cas9 基因编辑腺相关病毒(AAV)包装

基于先进的腺病毒技术平台，维洛信现提供AAV定制服务，可适用于多种基因操作与编辑策略。我们采用三质粒共转染的Helper-free系统在293T细胞中进行AAV的生产与包装，并建立了完善的纯化与质控方法，生产的AAV颗粒可直接应用于各类体内体外实验。

- 基于CRISPR的基因敲除的AAV载体构建与包装
CRISPR系统是目前最常用的基因打靶系统之一。维洛信提供基于CRISPR系统的AAV载体构建预包装服务，根据目的基因设计short guide RNA (sgRNA) 序列并构建入我们专有的AAV载体pAAV-CR，进而断裂DNA双链，实现对基因的精确敲除。

-Cre-LoxP重组系统的AAV载体构建与包装
将Cre-LoxP重组系统与具有高效和特异感染的AAV载体结合，实现目的基因组织和时间的可控表达。

-Tet-on转录系统的AAV载体构建与包装
四环素转录调控系统（Tetracycline-Controlled Transcriptional Activation, Tet-on/off）是能够定时开启/关闭特定基因表达的转录调控系统。维洛信提供Tet-on转录系统的AAV载体构建与包装服务，实现基因的诱导表达。

腺相关病毒优势：

1. 宿主范围广：可感染分裂细胞与非分裂细胞；多种亚型具有多种组织亲嗜性，可以应用于神经系统、心肌、肝脏、眼睛、肌肉等定位注射。
2. 扩散性佳：体积小、滴度高，具有远优于腺病毒与慢病毒的扩散性，可穿越血脑屏障，是优秀的神经元与胶质细胞感染工具。
3. 安全系数高：迄今未发现野生型AAV对人体致病；ITR与rep/cap基因分别由独立的质粒传导表达，进一步去除感染风险。
4. 免疫原性低：仅4.7kb的基因组便于重组DNA技术操作，在动物实验中局部大剂量使用极少造成非特异性反应与免疫抑制。
5. 长时稳定表达：AAV感染可介导外源基因发生低频（<2%）定向整合，绝大多数重组AAV感染细胞后不会整合入基因组，而是在宿主细胞内形成伴随体，因此AAV能够介导外源基因长期、稳定的复制转录。
6. 稳定性好：AAV在60℃不会被灭活，能抵抗多种有机溶剂的处理（例如氯仿）

不同的AAV亚型具有不同的组织嗜亲性，我们推荐根据实验靶向的器官/细胞，选择具有相应亲和性的AAV亚型进行构建，能够有效提高感染效率。

服务流程：

1. 方案沟通
2. 基因克隆：将目的基因片段构建入我们的专有AAV转移质粒，测序验证
3. 病毒包装：三质粒共转染（转移质粒+病毒包装质粒+辅助质粒）入293T细胞
4. 收毒：72h孵育后分别收获培养上清与细胞沉淀中的病毒
5. 纯化浓缩：碘克沙醇梯度离心，高效的分离空衣壳病毒与细胞杂质，将具备感染力的病毒富集到90%以上；超滤浓缩
6. 质量控制：
- 多重酶切质粒鉴定
- qPCR检测病毒滴度
- SDS-PAGE/考马斯亮蓝测定纯度
- 细胞转导检测（带有荧光标签）
- HPLC/内毒素检测/微生物检测（高纯度AAV可选）

交付内容：

定制AAV病毒颗粒
对照病毒（可用于转导测试）
详细实验报告

维洛信腺相关病毒平台：

1. 创新性AAV载体与严格制备工艺，力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的AAV产品
2. 多种AAV血清型可供选择（AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...）
3. 20余种组织特异性启动子（CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等）与多种报告基因（EGFP、mCherry、RFP，EYFP等）可供选择，满足您的不同需求
4. 滴度高：维洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒，满足大部分实验的使用要求
5. 灵活生产：我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒（小规格、中规格、大规格）的制备服务
6. 具有竞争力的价格与货期

针对不同应用方向，我们还提供以下AAV制备服务：

用于基因过表达的腺相关病毒（AAV）制备>>
用于RNA干扰的腺相关病毒（AAV）制备>>
用于表达/抑制microRNA的腺相关病毒（AAV）制备>>