泰克生物一致力于基于噬菌体展示技术的纳米抗体发现服务，亲和力是鉴定筛选抗体与目标抗原相互作用的一项重要依据，泰克生物在此基础上建立了完善的亲和力测定平台，目前泰克生物每年成功交付上百个亲和力测定的项目，拥有丰富的经验，可以为客户提供高质量的亲和力测定服务。抗体由具有不同抗原结合位点的近乎无限的序列组成的不同氨基酸组成。抗体和抗原都是多价的，这意味着它们具有多个结合位点。抗体在所有这些位点的总结合强度被定义为亲和力。抗原和抗体的亲和力是指抗体和抗原在单个位点之间的表位-互补位键）。这些分子间相互作用不可能单独测量。相反，Affinity 测试从抗体浓度推断结合亲和力，该浓度表示为平衡解离常数 (KD)的函数。这用于对特定生物分子相互作用的强度进行排序，显示与抗体亲和力成反比。例如，小的解离常数是指抗体与其抗原的高结合强度。泰克生物基于 Biacore 平台和 ForteBio Octet 平台，为客户提供 SPR/BLI 亲和力测定分析服务。█ 生物膜干涉测量法 BLI 通过通过检测干涉光谱的位移变化来检测传感器表面相互作用的生物分子之间的结合和解离情况，是一种基于光学的对非标记的生物分子间的相互作用进行测定的技术。BLI基于捕获第一个分子的生物传感器，并在生物传感器的表面测量第二个分析物的结合，可用于测定分子间相互作用的结合和解离的动力学常数（kon、koff）、亲和常数 (KD) 或生物分子的量化（浓度），适用于各类小分子和生物大分子以及生物大分子和生物大分子之间的分子相互作用的表征。█ 表面等离子体共振（SPR）技术 表面等离子体共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）技术是一种基于光学的无标记检测技术，通过传感器芯片跟踪信号变化实时检测两个或多个分子之间相互作用，SPR信号通过折射率变化呈现。SPR 生物传感器可以研究天然脂质状态下的蛋白质。此外，在成功优化选定的蛋白或小分子之前，必须存在研究数百种潜在的“靶蛋白或靶分子”的阶段，这一阶段对靶标与目标蛋白质的相互作用进行全面表征非常重要。SPR 技术提供了一种方法，可以直接确定未标记化合物与目标之间的相互作用，从而为化合物表征提供了一种可用的方法。█ 服务内容 内容交付交付周期蛋白、抗体、多肽、化合物等小分子（样品>200ug纯度>85%）样品要求：缓冲液为PBS，不含甘油，Tris抗原抗体亲和力测定亲和力测定报告1-2周蛋白与蛋白亲和力测定蛋白（抗体）与多肽小分子亲和力测定高通量排序

泰克生物一直致力于抗体药物发现与制备，是由一群项目经验超过10年的抗体发现专家组成的团队，能够为客户提供高质量的动物免疫以及抗体发现服务。泰克生物的抗体发现服务包括免疫抗原制备，动物免疫，优质抗体序列发现，抗体体外重组表达，抗体规模制备等，并提供全程可追溯的文件体系。目前泰克生物已经为国内外客户提供过数千次不同物种的动物免疫服务，包括羊驼免疫服务，骆驼免疫，牛免疫服务，羊免疫服务，兔子免疫服务 ，大鼠免疫服务等，配套严格执行的多位点免疫方式以及免疫时间计划表，为客户提供高质量的免疫血清制备和PBMC细胞分离服务。█ 动物免疫平台 图1 动物免疫抗体血清制备与PBMC分离服务示意图泰克生物为国内外客户提供高质量的免疫技术服务，包括羊驼，骆驼，牛，羊，鼠等动物免疫抗体血清制备以及PBMC分离服务。泰克生物收到客户免疫抗原且通过QC验证后，交付给客户设计好的免疫计划表，包括采血计划、血清效价ELISA检测计划，动物免疫剂量，采血分离PBMC计划等内容，如表1所示病毒免疫案例：表1 免疫计划表流程时间描述日期阴性血清采集Day 0免疫前血清采集10mL***一免Day 15ml纯病毒肌肉注射***二免Day 145ml纯病毒肌肉注射***三免Day 285ml纯病毒肌肉注射***三免血清采集Day 35采集检测血清2ml效价检测***四免Day 425ml纯病毒肌肉注射***四免血清采集Day 49采集检测血清2ml效价检测***五免Day 565ml纯病毒肌肉注射***五免血清采集Day 63采集检测血清2ml效价检测***中和效价测定Day 63同时检测四免和五免血清中和效价***图2常规动物免疫免疫流程表█ 动物免疫平台质量标准（QC标准） ✔ 针对蛋白抗原或者病毒抗原，免疫ELISA血清效价>105；针对多肽抗原免疫效价（载体蛋白偶联），免疫ELISA血清效价>104✔ 免疫次数不低5次（除非客户特别要求，均设置5次免疫程序）✔ 分离的PBMC细胞，可随意选择细胞冻存液或者Trizol裂解形式，保证28S，18S和5S主条带清晰✔ 针对血清纯化项目，IgG纯度>90%

