【实验步骤】凝胶迁移或电泳迁移率(EMSA)

原理

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

EMSA实验步骤

1.探针的标记

2.探针的纯化

3.EMSA 胶的配制

4.EMSA结合反应

5.电泳分析

需知

方法: 同位素P32标记探针/生物素/荧光素标记/进行检测。

技术要点

实验过程包括核蛋白的提取,同位素标记/生物素/荧光素标记/与纯化,凝胶电泳,胶片暴光等。在EMSA操作中会用到同位素,要注意实验室环境和实验员的保护。

整体课题实验外包：19931682702（同微信）