我实验室自有动物实验中心，可以对候选药物进行筛选，用来提高新药研发的成功率，减少研发费用，缩短新药的研发时间。细胞水平的药物筛选是种简单易行的检测药物在细胞中功能的方法。实验成本低、周期短、重复性好，可作为早期药物筛选的有效方法。建立的多种药物体外筛选模型，可为药物的药效提供有效的评价，作为早期药物筛选的有效方法。实验热线：19931682702（同微信）

类风湿性关节炎(RA)的病因与病理一直是医药工作者研究的热点,建立起理想的动物模型是十分必要的。近年来报道较多的是Ⅱ型胶原(CⅡ)和不完全弗氏佐剂(IFA)混合注射所致的关节炎模型(CIA)及弗氏完全佐剂诱导的佐剂动物关节炎模型。胶原关节炎模型比佐剂关节炎模型更接近人类RA的病理特征。本实验根据文献[1]的研究结果,为了更有效地观察到关节骨破坏模型,对传统的方法进行改良后得到大鼠类风湿颞下颌关节炎动物模型。  1 材料与方法  1.1 实验动物:Wistar大鼠48只,雌性,5周龄,体重约(120±15)g,随机分成两组,正常对照组、实验组各24只。  1.2 主要试剂:牛源性Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ),弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund’s Adjuvant,IFA),美国Sigma公司产品。  1.3 方法  1.3.1 诱导产生大鼠类风湿颞下颌关节炎模型:剃除大鼠背部周围毛,取配置好的乳剂100μl,自鼠尾部开始,在脊柱两旁皮下多点注射,每只鼠注射1.0ml,1周后加强免疫1次,注射0.5ml/只。建立胶原诱导的大鼠实验性关节炎动物模型。对照组用生理盐水同期注射。实验热线：19931682702

脊髓损伤是一种致残率很高的疾 病, 给家庭、社会均带来沉重的负担。 随着工业、建筑业和交通 运输的飞速发展, 脊髓损伤患者数量呈逐年上升趋势。常用的造模方法有以下几种:1)脊髓撞击伤模型2)脊髓压迫伤模型3)脊髓横断损伤4)脊髓牵拉损伤模型5)脊髓缺血性损伤整体课题实验外包：19931682702（同微信）

精神分裂症是一组病因未明的重性精神病,多在青壮年缓慢或亚急性起病,临床上往往表现为症状各异的综合征,涉及感知觉、思维、情感和行为等多方面的障碍以及精神活动的不协调。患者一般意识清楚,智能基本正常,但部分患者在疾病过程中会出现认知功能的损害。病程一般迁延,呈反复发作、加重或恶化,部分患者最终出现衰退和精神残疾,但有的患者经过治疗后可保持痊愈或基本痊愈状态。 可以引起动物刻板行为及活动量增加等异常反应。给大鼠注射药物是出现刻板和转圈行为,且这种行为具有易发性、迁延性和进行性加重等特点,这些特点与人的精神分裂症相似。  模型制作方法: SD大鼠,体重280-320g ,雄性。参照JACKSON的方法,大鼠每日腹腔注射药物0.5mg/kg体重(浓度为0.1mg/ml,给药容量为5ul/g体重),连续10天。 观测指标与分析:  (1)前额叶单胺递质含量测定;  (2)间脑单胺递质含量测定;(3)脑干单胺递质含量测定。实验热线：19931682702

精神分裂症是一组病因未明的重性精神病,多在青壮年缓慢或亚急性起病,临床上往往表现为症状各异的综合征,涉及感知觉、思维、情感和行为等多方面的障碍以及精神活动的不协调。患者一般意识清楚,智能基本正常,但部分患者在疾病过程中会出现认知功能的损害。病程一般迁延,呈反复发作、加重或恶化,部分患者最终出现衰退和精神残疾,但有的患者经过治疗后可保持痊愈或基本痊愈状态。 可以引起动物刻板行为及活动量增加等异常反应。给大鼠注射药物是出现刻板和转圈行为,且这种行为具有易发性、迁延性和进行性加重等特点,这些特点与人的精神分裂症相似。  模型制作方法: SD大鼠,体重280-320g ,雄性。参照JACKSON的方法,大鼠每日腹腔注射药物0.5mg/kg体重(浓度为0.1mg/ml,给药容量为5ul/g体重),连续10天。 观测指标与分析:  (1)前额叶单胺递质含量测定;  (2)间脑单胺递质含量测定;  (3)脑干单胺递质含量测定。实验热线：19931682702（同微信）

