泰克生物是由一群深耕于抗体药物发现方面的专家组成的团队，平均项目经验超过10年，建立了完善的基于噬菌体展示技术平台的抗体药物候选分子发现平台，能够为客户提供一系列跟治疗性生物大分子发现相关的服务，包括但不限于VHH抗体、scFv抗体和Fab抗体发现，CAR-T先导抗体序列设计，CAR-NK先导抗体序列设计等服务。经过10年左右的发展，泰克生物在抗体噬菌体展示技术平台的基础上，引入了单B细胞测序技术，能够更加快速的为客户提供高质量抗体先导序列的发现服务。CAR-T疗法是指嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy（CAR-NK类似，只是将T细胞更换成NK细胞）。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。T细胞也叫T淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能。技术人员通过基因工程技术，将VHH抗体基因，scFv抗体基因通过合适的方法，如慢病毒包装方式转入到T细胞中，通过VHH或scFv的膜定位表达，即给T或NK细胞定制了一套特殊的针对特异性肿瘤的定位导航装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体），即CAR-T细胞，利用其“定位导航装置”CAR，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，从而高效地杀灭肿瘤细胞，达到治疗恶性肿瘤的目的。相比于传统scFv抗体（来自普通的IgG抗体），来自驼源动物的VHH抗体（又称为重链抗体）分子量约为15kDa，具有更强的稳定性，现在被广泛的应用于CAR-T的先导抗体开发。泰克生物通过自有羊驼基地，能为客户提供背景纯净，来源清晰的健康羊驼进行纳米抗体（VHH抗体）发现服务。█ 羊驼VHH抗体 羊驼抗体只具有重链不含轻链，因此被称为重链抗体（heavy Chain Antibody，hcAb），如图1中D所示，羊驼抗体缺少轻链，由4个HC和2个VH组成，其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体（single domain antibody，sdAb）。独立的羊驼VH区域具有完整的抗原结合能力，同时不像人工改造的单链抗体片段(single chain Fv，scFv)，容易聚集。和传统抗体相比，羊驼抗体具有稳定的性质，例如在60℃仍能保持活性，抵抗极端的pH环境。目前泰克生物成功建立了来自300只羊驼的天然噬菌体抗体展示文库，有效库容量达到1010，通过该文库的筛选，能够缩短羊驼单抗的制备周期。同时，采用不同的筛选策略，如抗原递减法，结合我司的蛋白重组表达平台，能够为客户提供达-5g/L水平的重组抗体表达发酵服务，在很大程度上提高了抗体批间一致性和稳定性。图1 A，传统IgG；B，传统抗体Fab片段；C，传统抗体的单链scFv片段；D，重链抗体或驼类抗体；E，驼类抗体的VH区域或单域抗体（sdAb）█ 制备流程 图2 基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务█ 服务内容 步骤服务内容交付材料周期半抗原改造客户提供小分子结构式和CAS号改造后的小分子衍生物LC-MS、NMR的鉴定结果3-4周完全抗原制备BSA、KLH和OVA偶联小分子完全抗原SDS- PAGE、UV、ELISA（需客户提供一抗）或MALDI-TOF鉴定结果3个工作日重组蛋白免疫原需要客户（或委托泰克生物进行制备）提供3.5mg，纯度>85%鉴定报告具体分析噬菌体抗体库的制备抗原乳化，免疫1只羊驼4-5次PCR结果，免疫检测结果（含ELISA的效价和特异性检测结果），实验记录3-4个月收集脾细胞（或者外周血淋巴细胞），可变区基因分离噬粒构建，转染表达，文库构建，文库筛选重组抗体表达抗体筛选，构建表达质粒，真核或原核表达重组抗体产品和报告4-5周█ CAR-T 细胞疗法的研发流程 图3 泰克生物CAR-T/NK项目服务流程针对CAR-T/NK我们能够提供的额外增值服务：(1) CAR表达测试(2) 靶点蛋白与先导抗体抗原识别区专属性(3) 针对先导抗体抗原识别区的抗独特性（Anti-idiotype）测试(4) 针对不同靶点蛋白的Fab形式抗体抗原识别区检测(5) 细胞因子释放试验a) 细胞因子种类：ɣ链共受体家族、IL-12家族、IL-1超家族等b) 方法：酶联免疫斑点试验（ELISpot）、细胞内细胞因子染色试验（ICS）、流式细胞术等(6) 体外细胞毒性试验泰克生物能够提供体外细胞毒性试验，以验证评估CAR-T细胞的细胞毒性和可能的不良反应。