基因克隆技术在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括:制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体(vecors)在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而产生大量的DNA分子片段。 实验流程: 1.以动物组织或者细胞为模版,提取获得DNA或者cDNA; 2.DNA/cDNA进行PCR获得目的基因; 3.构建重组表达载体; 4.获得含重组表达质粒的表达菌种; 5.测序、PCR、酶切检测验证构建重组载体成功。
基因克隆技术在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括:制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体(vecors)在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而产生大量的DNA分子片段。 实验流程: 1.以动物组织或者细胞为模版,提取获得DNA或者cDNA; 2.DNA/cDNA进行PCR获得目的基因; 3.构建重组表达载体; 4.获得含重组表达质粒的表达菌种; 5.测序、PCR、酶切检测验证构建重组载体成功。