比格犬是最常用的实验用犬，已成为实验研究型中最标准的动物，在国外，它已被广泛用于生物化学、微生物学、病理学、病毒学、药理学以及肿瘤学(如癌的病因学和癌的治疗学等)等基础医学的研究工作中，而农药的各种安全性试验，特别是农药工业中的各种实验，使用该犬最多。性情温和，易于驯服和抓捕，亲人。遗传性能稳定，在研究工作中为了得到重复性好而稳定，Beagle 品种固定且优良，一般无遗传性神经疾患。反应的一致性，形态体质均一，由于它血液循环系统很发达，且器官功能也是一致的，表现在体温稳定，又比杂种犬体温低0.5C，因此在实验中反应一致性好，尤其在实验中对环境的适应力、抗病力较强。性成熟期早，约8~12个月，产仔数多。由于该犬性格温顺，容易调教，遗传性疾病少，实验重复性好，尤其适合药理、循环生理、眼科、毒理、外科学等的研究，被国际医学、生物学界公认为较理想的实验用犬。实验专线：19931682702（同微信）

精神分裂症是一组病因未明的重性精神病,多在青壮年缓慢或亚急性起病,临床上往往表现为症状各异的综合征,涉及感知觉、思维、情感和行为等多方面的障碍以及精神活动的不协调。患者一般意识清楚,智能基本正常,但部分患者在疾病过程中会出现认知功能的损害。病程一般迁延,呈反复发作、加重或恶化,部分患者最终出现衰退和精神残疾,但有的患者经过治疗后可保持痊愈或基本痊愈状态。 可以引起动物刻板行为及活动量增加等异常反应。给大鼠注射药物是出现刻板和转圈行为,且这种行为具有易发性、迁延性和进行性加重等特点,这些特点与人的精神分裂症相似。  模型制作方法: SD大鼠,体重280-320g ,雄性。参照JACKSON的方法,大鼠每日腹腔注射药物0.5mg/kg体重(浓度为0.1mg/ml,给药容量为5ul/g体重),连续10天。 观测指标与分析:  (1)前额叶单胺递质含量测定;  (2)间脑单胺递质含量测定;(3)脑干单胺递质含量测定。实验热线：19931682702