近年来随着mRNA合成、化学修饰mRNA和递送技术的发展，mRNA稳定性和翻译效率大幅提高，免疫原性逐步可控，其在肿瘤免疫治疗领域显示了巨大的商业价值。mRNA技术产品是基于mRNA指导蛋白合成的“中心法则”，在体外设计合成含有编码特定抗原的mRNA序列，经过序列优化、化学修饰和纯化等加工，采用不同方式递送至人体细胞，利用机体细胞翻译产生蛋白、诱导免疫应答、补充机体蛋白、调节免疫等作用，从而预防或治疗疾病。人类90%以上的疾病与蛋白质相关，基于mRNA特性，mRNA技术在预防与治疗疾病方面前景广阔。Fig1 mRNA 免疫泰克生物能够为客户提供多种抗原（包括但不限于PTM蛋白、细胞内蛋白、分泌蛋白）的mRNA免疫抗体制备服务，此外，泰克生物拥有包括从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务，并且有配套的抗原抗体结合分析、抗原抗体BLI亲和力测定、抗体细胞系验证、等许多下游配套服务，为客户的抗体药研发与生产提供有力的支撑。 █ mRNA的免疫原性 纯化的mRNA仅包含单链RNA （single-stranded RNA, ssRNA）分子，通过递送系统包裹并以內吞方式进入核内体，进入核内体后mRNA从递送系统中释放出来并被定位在膜上的Toll样受体（Toll-like receptor, TLR)）7和TLR-8识别，导致下游的髓样分化标记物88 （myeloid differentiation marker 88, MyD88）被激活，引起I型干扰素（interferon, IFN）激活和炎症因子的分泌。 █ mRNA疫苗制备过程  1. 制备IVT mRNA：抗原选择、线性DNA模板合成、体外转录和mRNA纯化。在对病原体的基因组进行测序后选择目标抗原时，将其插入质粒 DNA 模板中。生产 DNA 模板应包含抗原序列、5′和3′ UTR以及5′UTR上游的T7启动子。体外转录过程需要 DNA 模板、修饰或未修饰的核苷和 T7 RNA 聚合酶。2. mRNA进入细胞质需要借助载体，mRNA疫苗的递送载体包括病毒载体和非病毒载体两种：病毒载体以慢病毒、腺病毒相关病毒和仙台病毒等为主，病毒载体在进行核酸递送的同时也可能会引起免疫反应，从而影响疫苗的效果，非病毒载体主要包括脂质体、树突状细胞(dendritic cell, DC)、无机纳米粒子、阳离子细胞穿膜肽等。 █ mRNA递送系统 1.裸mRNA直接注射法：直接注射至组织中，通常使用蔗糖、海藻糖溶液等缓冲液对mRNA进行一定的稀释处理。优点是成本低、方便快捷、缺点是mRNA极易被RNA酶降解，且难以穿过细胞膜。2.体外DC负载：将mRNA离体加载或电穿孔入树突状细胞（Dendritic cells，DCs），体外负载树突状细胞有利于抗原呈递细胞的有效靶向。3.阳离子纳米乳：一种基于水包油的递送方式，由角鲨烯和表面活性剂如吐温、生育酚等组成，MF59和AS03是2种水包油乳剂佐剂，应用于2009年的流感疫苗研究中。4.阳离子肽和聚合物：Curevac公司利用鱼精蛋白开发了狂犬和甲型流感的m RNA疫苗递送，鱼精蛋白富含精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基，能够与带有负电荷的m RNA复合使其稳定。5.LNP：LNP含有4种组分：阳离子可电离脂质、聚乙二醇（PEG）脂质、磷脂、胆固醇。阳离子可电离脂质是LNP中最重要的一种组分，其电离系数与胞内内体基本保持一致，不仅能够促进m RNA顺利包装至LNP中，还在胞内参与mRNA从内体中释放；PEG脂质提供胶体稳定性，防止蛋白与纳米粒结合，从而减少网状内皮系统对LNP的清除作用，增加体循环时长；中性磷脂如二硬脂酰基卵磷脂（distearoyl‐sn‐glycero‐phosphocho‐line，DSPC）和二棕榈酰磷脂酰胆碱（dipalmitoyl‐phosphatidylcholine,DPPC），提供双层磷脂稳定性结构；胆固醇提供刚性，提高LNP的硬度以及防止LNP成分泄露。 █ mRNA药物优势 （1）易在体外生产和纯化，除去蛋白药物及病毒载体制备的复杂过程，同时可避免宿主蛋白及病毒源性污染；（2）IVT mRNA的生产工艺通用性强,可以快速应用于生产不同的目的蛋白,节省药物研发时间,提高效率；（3）mRNA仅需进入细胞质即可翻译成蛋白质，无需进入细胞核，因此不存在基因的插入和整合，提高药物的安全性；（4）通过调节序列修饰和递送载体可以改变其半衰期；（5）临床试验发现，虽然mRNA的蛋白质表达是短暂性的，但其对于肿瘤的免疫治疗应用有效，且有利于药代动力学和剂量的控制。 █ mRNA免疫服务流程 服务项目内容周期mRNA合成mRNA合成、修饰与组装4-6周动物免疫皮下多点注射，标准免疫流程，ELISA测血清效价10周融合与筛选脾细胞与骨髓瘤细胞融合，ELISA筛选阳性克隆，扩增4-6周抗体生产杂交瘤细胞生产，抗体纯化可选 █ 服务优势 ✔ 无需重组蛋白或多肽，省时省力✔ 无抗原污染风险✔ 生成具有高亲和力和特异性的抗体✔ 阳性的杂交瘤细胞株3-5株（小鼠单抗）✔ 可提供抗体人源化服务并获得的与原抗体具有相同的亲和力的人源化抗体✔ 可提供一系列抗体体外验证服务✔ 从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务

抗体/抗体片段抗原产生特异性和高效结合性，在生化、治疗和诊断等领域发挥不可替代的作用。传统生产单克隆抗体的杂交瘤技术，由于其自身研发周期比较长，生产的成本相对较高，已经成为大规模、快速生产抗体/抗体片段的瓶颈。近年来，随着基因重组和生物工程技术的不断进步，高通量筛选和大规模生产抗体/抗体片段成为现实。抗原结合片段 （Fab） 是抗体上与抗原结合的区域。 它包含每条重链和轻链的一个恒定区和一个可变区。 只有重链和轻链的可变区融合在一起形成单链可变片段（scFv），其大小只有Fab片段的一半，但保留了原有的特异性。另一种小抗体片段，单域抗体，又称域抗体、VHH、VNAR或sdAb，是一种由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段，缺少常规的轻链和重链的CH结构域。