系统性红斑狼疮模型

系统性红斑狼疮发病机制综述^[1]

遗传、环境、激素、表观遗传和免疫调节因素依次或同时作用于免疫系统。致病因素的作用导致自身抗体、免疫复合物、自身反应性或炎症性T细胞和炎症细胞因子的产生，这些细胞可能启动和放大各种器官的炎症和损伤。受局部因素影响，靶器官可能进一步受损。

流行病学数据显示，我国SLE疾病负担较重，预估发病率约为8.57/10万人年，位居全球第四位^[2]。其中约90%的SLE患者是女性，其余10%为男性及儿童。研究显示，SLE患者5年生存率从20世纪50年代的50%~60%升高至90年代的超过90%，并在2008年~2016年逐渐趋于稳定。SLE已由既往的急性、高致死性疾病转为慢性、可控性疾病^[3]。

SLE传统治疗药物包括糖皮质激素、抗疟药、免疫抑制剂、富马酸酯、间充质干细胞、小剂量白细胞介素2（IL2）、生物制剂等。目前，获批上市用于治疗SLE的靶向生物药仅3种。

BioMice百奥动物自主开发了一系列稳定的靶点人源化小鼠模型，能够在不同方面模拟SLE发生发展过程，为临床前开发、评价更有效的SLE治疗药物提供了相应的疾病模型，加速了相关药物的研发进程。部分模型数据展示如下：

肿瘤中的TWEAK/Fn14信号通路^[4]。将TWEAK与Fn14结合导致Ect2 GEF激活Cdc42，随后由Trio GEF激活Rac1，促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。TWEAK/Fn14信号同时激活经典和替代NF-κB通路，诱导细胞因子、趋化因子、粘附分子的产生。TWEAK/Fn14相互作用激活TRAF2信号通路。然后，Fn14招募一个cIAP1 TRAF2复合体。cIAP1使细胞对TNF-α敏感。TNF-α通过与TNFR1和TNFR2两种受体结合产生不同的效应。TNFR1可诱导细胞死亡，TNFR2可促进细胞增殖。

BAFF和APRIL受体相互作用^[5]。B细胞刺激分子BAFF和APRIL是维持B细胞和体液免疫的关键因素。BAFF和APRIL可以裂解成三聚体可溶性细胞因子，也可以组装成异构体。BAFF结合它的三个受体具有不同的亲和力：它与BAFF-R结合最强，其次是TACI，与BCMA结合较弱。APRIL是BCMA的首选配体，其次是TACI。APRIL还在细胞外基质和肿瘤或其他细胞表面与HSPG结合，触发APRIL多聚化并通过TACI实现信号传递。BAFF通过BAFF-R信号通路使用NF-κB和PI3K通路，而APRIL信号通过NF-κB通路与BCMA和TAC结合。

纯合B-hTWEAK/hAPRIL小鼠中种属特异性APRIL表达的流式细胞术分析。采集野生型(WT)小鼠和纯合B-hTWEAK/hAPRIL小鼠脾细胞，用抗APRIL抗体流式细胞术分析。由于抗体的交叉反应性，在WT小鼠和纯合B-hTWEAK/hAPRIL小鼠中检测到APRIL。

人B细胞激活因子和增殖诱导配体抑制剂的作用机制^[6]。B细胞激活因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)与三种受体B细胞激活因子受体(BAFF-R)、跨膜激活剂和钙调节剂和亲环配体相互作用剂(TACI)和B细胞成熟抗原(BCMA)结合不同。选择性BAFF抑制剂阻断可溶性BAFF或可溶性和膜性BAFF与其受体之间的相互作用，使APRIL功能完整，而BAFF/APRIL双抑制剂atacicept (TACI-Ig)阻断BAFF和APRIL与所有三种受体的相互作用。BAFF抑制会消耗B细胞并改变自身反应性B细胞的选择，并可能对T细胞和树突状细胞(DC)有直接或间接的影响。

用ELISA法分析野生型(WT)小鼠和B-hBAFF小鼠中BAFF的表达。采集WT小鼠和杂合B-hBAFF小鼠血清，采用种属特异性BAFF ELISA试剂盒进行ELISA分析。在WT小鼠和杂合B-hBAFF小鼠(H/+)中检测到小鼠BAFF。人BAFF仅在杂合B-hBAFF小鼠中检测到。ND:检测不到。

纯合B-hBAFFR小鼠中种属特异性BAFFR表达的流式细胞仪分析。取WT和纯合B-hBAFFR小鼠脾细胞，用种属特异性抗BAFFR抗体流式细胞术分析。小鼠BAFFR在WT小鼠中检测到。人BAFFR仅在纯合B-hBAFFR中检测到，而在WT小鼠中检测不到。