例如，CAR-T细胞疗法可能会引起的一些急性的靶向/肿瘤毒性（细胞因子释放综合征、肿瘤溶解综合征）或靶向/非肿瘤毒性，以及由于CAR-T细胞经历抗原-独立增殖可能会增加细胞介导的毒性而导致的CAR-T细胞永生失败。(7) CAR细胞增殖试验泰克生物开发的第二代和第三代CAR产品，能够增强CAR-T细胞或NK细胞增殖的持久性，并且泰克生物能够通过不同的测定方法对这种活化和增殖过程进行评估，例如 MTT、MTS、细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)、5,6-羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯 (CFSE) 结合流式细胞术分析等技术。(8) 活力和生物分布分析泰克生物能够提供活力和生物分布分析，以验证评估CAR-T细胞在生理条件下的正常增殖能力，为 CAR-T细胞疗法提供临床前服务。例如，针对CAR-T细胞有限的复制寿命而导致的疗效减弱的CAR-T细胞疗法障碍，活力和生物分布分析为CAR-T细胞的长期治疗效果评估提供重要支持。█ 服务优势✔采用成熟的羊驼免疫程序结合噬菌体展示技术，构建驼源免疫抗体库，筛选得到高亲和力和特异性的单克隆抗体✔ 丰富的经验积累，成熟的技术路线，保证产品质量稳定可靠✔ 严格的质控体系：标准硬件设施平台，满足cGMP的文件关键管理规则，可提供手写实验记录本✔能克服传统方法难以解决的靶点、副作用大等问题，是理想的抗体药制备来源✔ 提供单克隆抗体大规模生产服务，满足工业化生产需求✔ 完整的上下游服务：提供从抗原制备、噬菌体文库构建羊驼免疫、抗体筛选到抗体人源化等一体化服务✔ 服务可定制：根据客户需求制备，为每一个客户量身定制实验方案，满足每一位客户的特殊需求

DNA 免疫作为一种先进的技术方法能有效地诱导针对各种病原体的抗体和T细胞免疫应答，并且在免疫的动物或人血清中有效诱导高质量多克隆抗体应答，具有高度的构象特异性和高亲和力。与常规免疫方法不同，DNA 免疫使宿主能够在体内产生具有常见转录后修饰的目的抗原，且该抗原较大限度地保持原始结构，绕过了耗时的免疫原（例如肽和重组蛋白）合成和纯化过程。DNA免疫特性有助于产生针对靶抗原自然构象的高亲和力抗体，这也是开发治疗性抗体的关键特征。同时，这种方法也是开发针对膜蛋白或其他具有挑战性抗原的抗体的理想方案。此外，DNA 免疫也是免疫治疗及DNA 疫苗开发早期阶段的一种新工具。泰克生物能够为客户提供多种抗原（包括但不限于PTM蛋白、细胞内蛋白、分泌蛋白）的DNA免疫抗体制备服务，基于杂交瘤的融合与筛选技术的抗体药物制备服务平台，泰克生物能够为客户提供一系列跟治疗性生物大分子免疫抗体制备相关的服务，包括但不限于VHH纳米抗体，scFv抗体，Fab抗体，DNA免疫抗体等制备服务。经过10年的发展，泰克生物建立了完善的杂交瘤的融合与筛选平台，具备为客户提供一系列基于杂交瘤的融合与筛选技术平台的高质量DNA免疫抗体制备服务的实力。此外，泰克生物拥有包括从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务，并且有配套的抗原抗体结合分析、抗原抗体BLI亲和力测定、抗体细胞系验证、等许多下游配套服务，为客户的抗体药研发与生产提供有力的支撑。█ DNA免疫诱导免疫应答机制 诱导机制具体内容直接转染体细胞将外源DNA分子直接转入到动物体内，肌肉细胞将激活产生MHC I类分子，从而诱导机体免疫应答直接转染专职抗原递呈细胞少量的专职APCs可在注射部位直接被转染，产生内源性蛋白，经MHC I和MHC II分子完全内源性抗原的递呈。类似凋亡机制目的抗原或者表达目的抗原的重组质粒序列本身具有转导特性。