染色质免疫沉淀技术的原理是:在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,交联反应的逆转,DNA的纯化,以及DNA的鉴定。常见问题:1.ChIP是什么?答:染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。2.ChIP有哪些应用?答:近年来由于该技术不断的发展和完善,其应用范围已经从研究目的蛋白与已知靶序列间的相互作用,发展到研究目的蛋白与整个基因组的未知序列的相互作用;从研究一个目的蛋白与DNA的相互作用,发展到研究两个蛋白与DNA共同结合的相互作用;从研究启动子区域的组蛋白的修饰,发展到研究结合在DNA序列上的蛋白复合物。3.ChIP技术的原理?答:生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定,染色质断裂,染色质免疫沉淀,交联反应的逆转,DNA的纯化,以及DNA的鉴定。因为ChIP实验涉及的步骤多,结果的重复性较低,所以对ChIP实验过程的每一步都应设计相应的对照,而且对结果的分析也需要有一定的经验。4.做ChIP试验,必须做甲醛固定么?答:不一定,视样品及试验方案而定。做甲醛固定的为X-ChIP,而不需要固定的为N-ChIP。甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质,蛋白质-DNA,蛋白质-RNA交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的,便于在后续步骤中对DNA和蛋白质进行分析。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。5.为什么必须将DNA切碎至少于1000bp大小(大约3个核小体 ~400-500bp)?答:为确保ChIP实验有良好精度。若您的平均片段长度大于1000bp,您将会分离获得包含您目标序列的DNA,但所要研究的蛋白会离您目标序列有700个核苷酸的距离。6.为什么使用鲑鱼精子DNA来封闭琼脂糖珠子?为什么我的样品中鲑鱼精子DNA不会发生PCR反应?答:鲑鱼精子用于降低降低染色质DNA与琼脂糖珠子的非特异性结合。实验者不太可能对鲑鱼组织做ChIP实验,所以此DNA不会因交叉杂交而被PCR引物扩增。7.引物最佳设计是什么样的?答:引物长度应为24个核苷酸,应含有50%GC碱基对,Tm值为60°C。不要扩增大于600-800个核苷酸的序列。不必考虑基因组内不独一序列。8.您推荐下如何从琼脂糖(或琼脂糖凝胶)中洗脱抗体-蛋白-DNA复合物,用来做re-ChIP试验?答:在ChIP分析试剂盒内可找到洗脱缓冲液,用它洗脱复合物。对于re-ChIP,有必要添加蛋白酶抑制剂到免疫沉淀洗液和洗脱缓冲液,及第二轮实验用的稀释缓冲液。请确定所有溶液处于低温,蛋白质不会因此而在收集第一次免疫沉淀的复合物或第二次免疫沉淀时降解。9.蛋白A琼脂糖能被用于小鼠IgM?答: 蛋白质A不能与小鼠IgM结合。可以考虑用一个桥接抗体连接。10.在做ChIP之前,有办法纯化细胞核么?答: 在细胞与甲醛交联后,细胞核可通过“溶胀缓冲液”培育及剪刀细胞均质器(dounce homogenization)制备(至少10倍体积)。   溶胀缓冲液:   25M Hepes, pH 7.8   1.5mM MgCl2   10mM KCl   0.1% NP-40   1mM DTT   0.5mM PMSF   蛋白酶抑制剂混合剂   然后按照protocol在SDS裂解液中裂解11.ChIP超声波的最佳条件?答: 1. 确定裂解物在冰上放置了至少10分钟。不要震荡或者摇晃裂解物,避免有气饱(气泡产生)。超声波仪会替你做这些。   2.脉冲应在~10秒(与体积一致)。   3. 样品量小于400 uL间隔应大于1分钟,在EP管中的更大体积间隔大于3分钟。   4. 避免泡沫。请确定超声探头靠近液体底部(不能让探头碰到管壁)。   5.若发现泡沫,立即停止超声,置于冰上。旋转EP管以去除泡沫,继续超声。   6. 在按“开始”键之前将探头置于液体中。12.客户能只用哺乳动物细胞的细胞核而不是整个细胞么?答: 是,实际上比起全细胞,细胞核更好。我们用全细胞裂解物,因为它更简便,通常也能得到好结果。此页有一些相关信息:13.ChIP超声波的最佳条件?答: 1. 确定裂解物在冰上放置了至少10分钟。不要震荡或者摇晃裂解物,避免有气饱(气泡产生)。超声波仪会替你做这些。   2.脉冲应在~10秒(与体积一致)。   3. 样品量小于400 uL间隔应大于1分钟,在EP管中的更大体积间隔大于3分钟。   4. 避免泡沫。请确定超声探头靠近液体底部(不能让探头碰到管壁)。   5.若发现泡沫,立即停止超声,置于冰上。旋转EP管以去除泡沫,继续超声。   6. 在按“开始”键之前将探头置于液体中。14.客户能只用哺乳动物细胞的细胞核而不是整个细胞么?答: 是,实际上比起全细胞,细胞核更好。我们用全细胞裂解物,因为它更简便,通常也能得到好结果。此页有一些相关信息:15.什么是input DNA? Output DNA?从染色质上获得的未做过IP的已经被逆转交联的DNA. 它是检查PCR是否有效的对照。Output DNA是来自每次IP实验的DNA.其实就是genomic DNA. 在ChIP实验中, sonication 或酶解后, 样本取部分不做IP, 直接逆转交联. 它的最主要的作用就是检查PCR系统是否work. 通常情况下, 在该条道中,都可以看到条带的.如果没有,说明PCR系统不work.16.为什么ChIP试验需要用经验证的抗体?抗原抗体之间的结合是通过抗体特异性的识别抗原表位并结合的,有的抗体识别的抗原表位比较小,不容易暴露,在ChIP实验中容易被DNA包裹,从而使抗体无法结合,因此用来做ChIP的抗体一般是需要经过chip实验验证的,商业化的抗体都应该是验证过的。17.什么是reChIP技术?ChIP reChIP是在第一次ChIP的基础上不解交联,而继续进行另一个目的蛋白的免疫沉淀,从而得到与两种目的蛋白都结合的DNA序列。值得注意的是,因为 通过两次免疫沉淀富集的DNA量比较少,所以在分析时通常要把多次免疫沉淀的DNA浓缩后再进行操作。实验热线：19931682702（同微信）