泰克生物是一家专业的CRO服务提供商，能为我们的客户提供高质量的重组抗体表达服务，如scfv抗体片段、fab抗体片段、sdAb单域抗体、重链抗体等重组抗体构建和表达服务。另外，泰克生物目前在建的5000平米的GMP研究中心，能够为各类工业客户提供批量的重组抗体生产服务。 █ 抗体片段特性   抗体类型组分分子量（kDa）化合价半衰期（h）FabVH+CH1+VL+CL（轻重链利用二硫键连接）50-55单体12-20scFvVH+VL30单体2-4sdAbVHH15单体0.5Fc融合抗体（抗体+CH2+CH3）*2/二聚体/di-scFvscFv*260二聚体4-8█ 抗体片段表达系统常用宿主  表达系统菌株/细胞特点E.coliBL21（DE3）Ion-ompT，有效防止重组蛋白在胞内被水解Rosetta（DE3）菌株含有pRARE质粒，能够提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA稀有密码子的tRNA，能够提供更加“通用”的蛋白质表达，从而提升目的蛋白表达水平，该质粒具有氯霉素抗性。Rosetta哺乳动物细胞CHO-S是实验室常用的细胞系，作为贴壁和悬浮培养生长良好，生产率高，是大规模培养和GMP程序的理想选择；可进行许多翻译后修饰以获得生物仿制药，显示出卓越的生物相容性和药物活性；适用于无蛋白、无动物生产、无血清培养条件，并具有更好的稳定性和安全性。CHO-K1Freestyle 293F是一类能够在无血清中高表达蛋白的野生型293细胞系，可以高效表达蛋白。Expi 293F具有高度可转染行，展示出较高的蛋白表达水平，相比标准的悬浮适应293细胞，表现出更快速的细胞生长和更高的培养存活率。█ 抗体片段高表达策略优化方式特性融合抗体Fab 基因表达时，5'端带上细菌蛋白信号肽基因的Fd基因和L链基因，可在大肠杆菌细胞壁的周质腔内分泌型表达，形成完整的立体折叠。Fab片段保持了亲本抗体的抗原结合特异性和生物学活性。Fd基因片段和L链基因可以分别构建在两个载体上，然后共转染细胞，也可以构建在一个载体上转染细胞进行表达。抗体序列本身的修饰经定点突变可以改变抗体在某些关键位点的氨基酸，从而优化其稳定性，增强与抗原的亲和性，提高表达产量。表达系统的选择应考虑的因素有：实验设备、需表达抗体毒性、所需营养物、是否需要抗体高产率、抗体纯化工艺、生产成本、调控元件、生物安全方面等。密码子优化天然抗体/scFv来源于真核生物,其密码子很可能不为E.coli所偏好，使用偏好密码子能提高细胞对环境及抗体的适应性,减少重组抗体的错误折叠率。条件优化需要考虑的因素包括温度、培养基配比、pH、培养时间及诱导条件等。█ 抗体表达服务内容 实验内容交付周期基因合成＆载体构建1. 重组抗体2. 表达载体3. 克隆菌株4. 实验报告6-8周质粒抽提细胞转染＆表达抗体抗体纯化（SDS-PAGE）█ 泰克可提供的服务 片段抗体构建和生产服务片段抗体包括Fab抗体、scFv和VHH抗体（驼源纳米抗体）等。客户可直接提供Fab、scFv或VHH序列，交由泰克生物进行重组表达并获得高纯度产品。如客户仅有靶抗原信息，则可委托泰克生物进行动物免疫并筛选scFv、VHH等抗体。 重组抗体293F/CHO细胞表达服务全套Gibco无血清哺乳细胞培养，适用于科学家对天然构象蛋白的体外重组表达需求，如糖基化修饰，磷酸化修饰等。为客户提供的全套服务满足GMP-like体系，包括细胞种子库来源文件记录体系、细胞种子批检定，动物源成分的质控，标准化细胞培养与转化操作流程，全套GE提供的纯化填料和设备等准则进行生产的重组蛋白。 █ 服务优势 ✔ 详细的实验设计和论证：包含稀有密码子分析，抗体序列分析，表达系统的选择，表达载体构建方案，抗体修饰等✔ 多种标记抗体表达：His标签融合表达，同位素标记表达、生物素标记表达✔ 多个种属的重组抗体制备：包括人源，鼠源，兔源，羊源，犬源，骆驼源，羊驼源，牛源等✔ 抗体修饰控制：糖基化修饰和磷酸化修饰多寡控制✔ 多重表达模式：稳定表达和瞬时表达✔ 配套的哺乳体系高表达载体和各种规格的放大体系✔ 低内毒素水平：LAL检测法<0.1EU/ug✔ 完整的文件追溯体系，保证您的产品所有材料、试剂和制备信息可追溯

泰克生物是由一群深耕于抗体药物发现方面的专家组成的团队，平均项目经验超过10年，建立了完善的基于噬菌体展示技术平台的抗体药物候选分子发现平台，能够为客户提供一系列跟治疗性生物大分子发现相关的服务，包括但不限于VHH抗体、scFv抗体和Fab抗体发现，CAR-T先导抗体序列设计，CAR-NK先导抗体序列设计等服务。经过10年左右的发展，泰克生物在抗体噬菌体展示技术平台的基础上，引入了单B细胞测序技术，能够更加快速的为客户提供高质量抗体先导序列的发现服务。CAR-T疗法是指嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy（CAR-NK类似，只是将T细胞更换成NK细胞）。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。T细胞也叫T淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能。