█ DNA免疫的递送方式传递方式靶向抗原类型基因枪单次跨膜蛋白胞内蛋白病毒外壳蛋白肌肉注射细菌毒素7次跨膜蛋白病毒外壳蛋白分泌蛋白，酶皮内注射单次跨膜蛋白细胞外基质和血浆糖蛋白肌肉注射之后电脉冲刺激7次跨膜蛋白细菌毒素皮内注射之后电脉冲刺激跨膜蛋白、细胞内蛋白等水动力静脉注射多次跨膜转运蛋白 █  DNA免疫诱导生产单抗的优点-- DNA免疫同时刺激体液免疫和细胞免疫, 加快抗原特异性B淋巴细胞的成熟, 从而可诱导产生有效识别靶点抗原表位的高特异性抗体。-- 将目的基因直接导入到宿主细胞内得以表达, 因此可以避免蛋白质天然构象和免疫原性因外界因素的干扰而受到影响。-- 在应用过程中按照自己的实际需要可以设计多种不同的免疫策略, 也可以选择符合靶点抗原特异性的候选方案。-- 比传统的免疫方法更安全、操作简便、经济且可靠, 为制备高质量单克隆抗体提供良好的技术平台。█ DNA免疫服务流程服务项目内容周期基因合成基因模板合成，密码子优化，AAV载体构建4-6周动物免疫皮下多点注射，标准免疫流程，ELISA测血清效价10周融合与筛选脾细胞与骨髓瘤细胞融合，ELISA筛选阳性克隆，扩增4-6周抗体生产杂交瘤细胞生产，抗体纯化可选█ 泰克服务优势✔ 只需要计算机上的DNA 序列✔ 无需重组蛋白或多肽，省时省力✔ 无抗原污染风险✔ 生成具有高亲和力和特异性的抗体✔ 阳性的杂交瘤细胞株3-5株✔ 可提供抗体人源化服务并获得的与原抗体具有相同的亲和力的人源化抗体✔ 可提供一系列抗体体外验证服务✔ 从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务

泰克生物着力于为客户提供高质量，且具性价比的抗体药物前期发现技术服务。我们在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得，积累了充足的抗体定制和重组蛋白生产经验。基于噬菌体展示技术（Phage Display Technology）平台的服务，泰克生物能够为客户提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、驼源及牛源等不同物种的单克隆抗体制备服务，及其配套的完整可追溯性文件体系。噬菌体展示技术（即：纳米抗体技术）是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，通常为M13噬菌体的P3蛋白，使外源基因随外壳蛋白的表达而展示到噬菌体表面的生物技术。噬菌体展示的优势在于其展示纳米抗体文库中变异抗体基因的多样性，各个重组噬菌体（常用噬菌体为M13噬菌体）表面展示出不同的抗原结合域，相较于传统杂交瘤方法，噬菌体展示技术在抗体基因展示与筛选层面则具有非常突出的效率优势（如杂交瘤融合效率一般<0.4%，即1000次融合细胞中，大概4个融合子；而噬菌体展示轻松可以获得108-109个正确抗体序列）。█ 噬菌体展示抗体文库构建服务 泰克生物可为客户提供驼源VHH纳米抗体库，scFv抗体库，Fab抗体文库构建以及筛选服务。其中VHH纳米抗体库，又称为驼源重链抗体文库，抗体分子量大小为15kDa，是驼源动物产生的特有的一种抗体。目前被广泛应用于CarT/Car-NK治疗性的驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）噬菌体展示发现路径如图1所示：图1基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务泰克生物还可以提供一系列的抗体验证服务，例如：通过GST pull-down或CO-IP策略检测展示的蛋白质与其他分子之间的相互作用或分离特定目标、抗原抗体BLI亲和力测定、细胞功能验证及细胞系体外验证等。泰克生物提供的纳米抗体库具有丰富的多样性和规模，是筛选所有抗原类型以及选择具有高亲和力的功能性抗体的理想选择。凭借多年的经验，我们开发了多种噬菌体平台，可以为您定制特定的纳米抗体文库。如果您有兴趣开展噬菌体展示抗体项目，或者其他相关服务，例如抗体测序、scFv、Fab和Fc 融合蛋白等，请联系我们！