蛋白表达分析

流式细胞术分析纯合B-hBAFF/hBAFFR小鼠中种属特异性BAFFR的表达。从野生型(WT)小鼠和纯合B-hBAFF/hBAFFR小鼠采集脾脏、淋巴结和血液中的B细胞，用种属特异性抗BAFFR抗体流式细胞仪分析。在WT小鼠中检测到小鼠BAFFR。人BAFFR仅在纯合B-hBAFF/hBAFFR小鼠检测到，而WT小鼠(+/+)则没有。

C1q在免疫稳态中具有基本的抑制作用^[7]。a.在描述良好的凋亡细胞清除通路中，C1q与吞噬细胞上的各种gC1q和C1q尾部受体相互作用，导致细胞因子产生/炎症反应的调节。C1q胶原蛋白尾部与LAIR-1之间的相互作用可阻止pDCs和单核细胞产生I型ifn和炎症因子，并在稳态或炎症状态下抑制DC分化和激活。

PDC浆细胞样树突状细胞，Mono单核细胞，moDC单核细胞来源的树突状细胞。

ELISA法检测C1Q在野生型C57BL/6小鼠和纯合B-hC1Q小鼠中的表达。采集野生型C57BL/6小鼠和纯合B-hC1Q小鼠血清。小鼠C1Q仅在野生型小鼠中检测到。C1Q在野生型C57BL/6小鼠和纯合B-hC1Q小鼠中均可检测到。因此，推测该抗人C1Q抗体在人鼠之间具有交叉反应性。

BDCA-2靶点全名为血液树突状细胞抗原2，也叫CLEC4C或CD303。CD303与FcRγ-链相关，在BCR样信号体中发出信号。触发CD303导致Syk的激活，SLP65的募集和PLCγ2的活性。在pDC中，PLCγ2-PKC通路可能在CD303触发后对NF-kB通路起负调控作用，并抑制IFN-I基因。越来越多的证据表明，pDC作为IFN-I的主要生产者可能在SLE的发病机制中发挥作用。pDC衍生的I型IFN被认为在SLE的致病性中发挥重要作用。血液树突状细胞抗原(BDCA2)是一种受体，特异性表达于人类和非人类灵长类动物的pDCs上，抑制TLR7和TLR9介导的I型IFN^[8,9]。

流式细胞术分析B-hCLEC4C小鼠中种属特异性CLEC4C表达。采集野生型C57BL/6小鼠、杂合B-hCLEC4C小鼠和纯合B-hCLEC4C小鼠脾细胞，用抗CLEC4C抗体进行流式细胞术分析。人类CLEC4C仅在B-hCLEC4C小鼠的浆细胞样树突状细胞(pDCs)中检测到，而在野生型小鼠中检测不到。在B-CLEC4C小鼠和野生型小鼠的T细胞、B细胞和NK细胞中均未检测到人CLEC4C。

参考资料：

[1] Tsokos GC. Systemic lupus erythematosus. N Engl J Med. 2011, 365(22):2110-21.

[2] Tian J, Zhang D, Yao X, et al. Global epidemiology of systemic lupus erythematosus: a comprehensive systematic analysis and modelling study. Ann Rheum Dis. 2022 Oct 14:ard-2022-223035.

[3]曾小峰,陈耀龙.2020中国系统性红斑狼疮诊疗指南[J].中华内科杂志,2020(3):172-185.

[4] Hu G, Zeng W, Xia Y. TWEAK/Fn14 signaling in tumors[J]. Tumor Biology, 2017, 39(6): 1010428317714624.

[5]Samy E, Wax S, Huard B, et al. Targeting BAFF and APRIL in systemic lupus erythematosus and other antibody-associated diseases[J]. International reviews of immunology, 2017, 36(1): 3-19.

[6]Boneparth A ,  Davidson A . B-cell activating factor targeted therapy and lupus[J]. Arthritis Research & Therapy, 2012, 14(4 Supplement):S2-S2.

[7]Son M, Diamond B, Santiago-Schwarz F. Fundamental role of C1q in autoimmunity and inflammation. Immunol Res. 2015;63(1-3):101-106. doi:10.1007/s12026-015-8705-6

[8]Röck J, Schneider E, Grün JR, et al. CD303 (BDCA-2) signals in plasmacytoid dendritic cells via a BCR-like signalosome involving Syk, Slp65 and PLCgamma2. Eur J Immunol. 2007;37(12):3564-3575. doi:10.1002/eji.200737711

[9]Pellerin A, Otero K, Czerkowicz JM, et al. Anti-BDCA2 monoclonal antibody inhibits plasmacytoid dendritic cell activation through Fc-dependent and Fc-independent mechanisms. EMBO Mol Med. 2015;7(4):464-476. doi:10.15252/emmm.201404719