技术人员通过基因工程技术，将VHH抗体基因，scFv抗体基因通过合适的方法，如慢病毒包装方式转入到T细胞中，通过VHH或scFv的膜定位表达，即给T或NK细胞定制了一套特殊的针对特异性肿瘤的定位导航装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体），即CAR-T细胞，利用其“定位导航装置”CAR，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，从而高效地杀灭肿瘤细胞，达到治疗恶性肿瘤的目的。相比于传统scFv抗体（来自普通的IgG抗体），来自驼源动物的VHH抗体（又称为重链抗体）分子量约为15kDa，具有更强的稳定性，现在被广泛的应用于CAR-T的先导抗体开发。泰克生物通过自有羊驼基地，能为客户提供背景纯净，来源清晰的健康羊驼进行纳米抗体（VHH抗体）发现服务。█ 羊驼VHH抗体 羊驼抗体只具有重链不含轻链，因此被称为重链抗体（heavy Chain Antibody，hcAb），如图1中D所示，羊驼抗体缺少轻链，由4个HC和2个VH组成，其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体（single domain antibody，sdAb）。独立的羊驼VH区域具有完整的抗原结合能力，同时不像人工改造的单链抗体片段(single chain Fv，scFv)，容易聚集。和传统抗体相比，羊驼抗体具有稳定的性质，例如在60℃仍能保持活性，抵抗极端的pH环境。目前泰克生物成功建立了来自300只羊驼的天然噬菌体抗体展示文库，有效库容量达到1010，通过该文库的筛选，能够缩短羊驼单抗的制备周期。同时，采用不同的筛选策略，如抗原递减法，结合我司的蛋白重组表达平台，能够为客户提供达-5g/L水平的重组抗体表达发酵服务，在很大程度上提高了抗体批间一致性和稳定性。图1 A，传统IgG；B，传统抗体Fab片段；C，传统抗体的单链scFv片段；D，重链抗体或驼类抗体；E，驼类抗体的VH区域或单域抗体（sdAb）█ 制备流程 图2 基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务█ 服务内容 步骤服务内容交付材料周期半抗原改造客户提供小分子结构式和CAS号改造后的小分子衍生物LC-MS、NMR的鉴定结果3-4周完全抗原制备BSA、KLH和OVA偶联小分子完全抗原SDS- PAGE、UV、ELISA（需客户提供一抗）或MALDI-TOF鉴定结果3个工作日重组蛋白免疫原需要客户（或委托泰克生物进行制备）提供3.5mg，纯度>85%鉴定报告具体分析噬菌体抗体库的制备抗原乳化，免疫1只羊驼4-5次PCR结果，免疫检测结果（含ELISA的效价和特异性检测结果），实验记录3-4个月收集脾细胞（或者外周血淋巴细胞），可变区基因分离噬粒构建，转染表达，文库构建，文库筛选重组抗体表达抗体筛选，构建表达质粒，真核或原核表达重组抗体产品和报告4-5周█ CAR-T 细胞疗法的研发流程 图3 泰克生物CAR-T/NK项目服务流程针对CAR-T/NK我们能够提供的额外增值服务：(1) CAR表达测试(2) 靶点蛋白与先导抗体抗原识别区专属性(3) 针对先导抗体抗原识别区的抗独特性（Anti-idiotype）测试(4) 针对不同靶点蛋白的Fab形式抗体抗原识别区检测(5) 细胞因子释放试验a) 细胞因子种类：ɣ链共受体家族、IL-12家族、IL-1超家族等b) 方法：酶联免疫斑点试验（ELISpot）、细胞内细胞因子染色试验（ICS）、流式细胞术等(6) 体外细胞毒性试验泰克生物能够提供体外细胞毒性试验，以验证评估CAR-T细胞的细胞毒性和可能的不良反应。例如，CAR-T细胞疗法可能会引起的一些急性的靶向/肿瘤毒性（细胞因子释放综合征、肿瘤溶解综合征）或靶向/非肿瘤毒性，以及由于CAR-T细胞经历抗原-独立增殖可能会增加细胞介导的毒性而导致的CAR-T细胞永生失败。(7) CAR细胞增殖试验泰克生物开发的第二代和第三代CAR产品，能够增强CAR-T细胞或NK细胞增殖的持久性，并且泰克生物能够通过不同的测定方法对这种活化和增殖过程进行评估，例如 MTT、MTS、细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)、5,6-羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯 (CFSE) 结合流式细胞术分析等技术。(8) 活力和生物分布分析泰克生物能够提供活力和生物分布分析，以验证评估CAR-T细胞在生理条件下的正常增殖能力，为 CAR-T细胞疗法提供临床前服务。例如，针对CAR-T细胞有限的复制寿命而导致的疗效减弱的CAR-T细胞疗法障碍，活力和生物分布分析为CAR-T细胞的长期治疗效果评估提供重要支持。█ 服务优势✔采用成熟的羊驼免疫程序结合噬菌体展示技术，构建驼源免疫抗体库，筛选得到高亲和力和特异性的单克隆抗体✔ 丰富的经验积累，成熟的技术路线，保证产品质量稳定可靠✔ 严格的质控体系：标准硬件设施平台，满足cGMP的文件关键管理规则，可提供手写实验记录本✔能克服传统方法难以解决的靶点、副作用大等问题，是理想的抗体药制备来源✔ 提供单克隆抗体大规模生产服务，满足工业化生产需求✔ 完整的上下游服务：提供从抗原制备、噬菌体文库构建羊驼免疫、抗体筛选到抗体人源化等一体化服务✔ 服务可定制：根据客户需求制备，为每一个客户量身定制实验方案，满足每一位客户的特殊需求