█ 服务内容和周期 步骤服务内容QC标准周期Step1:蛋白表达(1) 密码子优化+基因模板合成+表达载体构建；(2) 质粒抽提+转染（哺乳表达系统）目的蛋白检测（WB，SDS-PAGE）；(3) 蛋白表达放大+蛋白亲和纯化；交付：表达载体，克隆甘油菌，重组蛋白3-3.5mg，纯度>85%，标准实验报告 4-6周Step2:动物免疫(1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针；(2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价；(3) 若第4针血清抗体效价（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫；(4) 效价合格，采血分离单核细胞；动物：背景清晰（年龄，性别，防疫情况）；免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104；采血：数量100ml以上；PBMC细胞：>105/vial 8-10周Step3:模板cDNA制备(1) PBMC总RNA提取（RNA提取试剂盒）(2) 高保真RT-PCR制备cDNA（反转录试剂盒）cDNA：反转后>1ug/ul，胶图分布均匀；cDNA模板总量>150ug；1 天Step4:噬菌体展示文库构建(1) 以cDNA为模板，两轮PCR法扩增VHH基因；(2) 噬粒构建与转化： VHH基因拼接噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库，混合建库电击次数不低于30次（单靶点建库，电击次数不低于15次）；(3) 鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率+插入率(4) 辅助噬菌体准备：M13噬菌体扩增+纯化；(5) VHH展示文库救援文库阳性率：>90%；文库插入性率：>90%；库容：>1081-2周Step5:文库筛选（3轮筛选）(固相筛选)(1) 抗原包被（单个蛋白筛选，常规默认是固相筛选法或磁珠分选；细胞筛选方法需要单独核算费用）；(2) 默认3轮筛选：压力筛选，最大限度去除非特异性抗体；(3) 挑取96个克隆扩增噬菌体+IPTG诱导表达+ELISA检测阳性克隆；(4) 挑取全部阳性克隆进行基因测序（>20个，多达96个）；ELISA阳性标准：P/N>3；VHH筛选标准：CDR氨基酸序列不同2-3周Step6:抗体验证（体外验证）(1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量；(2) Elisa验证抗体与抗原结合，进行下游验证（交付EC50数据）;(3) BLI法验证抗体亲和力；(4) 细胞功能验证：流式验证；(5) 验证细胞系（抗原受体过表达细胞系）；交付：表达载体，克隆菌株，表达菌株，重组抗体蛋白1mg，纯度90%；快速亲和力测定结果；4-6周█ 服务优势 ✔ 物种适应性广泛：人，鼠，兔，羊，羊驼，骆驼，鱼等物种的单抗开发均兼容（不适用牛源单抗开发）✔ 技术平台成熟：噬菌体展示技术提供1级免疫文库的建库库容为108-109，插入率均满足>95%，筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM- pM级别✔ 开发周期短：获得PBMC后，建库到筛选获得抗体序列，3-4周✔ 产品交付标准高：针对免疫库，交付免疫前后血清，抗体展示文库，筛选洗脱产物，抗体序列✔ 文库淘筛定制化（噬菌体展示方式）：根据客户需求不同以及靶点性质不同，会设计不同的筛选方法，如固相，固相/液相和细胞筛选✔ 实验记录可追溯：QC质控标准（含RNA提取，cDNA制备等），中英文实验报告，手写实验记录本 

泰克生物（Tek Biotech）经过多年的发展，积累了丰富的免疫学研究与检测经验，建立了完善的分子基础实验室平台。泰克生物（Tek Biotech）的酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system，Y2H）是由基于SMART法构建的文库、酵母菌株、严谨的报告基因、高表达载体组成的。酵母双杂交系统是一种在基因水平上使用遗传和分子方法来检测蛋白质之间相互作用的免疫学测试技术。这种方法只需要构建质粒，没有涉及蛋白纯化和抗体免疫阶段，同时又能方便快速地获得相互作用的蛋白质的编码基因。Y2H可以用来筛选与靶蛋白相互作用的蛋白基因序列，也可以研究已知蛋白间的相互作用原理。泰克生物（Tek Biotech）既能够提供蛋白互作检测服务，包括免疫共沉淀（Co-IP）、Pull-down等实验，实现对蛋白，小分子，抗体等相互作用的定性定量分析；也能进行ELISA、Western Blot等常用的免疫学检测技术。 