗体包被在固相载体上2、加入受检标本反应3、加入酶标抗原或抗体4、加入底物催化酶显色5、加入终止液终止显色反应6、通过比色进行抗原或抗体的定性定量分析客户须知a.液体类标本(细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等);b.样本量:每个样本收集体积=120ul*检测指标数;c.样本保存:请尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后,置-20℃或-70℃保存;d.请提前告诉我们:您样本的种属(人、大鼠、小鼠、兔、猪等)、样本数量、待测指标。报告内容及标准a.ELISA标准曲线;b.详细的实验步骤;c.完整的实验报告(试剂耗材,实验方法,实验结果及结果说明)。收费标准及服务周期收费标准及服务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变,详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。质量保证:适合检测包括血清、血浆、尿液、细胞培养上清、组织匀浆,细胞裂解液等标本灵敏度极高。

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是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术。其基本原理是在电场的作用下将SDS-PAGE电泳分离的蛋白质转移至一种固相支持物,然后用特异性抗体来检测目的蛋白在样本中的表达情况。其检测蛋白质的灵敏度为ng级,并可以对目标蛋白进行定性和半定量的分析。主要实验步骤如下:a.  样本准备:样本背景分析,蛋白质的抽提和定量。b.  SDS-PAGE电泳。c.  蛋白质转移至一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)。d.  封闭,一抗,二抗孵育。e.  化学发光法显色蛋白,分析结果。f.  提供详细的实验报告。客户需要提供的物品:a.  待检样本及相关背景说明。b. 特异性一抗及对应的二抗。

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实验原理ORF克隆是指从样本组织或细胞中抽提总RNA,反转录,设计合成特异性引物后,通过RT-PCR扩增获得目的基因的DNA序列,获得编码全长蛋白质序列的DNA序列:即从起始密码ATG到终止密码子,不含5′和3′UTRs非翻译区及内含子序列。实验流程

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技术原理:数字PCR( 也可称单分子PCR)包括两部分内容:PCR 扩增和荧光信号分析。在PCR 扩增阶段,与传统技术不同,数字PCR需要将样品稀释到单分子水平,并平均分配到几十至几万个单元中进行反应。不同于qPCR 对每个循环进行实时荧光测定的方法,数字PCR 技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。数字PCR的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值,因此不受扩增效率的影响,也不必采用看家基因和标准曲线,具有很好的准确度和重现性,可以实现绝对定量分析。在未来十年内,医学保健的目标是提供优质高效的个性化医疗。PCR 方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR,数字PCR 技术有着无可比拟的优势和广泛的应用前景。 数字PCR检测原理数字PCR检测流程应用领域:a.  突变/稀有变异检测(Mutation/Rare variant detection)b.  拷贝数变异(Copy-number variation)c.  进入外周循环(包括血液和粪便)的肿瘤组织核酸分析d.  无创产前筛查:e.  转化移植检测。f.  药理学(Pharmacogenetics)g.  基因表达分析(Gene ex pression analysis)-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品h.  线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析i.  数字PCR可以验证二代测序(NGS)

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实验原理与化学合成的siRNA和shRNA质粒载体相比,利用慢病毒或腺病毒表达shRNA,一方面可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞,提高shRNA导入细胞的效率,另一方面病毒介导可延长RNAi的时间,尤其慢病毒感染后可以整合到宿主细胞基因组,进行稳转筛选。实验流程

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实验原理miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区,抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端,与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞,先后加入两种底物荧光素,通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认miRNA对靶基因的调控效果。实验流程

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