重组单克隆抗体是使用重组DNA 技术产生的抗体，具体是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组，并构建在质粒上，再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应，使得抗体实现人源化，使抗体的效能更为完善。泰克生物拥有完善的重组抗体表达生产平台，丰富的重组蛋白和重组抗体表达经验，能够为客户提供包括人源、鼠源、兔源、羊源、犬源、驼源、牛源等各种种属的重组IgG抗体表达服务，客户只需要提供抗体序列信息、杂交瘤细胞或cDNA，公司的技术支持可以根据客户的需求进行方案设计和表达体系优化，结合公司自主设计的哺乳体系高表达载体和大规模重组抗体发酵平台，为客户提供优质的重组抗体制备服务。重组抗体的开发方法主要分为三类：1. 噬菌体展示技术：通过噬菌体展示技术可以从大容量的抗体多肽库中筛选到与特异性受体结合的高亲和力的多肽。与基因重组技术结合，可以将目的基因克隆出来，通过噬菌体展示技术对表达的抗体蛋白进行展示并筛选出特异性强、亲和力高的抗体。卡梅德生物可提供基于噬菌体展示技术的重组抗体生产，详情可与我们联系。2. B细胞克隆技术：通过动物免疫，分离获得浆细胞，经流式细胞术将其分离。扩增筛选出的细胞基因，将其克隆到载体中，使用ELISA筛选出表达较好的克隆，对其进行测序，从而在体外制备出重组抗体。3. 杂交瘤测序：对已制备出的杂交瘤进所获得的抗体进行基因测序，利用体外重组技术表达抗体。 █ 重组抗体的制备流程   █ IgG免疫效应-- Fab段与抗原结合，发挥中和作用；-- 补体依赖的细胞毒作用（CDC）：Fc段激活补体，形成膜攻击复合物，能够溶解靶细胞；-- 调理及吞噬作用（ADCP）：Fc段可与中性粒细胞、巨噬细胞表面Fc受体结合，增强吞噬细胞吞噬作用；-- 抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）：Fc段与自然杀伤细胞表面的Fc受体结合，介导自然杀伤细胞对靶细胞的杀伤。 █ 抗体种类 在人类血清中发现有五类抗体，相关情况如下所示：IgAIgDIgEIgGIgM重链αδεγμ位置血管内和分泌物B细胞表面唾液和鼻腔分泌物中的嗜碱性细胞和肥大细胞血管内和血管外主要在血管内作用保护粘液膜不明防止寄生虫并与过敏反应有关二级免疫反应初级免疫反应亚类IgA1IgA2（2种）11IgG1、IgG2、IgG3、IgG4（4种）1Fc区域结合至骨髓细胞B细胞肥大细胞和嗜碱细胞吞噬细胞B、T和NK细胞IgD、IgE和IgG通常以单体形式存在，而IgA通常以二聚体形式存在，IgM以五聚体形式存在。 █ 不同IgG亚型抗体 种属IgG类型人IgG1/2/3/4小鼠IgG1/2a/2b/2c/3大鼠IgG1/2a/2b/2c兔IgG犬IgG泰克生物可提供以上各种种属及亚型的重组抗体制备服务。█ 重组抗体制备的优势-- 可对抗体的结构进行一系列改造与优化（包括人源化引入、人类IgG1类别的Fc区域等）从而提高抗体的亲和力和稳定性。-- 抗原选择更加广泛，不受来源、纯度和量的限制。-- 无需免疫动物，减少了动物实验的数量和伦理问题。-- 所得抗体的特异性和亲和力都更强，可用于治疗和检测等领域。 █ 重组抗体制备的服务内容流程服务内容交付基因合成和密码子优化客户可提供抗体/氨基酸序列或包含抗体基因的重组质粒1. 纯化抗体2. 表达质粒3. 质检报告载体构建克隆至泰克生物高效表达载体中；抽提质粒表达纯化瞬时转染HEK293/CHO细胞；纯化抗体质检分析SDS-PAGE；UV；内毒素分析、ELISA等（可选）█ 服务优势✔ 已成功表达过多物种来源（人、鼠、兔等）的全长和scFv、Fab、VHH、嵌合抗体、双特异性抗体、Fc融合抗体。✔ 哺乳动物细胞表达平台：自主设计的高表达载体、优化的自主产权培养基和专有的转染试剂。✔ 多个规格放大表达体系满足不同客户需求量。✔ 拥有专业的技术团队，可定制个性化一对一抗体发现整体解决方案。

泰克生物着力于为客户提供高质量，且具性价比的抗体药物前期发现技术服务。我们在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得，积累了充足的抗体定制和重组蛋白生产经验。基于噬菌体展示技术（Phage Display Technology）平台的服务，泰克生物能够为客户提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、驼源及牛源等不同物种的单克隆抗体制备服务，及其配套的完整可追溯性文件体系。噬菌体展示技术（即：纳米抗体技术）是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，通常为M13噬菌体的P3蛋白，使外源基因随外壳蛋白的表达而展示到噬菌体表面的生物技术。噬菌体展示的优势在于其展示纳米抗体文库中变异抗体基因的多样性，各个重组噬菌体（常用噬菌体为M13噬菌体）表面展示出不同的抗原结合域，相较于传统杂交瘤方法，噬菌体展示技术在抗体基因展示与筛选层面则具有非常突出的效率优势（如杂交瘤融合效率一般<0.4%，即1000次融合细胞中，大概4个融合子；而噬菌体展示轻松可以获得108-109个正确抗体序列）。█ 噬菌体展示抗体文库构建服务 泰克生物可为客户提供驼源VHH纳米抗体库，scFv抗体库，Fab抗体文库构建以及筛选服务。