酵母双杂交系统（Y2H）的原理：  图1 酵母双杂交系统原理DNA结合域（Bonding Domain, BD）: BD是一种能够与特定的DNA分子序列结合从而调节基因表达和自我复制的蛋白质结构域。DNA BD存在于转录因子等许多基因调控元件中，赋予这些调控元件识别并结合特定DNA序列的功能，从而达到对下游基因调控的目的。转录因子激活域（Activation Domain，AD）：AD是一段能够在在转录过程中激活基因转录的功能性蛋白质序列，常存在于转录因子蛋白质中。AD可以通过与其他调控因子的相互作用形成蛋白质复合物（转录因子、共激活因子和基因调控复合物等），从而使转录因子获得可以结合到DNA特定序列，然后招募其他转录因子和RNA聚合酶来启动转录的功能。因为每个转录因子只能结合到特定的序列上，所以这个过程是高度特异性的。在酵母双杂交系统中，将DNA BD和转录因子AD分别与Bait蛋白X融合和Prey蛋白Y形成融合蛋白。BD-Bait X融合蛋白可以识别并结合报告基因的上游激活子序列（Upstream Activation Sequence, UAS）。同时如果Bait X蛋白与Prey Y蛋白之间具有相互作用，这会使DNA AD与转录因子BD重新结合构成具有启动报告基因功能的结构域。酵母双杂交及系统是一种在细胞核中进行利用基因水平技术来鉴定和检测细胞核和细胞质蛋白之间相互作用的方法。同时，Y2H也可以使用蛋白质作为诱饵从所需的细胞类型、组织或整个生物体制备的蛋白质片段库来进行筛选，然后通过对所选酵母菌菌落中相应的质粒进行测序，从而确定相互作用。Y2H是在真核生物酵母中进行的，具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点，现已被应用于多个研究领域。 酵母杂交检测服务的分类：为了研究蛋白质的相互作用，科学家根据传统的Y2H系统，开发了几种系统以适应不同蛋白质的不同亚细胞定位和生化特征。泰克生物（Tek Biotech）为客户提供多种系统的服务，以适应不同项目的不同需求。（1）酵母单杂系统（Yeast one-hybrid system，Y1H）：研究蛋白质-DNA相互作用。 图2 酵母单杂交系统原理酵母单杂交系统需要将Bait DNA序列整合到酵母基因序列中。将Prey蛋白构建到AD载体中，与转录因子GAL4的AD结构域融合表达。如果Prey蛋白能够识别并结合Bait DNA序列，Prey蛋白所融合表达的AD结构域就可以招募转录复合物以激活报告基因的表达。（2）酵母三杂交系统（Yeast three-hybrid system，Y3H）：研究两个蛋白质和第三成分（蛋白、RNA或小分子）间的相互作用。 图3 酵母三杂交系统原理在酵母三杂交系统中，将两个RNA结合蛋白X，Y分别于DNA BD和转录因子AD结合形成两个融合蛋白。第三种成分可以为这两个RNA结合蛋白X，Y提供两个特定的RNA靶点来连接两个融合蛋白。（3） 膜酵母双杂交系统（Membrane yeast two-hybrid system，Mb Y2H）：用于研究膜蛋白 图4 膜酵母双杂交系统原理泛素（Ub）是一种蛋白质，可以通过实验被分离成两个基团，并且当它们靠近彼此时，其功能又可以进行重构。在Mb Y2H系统中，将目标膜蛋白Bait融合到半个泛素（Cub，泛素分子被截断后的C端）上，并且Cub上还连有一个含有人工转录因子（TF），该TF由细菌LexA-DNA BD和单纯疱疹病毒VP16蛋白AD组成。将另一种目标蛋白Prey（膜蛋白或细胞质蛋白）融合到另外半个改造泛素（NubG/NubA，是将泛素分子被截断后的N端进行改造，从而降低Cub与Nub两者之间的亲和性，避免其发生自发重组现象）上。所以只有当结合在NubG/A的蛋白质和结合在Cub的蛋白质间相互作用时，才能使两个半个泛素分子结合形成可以被泛素特异性蛋白酶（UBPs）识别作用的完整泛素分子。然后在酶的作用下，连接在Cub的调控因子被释放进入细胞核中，从而结合在特定的DNA序列上来激活转录报告基因。 服务优势： -- 技术专家直接服务，满足不同检测需要-- 高准确度分析仪器，经验丰富的操作以及严格的质量管理，保证结果准确可靠-- 检测服务效率高，过程实时监控-- 检测仪器灵敏度高，样品消耗量低-- 实验周期短，节省等待时间-- 提供真正的一站式服务：从构建文库到阳性克隆的筛选，这样可提高效率，避免错误，从而为客户从客观上节省费用服务内容服务流程内容周期客户提供不少于2 μg的质粒（含诱饵靶基因）以及该基因的DNA序列，以便我们设计合成方案，进行人工合成（需收费）***创建BD-X诱饵将诱饵靶基因连接到Y2H载体中去，并测序；诱饵靶基因可以是一段基因（酶切）或全长基因6-8周通过BD-X诱饵测试自我激活测试诱饵基因的自我激活能力和毒性酵母双杂交筛选并获得识别猎物文库筛选和交互验证，阳性克隆的分离提取和DNA的测序交付阳性克隆若干及DNA测序结果，每个阳性克隆不少于2 μg质粒

