常见实验项目样本qPCR、WB、ELISA、透射电镜等检测

一、分子生物学平台

1. 荧光定量PCR样本收集运输

A. 细胞：

a.贴壁细胞

以6孔板培养的细胞为例，吸掉培养基，用PBS洗一次，吸掉PBS，加1ml Trizol，将底部细胞吹打起来，转入1.5mlEP管，裂解细胞。-80度冻存，干冰运输。

b.悬浮细胞

将培养基及细胞转入1.5 mLEP管，5000转3 min离心，离心完吸掉上清，加1 mL Trizol，吹打混匀，裂解细胞。-80度冻存，干冰运输。

c.贴壁细胞和悬浮细胞混合

将底部细胞吹打起来，转入1.5 mL EP管，5000转3 min离心，离心完吸掉上清，加1 mL Trizol，吹打混匀，裂解细胞。-80度冻存，干冰运输。

B. 组织：

客户提供的组织，质量请勿低于100 mg，约黄豆粒大小，可直接-80度冻存，干冰运输，也可加入1 mL Trizol后，再行-80度冻存，干冰运输

C. 骨类:

液氮条件下粉碎，之后再加入1 mL Trizol研磨，-80度冻存，干冰运输。

D. 其他形式样本:

a.血清、血浆、尿液样本

请提供至少1 mL样本；请在采集样本时立即加入专用trizol，使用比例为样本体积：Trizol体积=1:3。-80度冻存，干冰运输。液体样本不建议直接冻存，请一定在采集样本时加入专用trizol再行冻存寄送。

b.全血

新鲜抗凝全血，按照1:3加入1×红细胞裂解液，裂解10 min，12000 转3 min离心，倒掉废液，留存管底外周血单个核细胞沉淀，加1 mL Trizol，吹打混匀，-80度冻存，干冰运输。

2. ELISA/生化检测样本收集运输

(1)组织样品：黄豆粒大小组织样本，冻存，低温（液氮或干冰）运输。

(2)血清（24小时内处理）：全血样品于室温放置2h或4℃静置过夜，1000 r/min离心20 min，取上清待测。

(3)血浆（24小时内处理）：用抗凝管收集血样或往血样品中加抗凝剂，1000 r/min离心15 min，取上清待测。

(4)细胞培养上清：取细胞培养上清1000 r/min离心20 min，取上清待测。

(5)其他液体样品（如尿液，透析液等）：1000 r/min离心20 min，取上清待测。

注意：

a.样品处理后的上清可-20℃保存1个月或-80℃保存6个月；

b.如果取得上清比较浑浊,可稍微提高转速将上清再次离心。

二、Western Blot平台

1.样本种类

细胞 、动物组织（心、肝、脾、肺、肾、胰、角膜、血管、脊髓、脑）、植物组织（花、叶子）等

2.样本收集

(1)组织样本：需提供的组织，质量请勿低于100 mg，约黄豆粒大小，可-20度冻存，干冰运输。

(2)细胞样本：

a．贴壁细胞，数量不低于1*10^6个，将细胞用胰酶消化下来转入EP管，5000 rpm离心3 min，去上清，加入1 mLPBS重悬后转入新的1.5 mL EP管中，5000 rpm离心3 min，去上清后，PBS再次洗涤一次，留取细胞沉淀，-20℃保存，干冰运输。

b．悬浮细胞，数量不低于1*106个，将培养基及细胞转入EP管，5000 rpm离心3 min，去上清，加入1 mL PBS重悬后转入新的1.5 mL EP管中，5000 rpm离心3 min，去上清后，PBS再次洗涤一次，留取细胞沉淀，-20℃保存，干冰运输。

(3)蛋白样本：需提取好的蛋白样本，蛋白浓度应不低于2 μg/μl，-20℃保存，干冰运输。

三、 细胞平台

1.活细胞

加满培养基；用不透气培养瓶；常温或4℃运输；培养瓶外用自封袋给予包装；细胞量在60-80%为宜；快递最好能在2天内到货；

2.冻存细胞

干冰运输，最好提供2管冻存细胞。

注意：

a.凡是需要我公司进行培养的细胞都要求无菌；

b.直接实验的细胞必须保证细胞量；

c. 流式检测的细胞须告知是否携带有荧光标记。

四、病理学平台

1. 常规病理样本

(1)固定样本：

a. 取材后立即固定，固定时间超过半年的样本做免疫组化或免疫荧光效果可能不好；

b. 固定液体积至少为组织5倍以上，灌注固定的组织除外；

c. 组织的最终包埋切面需要说明清楚；

d. 固定好的组织只能放在常温或4度冰箱保存，绝对不能放在-20度冰箱保存；

e. 如果组织样本处理不符合处理标准（如有的组织外观破烂不完整，包埋切片后达不到客户要求），则不能接收。

(2)蜡块：

取样时核对清楚蜡块数量，常温运输；

(3)石蜡切片：

a. 石蜡切片的保存与运输条件为常温或4度。

b. 玻片应用专用的盒子装好，并固定，避免运输过程中切片碎掉；

2. 透射电镜样本

(1)组织样本：

取材时应尽可能小，一般要求米粒大小，取材后立即用2.5%戊二醛或电镜专用固定液固定，4℃保存，不可常温或冰冻保存，运输过程中应加入冰袋，且避免样本与冰袋直接接触；

(2)细胞样本：

细胞量要求1*10^6个，细胞消化离心后转移至1.5 mLEP管，PBS洗3遍后弃去PBS，向细胞沉淀中加入1 mL 2.5%戊二醛或电镜专用固定液，然后轻轻将细胞沉淀吹散，4℃保存，不可常温或冰冻保存，运输过程中应加入冰袋，且避免样本与冰袋直接接触；

3. 抗体

(1)一抗的运输条件为4度冰盒运输；

(2)二抗及二抗试剂盒的运输条件为4度冰盒运输；

(3)若提供的一抗种属来源不是大鼠、小鼠、兔、山羊，则需要另提供对应的二抗。