其中VHH纳米抗体库，又称为驼源重链抗体文库，抗体分子量大小为15kDa，是驼源动物产生的特有的一种抗体。目前被广泛应用于CarT/Car-NK治疗性的驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）噬菌体展示发现路径如图1所示：图1基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务泰克生物还可以提供一系列的抗体验证服务，例如：通过GST pull-down或CO-IP策略检测展示的蛋白质与其他分子之间的相互作用或分离特定目标、抗原抗体BLI亲和力测定、细胞功能验证及细胞系体外验证等。泰克生物提供的纳米抗体库具有丰富的多样性和规模，是筛选所有抗原类型以及选择具有高亲和力的功能性抗体的理想选择。凭借多年的经验，我们开发了多种噬菌体平台，可以为您定制特定的纳米抗体文库。如果您有兴趣开展噬菌体展示抗体项目，或者其他相关服务，例如抗体测序、scFv、Fab和Fc 融合蛋白等，请联系我们！█ 服务内容和周期 步骤服务内容QC标准周期Step1:蛋白表达(1) 密码子优化+基因模板合成+表达载体构建；(2) 质粒抽提+转染（哺乳表达系统）目的蛋白检测（WB，SDS-PAGE）；(3) 蛋白表达放大+蛋白亲和纯化；交付：表达载体，克隆甘油菌，重组蛋白3-3.5mg，纯度>85%，标准实验报告 4-6周Step2:动物免疫(1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针；(2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价；(3) 若第4针血清抗体效价（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫；(4) 效价合格，采血分离单核细胞；动物：背景清晰（年龄，性别，防疫情况）；免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104；采血：数量100ml以上；PBMC细胞：>105/vial 8-10周Step3:模板cDNA制备(1) PBMC总RNA提取（RNA提取试剂盒）(2) 高保真RT-PCR制备cDNA（反转录试剂盒）cDNA：反转后>1ug/ul，胶图分布均匀；cDNA模板总量>150ug；1 天Step4:噬菌体展示文库构建(1) 以cDNA为模板，两轮PCR法扩增VHH基因；(2) 噬粒构建与转化： VHH基因拼接噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库，混合建库电击次数不低于30次（单靶点建库，电击次数不低于15次）；(3) 鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率+插入率(4) 辅助噬菌体准备：M13噬菌体扩增+纯化；(5) VHH展示文库救援文库阳性率：>90%；文库插入性率：>90%；库容：>1081-2周Step5:文库筛选（3轮筛选）(固相筛选)(1) 抗原包被（单个蛋白筛选，常规默认是固相筛选法或磁珠分选；细胞筛选方法需要单独核算费用）；(2) 默认3轮筛选：压力筛选，最大限度去除非特异性抗体；(3) 挑取96个克隆扩增噬菌体+IPTG诱导表达+ELISA检测阳性克隆；(4) 挑取全部阳性克隆进行基因测序（>20个，多达96个）；ELISA阳性标准：P/N>3；VHH筛选标准：CDR氨基酸序列不同2-3周Step6:抗体验证（体外验证）(1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量；(2) Elisa验证抗体与抗原结合，进行下游验证（交付EC50数据）;(3) BLI法验证抗体亲和力；(4) 细胞功能验证：流式验证；(5) 验证细胞系（抗原受体过表达细胞系）；交付：表达载体，克隆菌株，表达菌株，重组抗体蛋白1mg，纯度90%；快速亲和力测定结果；4-6周█ 服务优势 ✔ 物种适应性广泛：人，鼠，兔，羊，羊驼，骆驼，鱼等物种的单抗开发均兼容（不适用牛源单抗开发）✔ 技术平台成熟：噬菌体展示技术提供1级免疫文库的建库库容为108-109，插入率均满足>95%，筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM- pM级别✔ 开发周期短：获得PBMC后，建库到筛选获得抗体序列，3-4周✔ 产品交付标准高：针对免疫库，交付免疫前后血清，抗体展示文库，筛选洗脱产物，抗体序列✔ 文库淘筛定制化（噬菌体展示方式）：根据客户需求不同以及靶点性质不同，会设计不同的筛选方法，如固相，固相/液相和细胞筛选✔ 实验记录可追溯：QC质控标准（含RNA提取，cDNA制备等），中英文实验报告，手写实验记录本 