实验流程1、基因优化:靶基因序列设计,密码子优化并合成目的基因。2、载体-宿主系统优化:根据蛋白特性构建表达载体,转化质粒到高效表达的大肠杆菌中。3、表达条件优化:对重组的大肠杆菌进行摇瓶培养,并通过SDS-PAGE电泳检测对表达条件(时间、温度、IPTG浓度)进行严格控制和优化。4、纯化蛋白:对表达的蛋白采用亲和,离子或凝胶过滤层析等方法进行纯化。首选上清,次选蛋白复性。对实验用SDS-PAGE和Western Blot验证目标蛋白纯度正确性,按照客户要求进行分装或冻干。须知1、无污染的质粒,最小量不得低于100ng2、原始质粒图谱及序列文件3、插入基因后质粒的商业测序报告4、目标蛋白质相关信息5、最终蛋白一般保存在常规的缓冲液中(Tris-HCl,PBS)实验热线：19931682702（同微信）

糖尿病(diabetes mellitus ,DM)已成为严重危害人类健康的公共卫生问题。DM及其并发症不仅严重影响糖尿病患者的生活质量,同时也是致残、致死的重要原因。因此,建立合适的糖尿病动物模型,阐明DM及其并发症的发病机制就显得尤为重要。目前,DM动物模型制备方法主要有:手术切除胰腺、化学药物诱导、自发性糖尿病动物模型、转基因动物等。一、切除胰腺的DM模型常采用大鼠造模,全部或大部分切除实验动物的胰腺,但保存胰十二指肠动脉吻合弓。如果连续两天血糖值超过11.1mmol/L或者葡萄糖耐量试验120min时的血糖值仍未恢复到注射前水平则认为DM造模成功。其机制是全部或大部分切除胰腺后,β细胞缺失而产生永久性DM。二、化学药物诱发的DM模型采用链脲佐菌素腹腔注射或四氧嘧啶静脉注射可诱发DM,常用动物有小鼠、大鼠、家兔和犬。链脲佐菌素(streptozotocin STZ)的参考剂量为50～150mg/kg;四氧嘧啶(alloxan)的参考剂量为60～110mg/kg。STZ是一种含亚硝基的化合物,进入体内可通过以下机制特异性地破坏胰岛β细胞:(1)STZ直接破坏胰岛β细胞:主要见于注射大剂量STZ后。STZ注射后可引起β细胞内辅酶I(NAD)的浓度下降,NAD依赖性能量和蛋白质代谢停止,导致β细胞死亡;(2)通过诱导一氧化氮(NO)的合成,破坏胰岛β细胞;(3)STZ激活自身免疫过程,进一步导致β细胞的损害:小剂量注射STZ可破坏少量胰岛β细胞,死亡的胰岛β细胞可作为抗原被巨噬细胞吞噬,产生TH1刺激因子,使TH1细胞系占优势而产生IL-2及IFN-γ,在胰岛局部促使炎性细胞浸润,并活化释放IL-1、TNF-α、IFN-γ、NO和H2O2等物质杀伤细胞。死亡细胞又可作为自身抗原,再次递呈给抗原递呈细胞进行处理,释放细胞因子,放大细胞损伤效应,最终诱发DM。四氧嘧啶进入体内后能迅速被胰岛β细胞摄取,影响细胞膜的通透性和细胞内ATP的产生,抑制葡萄糖介导的胰岛素分泌。四氧嘧啶主要通过产生氧自由基破坏β细胞结构,导致细胞的损伤及坏死,从而阻碍胰岛素的分泌,使血清胰岛素水平降低。因为四氧嘧啶导致糖尿病的同时也造成肝、肾组织中毒性损害并且部分采用四氧嘧啶制造的DM动物模型可自发缓解,因此目前已经很少应用。三、自发性糖尿病动物模型该模型绝大多数采用有自发性DM倾向的近交系纯种动物,如BB(Biobreeding)鼠、NOD(non-obesity diabetes)小鼠、G(Goto-kakisaki)鼠和中国地鼠(chinese hamster)等动物造模。自发性DM动物模型是指动物未经过任何有意识的人工处置,在自然情况下发生DM的动物模型。已用于研究的自发性DM动物约有20种,可分为两类:一类为缺乏胰岛素,起病快、症状明显,并伴有酮症酸中毒,如BB(Biobreeding)鼠、NOD(non-obesity diabetes)小鼠和LETL大鼠,它们可以作为1型DM的动物模型使用。这些动物没有肥胖,发病之初呈现胰腺炎的症状,人类组织相关性抗原(MHC)参与发病过程,这些都与人1型DM的特征相似。利用这些模型可以对人1型DM的发病机制进行深入研究;另一类为胰岛素抵抗性高血糖症,其特点是病程长,不发生酮症酸中毒,为2型DM动物模型。实验热线：19931682702