笃玛 羊抗人C4血清 说明书

羊抗人C4血清
标本要求
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3.尿液：
用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

羊抗人C4血清
操作步骤
试管法（改良 Mayer 法）
1、致敏羊红细胞： 2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（ 1:2000），混匀，置 37℃水浴 30min。
2、稀释血清：待测血清 0.2ml，加应用液 3.8ml，稀释度为 1:20。
3、配制溶血标准管：全溶血管:2%绵羊红细胞 2ml 加 8ml 蒸馏水，混匀。
                   50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加缓冲液 2ml。
4、按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置 37℃水浴 30min， 第 10 管为非溶血对照：补体 CH50 测定试管法
 5、结果测定：取出试管， 2000r/min 离心 10min，对照管应不溶血。肉眼比色，选与 50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测（波长 542nm、 0.5cm 比色杯） OD 值，
确定与标准管最接近者为终点管，然后按下公式计算 CH50 值：
          血清补体 CH50（ U/ml） =（ 1/血清用量）×稀释度。
如第 5 管为终点管，测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。

羊抗人C4血清
试剂及配制
1、缓冲生理盐水：
（ 1） 贮存液： Na2HPO4.12H2O 2.85g
                KH2PO4 0.27g
                NaCl 17.00g
                蒸馏水定容至 100ml
                4℃保存备用
（ 2）应用液： 5ml 贮存液加 95ml 蒸馏水，再加 10%硫酸镁 0.1ml， 当日配制， 12 小时内使用。
2、2%绵羊红细胞：无菌采取绵羊血液，于等量 Alsever 液中可保存 3 周。用前以缓冲液洗 3次，并配成 2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
3、溶血素：将绵羊红细胞溶血素（效价 1:4000），用应用液做 1:2000 倍稀释（即 1ml 溶血素加 1999ml 应用液）。
4、待测血清：新鲜血液室温放置 30min，再 4℃放置 60min，使血块收缩， 4℃离心（ 3000r/min）10min，取上清，-20℃保存。