中成药及其提取物的安全性评价,是药物后续开发过程中的关键环节之一。基础研究证实,中华跌打丸具有消肿止痛、舒筋活络、止血生肌、活血祛瘀、挫伤筋骨、新旧瘀痛、创伤出血、风湿瘀痛的炎症反应作用。目前,鬼画符作为中华跌打丸 32 味药材之一,其物质基础与药效机制研究尚不明确,迫切需要采用现代研究手段进一步完善其功效评价,以便为鬼画符的开发应用和阐述中华跌打丸的药理药效提供科学依据。
日前,由环特生物与广西中恒创新医药研究有限公司科研团队联合发表研究论文——《中华跌打丸及其药材鬼画符提取物的抗炎作用评价》,这是环特生物发布的第100篇期刊研究论文!
一、引言
中华跌打丸为广西梧州制药(集团)股份有限公司生产的产品,主要应用于消肿止痛、舒筋活络、止血生肌、活血祛瘀、挫伤筋骨、新旧瘀痛、创伤出血、风湿瘀痛。鬼画符作为中华跌打丸32味药材之一,为大戟科(Euphorbiaceae)黑面神属植物黑面神 Breynia fruticosa(L.) Hook. f. 的干燥全株,分布于浙江、福建、广东、海南、广西、贵州、云南等地。其味微苦,性凉,有小毒,归脾、胃经,具有清湿热、化瘀滞的功效。常用于治疗腹痛吐泻、疔毒、疮疖、湿疹、皮炎、漆疮、鹤膝风、跌打肿痛。广东和广西地区用其治疗支气管炎,具有良好的疗效。
目前,鬼画符的物质基础与药效机制研究尚不明确,迫切需要采用现代研究手段进一步完善其功效评价。斑马鱼是一种脊椎动物,与人类基因同源性高达 87%,可运用于动物实验且实验结果在人体适用性较高,是理想的模式生物。故本研究采用硫酸铜诱导建立转基因中性粒细胞荧光斑马鱼炎症模型对中华跌打丸与鬼画符各提取物进行抗炎作用评价,旨在进一步明确鬼画符和中华跌打丸抗炎作用的药效物质基础,为鬼画符的开发应用和阐述中华跌打丸的药理药效提供科学依据。
二、实验结果
模型对照组斑马鱼炎症部位中性粒细胞数 18 个,与正常对照组(4 个)比较 P<0.001,显示硫酸铜诱发斑马鱼炎症模型成功。80 µM 吲哚美辛组斑马鱼炎症部位中性粒细胞数 11个,与模型对照组比较 P<0.001,其炎症消退作用为 39%,说明吲哚美辛对炎症斑马鱼有明显抗炎作用。
中华跌打丸浓度为 222 µg/mL、667 µg/mL 和 2000 µg/mL时,斑马鱼炎症部位中性粒细胞数分别为 10 个、6 个和 3 个,与模型对照组(18 个)比较 P 均<0.001,其炎症消退作用分别为 44%、67%和 83%,说明中华跌打丸在本实验浓度条件下对炎症斑马鱼有明显抗炎作用。
鬼画符95%乙醇提取物浓度为28 µg/mL、83 µg/mL和250 µg/mL 时,斑马鱼炎症部位中性粒细胞数分别为 10 个、6 个 和 5 个,与模型对照组(18 个)比较 P 均<0.001,其炎症消退作用分别为 44%、67%和 72%,说明鬼画符 95 乙醇提取物在本实验浓度条件下对炎症斑马鱼有明显抗炎作用。
鬼画符 50%乙醇提取物的浓度为 3.47 µg/mL、10.42 µg/mL和 31.25 µg/mL 时,斑马鱼炎症部位中性粒细胞数分别为15 个、11 个和 8 个,与模型对照组(18 个)比较 P<0.05 &P<0.001&P<0.001,其炎症消退作用分别为 17%、39%和56%,说明鬼画符 50%乙醇提取物在本实验浓度条件下对炎症斑马鱼有明显抗炎作用。
鬼画符水提取物浓度为14 µg/mL、42 µg/mL和125 µg/mL时,斑马鱼炎症部位中性粒细胞数分别为 9 个、9 个和 5 个,与模型对照组(18 个)比较 P 均<0.001,其炎症消退作用分别为 50%、50%和 72%,说明鬼画符水提取物在本实验浓度条件下对炎症斑马鱼有明显抗炎作用。
鬼画符水、50%乙醇、95%乙醇混合物浓度为 28 µg/mL、83 µg/mL 和 250 µg/mL 时,斑马鱼炎症部位中性粒细胞数分别为 12 个、7 个和 6 个,与模型对照组(18 个)比较 P 均<0.001,其炎症消退作用分别为 33%、61%和 67%,说明鬼画符水、50 乙醇、95 乙醇混合物在本实验浓度条件下对炎症斑马鱼有明显抗炎作用。详见图 1、图 2 和表 2。
三、实验结论
本实验组已对中华跌打丸及鬼画符各提取物炎症斑马鱼测定浓度(MTC)进行测定,根据各实验组的斑马鱼死亡数量与毒性情况得到中华跌打丸、鬼画符 95%乙醇提取物、鬼画符 50%乙醇提取物、鬼画符水提取物和鬼画符水、50%乙醇、95%乙醇混合提取物的 MTC 分别为 2000 µg/mL、250 µg/mL、31.25 µg/mL、125 µg/mL、250 µg/mL,分别选取各实验组 1/9、1/3 和 1/1 的 MTC 浓度作为中和跌打丸及鬼画符提取物对硫酸铜诱导炎症模型斑马鱼抗炎作用评价的实验浓度。
实验结果表明,中华跌打丸和鬼画符各提取物对硫酸铜诱导的炎症斑马鱼均表现出显著的抗炎作用,且均呈剂量依赖性。与吲哚美辛阳性对照组相较,除鬼画符 50%乙醇提取物 3.47 µg/mL 浓度组外,其余各组对炎症斑马鱼的抗炎作用更佳,推测鬼画符药材可能是中华跌打丸抗炎作用的主要成分之一。
由于中华跌打丸组方药味数众多,后续还需进一步开展其他药材的抗炎作用评价研究,以明确中华跌打丸抗炎作用的药效物质基础,为临床应用提供理论基础。