DNA 免疫作为一种先进的技术方法能有效地诱导针对各种病原体的抗体和T细胞免疫应答，并且在免疫的动物或人血清中有效诱导高质量多克隆抗体应答，具有高度的构象特异性和高亲和力。与常规免疫方法不同，DNA 免疫使宿主能够在体内产生具有常见转录后修饰的目的抗原，且该抗原较大限度地保持原始结构，绕过了耗时的免疫原（例如肽和重组蛋白）合成和纯化过程。DNA免疫特性有助于产生针对靶抗原自然构象的高亲和力抗体，这也是开发治疗性抗体的关键特征。同时，这种方法也是开发针对膜蛋白或其他具有挑战性抗原的抗体的理想方案。此外，DNA 免疫也是免疫治疗及DNA 疫苗开发早期阶段的一种新工具。泰克生物能够为客户提供多种抗原（包括但不限于PTM蛋白、细胞内蛋白、分泌蛋白）的DNA免疫抗体制备服务，基于杂交瘤的融合与筛选技术的抗体药物制备服务平台，泰克生物能够为客户提供一系列跟治疗性生物大分子免疫抗体制备相关的服务，包括但不限于VHH纳米抗体，scFv抗体，Fab抗体，DNA免疫抗体等制备服务。经过10年的发展，泰克生物建立了完善的杂交瘤的融合与筛选平台，具备为客户提供一系列基于杂交瘤的融合与筛选技术平台的高质量DNA免疫抗体制备服务的实力。此外，泰克生物拥有包括从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务，并且有配套的抗原抗体结合分析、抗原抗体BLI亲和力测定、抗体细胞系验证、等许多下游配套服务，为客户的抗体药研发与生产提供有力的支撑。█ DNA免疫诱导免疫应答机制 诱导机制具体内容直接转染体细胞将外源DNA分子直接转入到动物体内，肌肉细胞将激活产生MHC I类分子，从而诱导机体免疫应答直接转染专职抗原递呈细胞少量的专职APCs可在注射部位直接被转染，产生内源性蛋白，经MHC I和MHC II分子完全内源性抗原的递呈。类似凋亡机制目的抗原或者表达目的抗原的重组质粒序列本身具有转导特性。█ DNA免疫的递送方式传递方式靶向抗原类型基因枪单次跨膜蛋白胞内蛋白病毒外壳蛋白肌肉注射细菌毒素7次跨膜蛋白病毒外壳蛋白分泌蛋白，酶皮内注射单次跨膜蛋白细胞外基质和血浆糖蛋白肌肉注射之后电脉冲刺激7次跨膜蛋白细菌毒素皮内注射之后电脉冲刺激跨膜蛋白、细胞内蛋白等水动力静脉注射多次跨膜转运蛋白 █  DNA免疫诱导生产单抗的优点-- DNA免疫同时刺激体液免疫和细胞免疫, 加快抗原特异性B淋巴细胞的成熟, 从而可诱导产生有效识别靶点抗原表位的高特异性抗体。-- 将目的基因直接导入到宿主细胞内得以表达, 因此可以避免蛋白质天然构象和免疫原性因外界因素的干扰而受到影响。-- 在应用过程中按照自己的实际需要可以设计多种不同的免疫策略, 也可以选择符合靶点抗原特异性的候选方案。-- 比传统的免疫方法更安全、操作简便、经济且可靠, 为制备高质量单克隆抗体提供良好的技术平台。█ DNA免疫服务流程服务项目内容周期基因合成基因模板合成，密码子优化，AAV载体构建4-6周动物免疫皮下多点注射，标准免疫流程，ELISA测血清效价10周融合与筛选脾细胞与骨髓瘤细胞融合，ELISA筛选阳性克隆，扩增4-6周抗体生产杂交瘤细胞生产，抗体纯化可选█ 泰克服务优势✔ 只需要计算机上的DNA 序列✔ 无需重组蛋白或多肽，省时省力✔ 无抗原污染风险✔ 生成具有高亲和力和特异性的抗体✔ 阳性的杂交瘤细胞株3-5株✔ 可提供抗体人源化服务并获得的与原抗体具有相同的亲和力的人源化抗体✔ 可提供一系列抗体体外验证服务✔ 从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务

泰克生物（Tek Biotech）经过多年的发展，积累了丰富的免疫学研究与检测经验，建立了完善的分子基础实验室平台。泰克生物（Tek Biotech）的酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system，Y2H）是由基于SMART法构建的文库、酵母菌株、严谨的报告基因、高表达载体组成的。酵母双杂交系统是一种在基因水平上使用遗传和分子方法来检测蛋白质之间相互作用的免疫学测试技术。这种方法只需要构建质粒，没有涉及蛋白纯化和抗体免疫阶段，同时又能方便快速地获得相互作用的蛋白质的编码基因。Y2H可以用来筛选与靶蛋白相互作用的蛋白基因序列，也可以研究已知蛋白间的相互作用原理。泰克生物（Tek Biotech）既能够提供蛋白互作检测服务，包括免疫共沉淀（Co-IP）、Pull-down等实验，实现对蛋白，小分子，抗体等相互作用的定性定量分析；也能进行ELISA、Western Blot等常用的免疫学检测技术。 酵母双杂交系统（Y2H）的原理：  图1 酵母双杂交系统原理DNA结合域（Bonding Domain, BD）: BD是一种能够与特定的DNA分子序列结合从而调节基因表达和自我复制的蛋白质结构域。DNA BD存在于转录因子等许多基因调控元件中，赋予这些调控元件识别并结合特定DNA序列的功能，从而达到对下游基因调控的目的。转录因子激活域（Activation Domain，AD）：AD是一段能够在在转录过程中激活基因转录的功能性蛋白质序列，常存在于转录因子蛋白质中。AD可以通过与其他调控因子的相互作用形成蛋白质复合物（转录因子、共激活因子和基因调控复合物等），从而使转录因子获得可以结合到DNA特定序列，然后招募其他转录因子和RNA聚合酶来启动转录的功能。因为每个转录因子只能结合到特定的序列上，所以这个过程是高度特异性的。在酵母双杂交系统中，将DNA BD和转录因子AD分别与Bait蛋白X融合和Prey蛋白Y形成融合蛋白。BD-Bait X融合蛋白可以识别并结合报告基因的上游激活子序列（Upstream Activation Sequence, UAS）。同时如果Bait X蛋白与Prey Y蛋白之间具有相互作用，这会使DNA AD与转录因子BD重新结合构成具有启动报告基因功能的结构域。