泰克生物提供快速专业的抗体测序服务（包括：杂交瘤测序，抗体全场测序等），对编码杂交瘤细胞单克隆抗体重链可变 (VH)区域和轻链可变 (VL) 区域的基因序列进行测序。同时，泰克生物配备了先进的抗体全长测序技术，例如与串联质谱联用的液相色谱仪 (LC-MS/MS) 和配套的先进计算算法，可根据您的需求提供准确、快速的抗体全长测序服务。█ 杂交瘤测序服务泰克生物提供快速专业的杂交瘤测序服务，对编码杂交瘤细胞单克隆抗体重链可变 (VH)区域和轻链可变 (VL) 区域的基因序列进行测序。杂交瘤测序原理：杂交瘤技术是指建立杂交瘤细胞系的技术，其用于产生大量单克隆抗体，所以又称单克隆抗体技术。测序原理是通过RT-PCR技术从杂交瘤细胞中提取杂交瘤分泌的抗体序列进行分析。泰克生物可在4-6周内完成高通量（NGS）杂交瘤测序，并且为客户提供所有VH和VL序列以及一份完整的报告，告知客户杂交瘤细胞单克隆抗体的序列（包括单克隆抗体相对应的VH和VL序列的CDR区序列分析）和可能存在的任何异质性或其他抗体同种型。经过杂交瘤测序，可以获得相应的序列，在后续项目中有需要用到单克隆抗体的时候，可以利用测得的基因序列进行重组抗体的制备。解决了杂交瘤保存过程中，细胞死亡或高特异性丢失的问题。杂交瘤测序，对于进一步的大规模生产及抗体的人源化等生物工程操作同样具有重要的意义。杂交瘤测序服务流程 项目内容交付周期杂交瘤细胞抗体测序服务RNA提取反转录PCR扩增VH和VL序列测序验证基因合成表达载体构建抗体VH和VL序列分别含有VH和VL基因的表达载体(质粒构建QC)3-4周服务优势 ✔  适用于任何物种✔  使用随机引物，不会引入突变✔  识别所有 VH 和 VL 序列并量化它们的相对丰度✔  序列绝对保密性✔  高通量方法可同时对多达 50 个杂交瘤进行测序 - 提供批量杂交瘤测序包✔  序列在 3-4 周内交付█ 抗体全长测序 有许多单克隆抗体无法获得杂交瘤细胞系。为了满足客户的对未知抗体序列（无杂交瘤细胞系）的测序要求，泰克生物还提供抗体全长测序服务，通过将质谱与从头肽测序和重叠肽组装相结合，确定可变域的氨基酸序列。抗体的全长测序是指在事先不知道DNA或蛋白质序列的情况下，推导抗体的氨基酸序列并发现任何相关的翻译后修饰的分析过程。泰克生物保证提供功能性抗体序列以及具有完整序列覆盖率的综合测序报告。基于重组抗体瞬时表达服务，泰克生物可以在短短9周内对抗体进行测序并交付相应的重组蛋白。样本要求 样本量：100μg单克隆抗体蛋白浓度：>0.2mg/mL纯度：目标抗体占总蛋白量的95%以上其他：无相同抗原的抗体蛋白服务内容质谱测序抗体表达周期交付酶消化成重叠肽；使用 Thermo Orbitrap 的 LC-MS/MS肽的从头鉴定；肽组装；基因合成克隆HEK293 细胞中的瞬时表达亲和纯化缓冲液交换 (PBS)无菌过滤纯度 >98% (SDS-PAGE)内毒素 < 1 EU/mg9周综合测序报告；>2 mg 纯化抗体；QC报告服务优势✔  快速：测序可在10个工作日内完成✔  高通量：我们的 DASS 方法是高通量兼容的✔  专业：科学家负责每个项目，并配备专业团队在过程的每个步骤进行质量控制；专家研发团队致力于优化协议以提供更高质量的数据✔  个性化：定制服务包括但不限于抗体设计、克隆、从头测序和分析，以及体外优化以满足您的需求✔  准确性高：单独肽的多个质谱读数中获得了强信号峰特征，可以正确识别序列中的每个氨基酸。✔  应用范围广：可用于所有类型的抗体（除了人类）。甚至已被用于对受污染或结合的抗体或成对具有不同轻链的抗体进行测序。✔  信息丰富：抗体从头测序通常会导致检测到测序中的意外差异或蛋白质分子上的新糖基化位点，而DNA测序无法检测这些差异。