本试剂盒运用竞争抑制ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、尿液和其它相关生物液体中CORT含量。
试剂盒内容
试剂名称 | 数量 | 试剂名称 | 数量 |
96孔板(预包被) | 1 | 96孔板覆膜 | 4 |
标准品 | 2 | 标准品稀释液 | 1×20mL |
检测溶液A | 1×70μL | 检测稀释液A | 1×12mL |
检测溶液B | 1×120μL | 检测稀释液B | 1×12mL |
TMB底物 | 1×9mL | 终止液 | 1×6mL |
浓洗涤液(30×) | 1×20mL | 使用说明书 | 1 |
需自备的设备及试剂
1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2. 单道或多道微量加液器及吸头
3. 稀释样品的EP管
4. 蒸馏水或去离子水
5. 吸水纸
6. 盛放洗液的容器
试剂盒的储存及有效期
1. 未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将TMB,洗涤液,终止液保存于4℃,其他试剂保存于-20℃。
2. 使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,避免潮湿。
注意:
试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
标本的采集与保存
1. 血清:
将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃ 过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:
用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8℃ 1000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,但应避免反复冻融。
3. 尿液:
请收集清晨第一次尿液(中段尿),或24 小时尿液,2000×g 离心15 分钟后收集上清,并将标本保存于
-20 ℃,且应避免反复冻融。
4. 细胞培养上清或其它生物标本:
请 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,但应避免反复冻融。
注意:
1. 以上标本均需密封保存,4℃保存应小于1周,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月。
2. 标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。
3. 实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。
试剂准备
1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25℃),试剂不能直接在37℃溶解。
2. 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为500Ng/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入250μL的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成500ng/mL,250ng/mL,125ng/mL,62.5ng/mL,31.2ng/mL,15.6ng/mL,7.8ng/mL,标准品稀释液(0ng/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
Stock 250μL 250μL 250μL 250μL 250μL 250μL
Standard
Tube | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
Ng/mL | 500 | 250 | 125 | 62.5 | 31.2 | 15.6 | 7.8 | 0 |
3. 检测溶液A及检测溶液B:Detection A 及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液A或B1:100稀释(如:10μL检测溶液A/990μL检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100