酵母双杂交及系统是一种在细胞核中进行利用基因水平技术来鉴定和检测细胞核和细胞质蛋白之间相互作用的方法。同时，Y2H也可以使用蛋白质作为诱饵从所需的细胞类型、组织或整个生物体制备的蛋白质片段库来进行筛选，然后通过对所选酵母菌菌落中相应的质粒进行测序，从而确定相互作用。Y2H是在真核生物酵母中进行的，具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点，现已被应用于多个研究领域。 酵母杂交检测服务的分类：为了研究蛋白质的相互作用，科学家根据传统的Y2H系统，开发了几种系统以适应不同蛋白质的不同亚细胞定位和生化特征。泰克生物（Tek Biotech）为客户提供多种系统的服务，以适应不同项目的不同需求。（1）酵母单杂系统（Yeast one-hybrid system，Y1H）：研究蛋白质-DNA相互作用。 图2 酵母单杂交系统原理酵母单杂交系统需要将Bait DNA序列整合到酵母基因序列中。将Prey蛋白构建到AD载体中，与转录因子GAL4的AD结构域融合表达。如果Prey蛋白能够识别并结合Bait DNA序列，Prey蛋白所融合表达的AD结构域就可以招募转录复合物以激活报告基因的表达。（2）酵母三杂交系统（Yeast three-hybrid system，Y3H）：研究两个蛋白质和第三成分（蛋白、RNA或小分子）间的相互作用。 图3 酵母三杂交系统原理在酵母三杂交系统中，将两个RNA结合蛋白X，Y分别于DNA BD和转录因子AD结合形成两个融合蛋白。第三种成分可以为这两个RNA结合蛋白X，Y提供两个特定的RNA靶点来连接两个融合蛋白。（3） 膜酵母双杂交系统（Membrane yeast two-hybrid system，Mb Y2H）：用于研究膜蛋白 图4 膜酵母双杂交系统原理泛素（Ub）是一种蛋白质，可以通过实验被分离成两个基团，并且当它们靠近彼此时，其功能又可以进行重构。在Mb Y2H系统中，将目标膜蛋白Bait融合到半个泛素（Cub，泛素分子被截断后的C端）上，并且Cub上还连有一个含有人工转录因子（TF），该TF由细菌LexA-DNA BD和单纯疱疹病毒VP16蛋白AD组成。将另一种目标蛋白Prey（膜蛋白或细胞质蛋白）融合到另外半个改造泛素（NubG/NubA，是将泛素分子被截断后的N端进行改造，从而降低Cub与Nub两者之间的亲和性，避免其发生自发重组现象）上。所以只有当结合在NubG/A的蛋白质和结合在Cub的蛋白质间相互作用时，才能使两个半个泛素分子结合形成可以被泛素特异性蛋白酶（UBPs）识别作用的完整泛素分子。然后在酶的作用下，连接在Cub的调控因子被释放进入细胞核中，从而结合在特定的DNA序列上来激活转录报告基因。 服务优势： -- 技术专家直接服务，满足不同检测需要-- 高准确度分析仪器，经验丰富的操作以及严格的质量管理，保证结果准确可靠-- 检测服务效率高，过程实时监控-- 检测仪器灵敏度高，样品消耗量低-- 实验周期短，节省等待时间-- 提供真正的一站式服务：从构建文库到阳性克隆的筛选，这样可提高效率，避免错误，从而为客户从客观上节省费用服务内容服务流程内容周期客户提供不少于2 μg的质粒（含诱饵靶基因）以及该基因的DNA序列，以便我们设计合成方案，进行人工合成（需收费）***创建BD-X诱饵将诱饵靶基因连接到Y2H载体中去，并测序；诱饵靶基因可以是一段基因（酶切）或全长基因6-8周通过BD-X诱饵测试自我激活测试诱饵基因的自我激活能力和毒性酵母双杂交筛选并获得识别猎物文库筛选和交互验证，阳性克隆的分离提取和DNA的测序交付阳性克隆若干及DNA测序结果，每个阳性克隆不少于2 μg质粒

Catalog Number:TKPA112Product Name:Rabbit Anti-Alpaca total IgG Polyclonal Antibody, FITCSize:50ul, 100ulApplications:WB, ELISA, IHCIsotype:IgGBuffer:Supplied in PBS, PH7.4Background:The Rabbit Anti-Alpaca total IgG Polyclonal Antibody, FITC is produced in rabbit using purified alpaca total IgG as the immunogen. This antibody can be used in ELISA and WB and are suitable for other immunoassay applications. The antibody may cross-react with immunoglobulins from other species.Storage:This antibody can be stored at 2℃-8℃ for one month without detectable loss of activity. Antibody products are stable for twelve months from date of receipt when stored at -20℃ to -80℃.Shipping Condition:Blue iceNOTE:This product is used for research use only. Not for human or diagnostic use.