缓激肽是一种血管活性肽，参与炎症、血管舒张以及细胞生长存活过程。在哺乳动物细胞和组织中，缓激肽主要通过两种受体亚型起作用，即缓激肽B1受体（B1R）和缓激肽B2受体（B2R），它们都是跨膜受体，属于视紫红质样G蛋白偶联受体（GPCR）超家族，都可以偶联到G蛋白的Gαq和Gαi家族，导致细胞内Ca2+和磷酸肌醇(PI)释放增加，花生四烯酸释放和NO产生。B1R和B2R在组织中的表达不同，B2R在哺乳动物组织中广泛分布且呈组成型表达，参与血管舒张、渗透调节、平滑肌收缩和痛觉感受器激活。相反，B1R在正常情况下不表达，而是通过组织损伤或炎症介质上调。研究发现，B1R和B2R与炎症性疾病、血管病变、神经病变、肥胖、糖尿病和癌症有关，目前已成为比较重要的治疗靶点。爱思益普团队已开发出B2靶点的相关检测平台，助力新药研发。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

肾上腺素受体是目前研究较为清楚的一类G蛋白偶类型受体，目前，已知肾上腺素受体有三类（α1, α2和β）九种亚型（α1A, α1B, α1D, α2A, α2B, α2C, β1, β2和β3）。其中，α1类型受体通过偶联Gq通路，促进Ca2+的产生；α2类型受体通过偶联Gi通路，抑制cAMP的产生；β受体可以偶联Gs通路，促进cAMP的产生。2007年，β2肾上腺素受体是第一个人源G蛋白偶联受体的晶体结构，是G蛋白偶联受体结构解析的重大突破。2011年，β2肾上腺素受体和G蛋白的复合物结构获得解析，该工作获得了2012年诺贝尔化学奖。该受体广泛参与肌肉收缩、外周血液循环及中枢神经系统活动等生理活动。α1受体主要分布于皮肤、黏膜及内脏血管，参与肝糖原代谢、平滑肌收缩及心肌变时变力等；α2受体主要分布于突触前膜，具有调节炎症、抗抑郁的功能。β1受体主要分布于心脏，调节心肌功能与调节血压，与心肌纤维化、心力衰竭、高血压等疾病密切相关。β2受体主要分布于骨骼肌血管、冠状动脉、支气管平滑肌，支气管平滑肌松弛、血管舒张，与支气管哮喘及高血压等有关。β3受体主要分布于棕色和白色脂肪组织，参与了调节糖代谢、脂质代谢、心血管及胃肠道功能等。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

体外药理学分析的主要优势1，可以在早期阶段识别出脱靶作用，并可以在结构-活性关系（SAR）研究中优化2，可以预测在体内安全药理学研究，毒理学研究或临床试验中可能遗漏的临床副作 用：例如，与5-羟色胺（5-羟色胺）受体2B（5-HT2B）激动剂引起的瓣膜病3，可以对包括代谢产物在内的大量化合物进行临床药物不良反应（ADR）相关靶标 的低成本体外测试4，可以在药物发现的早期阶段对代表性的化学系列进行测试，以寻找最佳先导化合 物和候选药物5，与体内毒理学研究相比，可以在更短的时间内获得脱靶效应的结果和潜在解释6，以最少或没有脱靶活性进入研发阶段的化合物，需要进行的体内安全性研究较少， 因此可减少研发延误，减少使用的动物模型并降低成本功能测定的优势：与功能相关，数据准确性高 • 不论化合物与靶标的任何位置结合，都能够确定最终效应 • 能够区分不同的作用方式（MOA，激动效应，拮抗效应） • 更适合对具有多个结合位点的复杂靶标（例如离子通道） • 能够直接测量激动剂EC50 结合测定 ：无法区分功能，阳性结果需要功能验证 • 仅测定在靶标上结合的单个确定的位点 • 无法区分作用方式（即激动剂与拮抗剂或阻断剂） • 对具有多个结合位点（例如离子通道）的复杂靶标需要进行多种测定 • 可能会错过高效，低亲和力的激动剂

在药物研发过程中，降低高损耗率是制药公司的首要目标。建立药物安全性评价筛选模型，有助于了解候选药物的安全性，减少高损耗率，同时实现药物疗效与潜在不良反应之间的平衡。据估计，大约75%的药物不良反应（ADRs）是剂量依赖性的（A型），可以根据候选化合物的药理学特征（A ADRs）进行预测。A ADRs可分为主要效应与次要效应，主要效应与化合物对其预期靶标的作用有关，而次要效应是由于与主要靶标以外的靶标的相互作用（即脱靶效应）。而脱靶效应往往会导致ADRs，因此，在药物研发早期阶段，对候选药物进行体外药理安全性分析，有利于降低临床研究中的ADRs。同时，在药物研发早期阶段识别脱靶倾向，也有助于制定策略来改进候选药物。脱靶效应可能会导致不良反应或药物研发中断，而体外药理学安全性分析可以检测药物不良反应、预测药物潜在风险和评估药物安全范围。我们根据AstraZeneca，GlaxoSmithKline，Novartis和Pfizer共同建议的检测脱靶效应的44个早期药物安全性靶点，另外增加了46个与中枢神经系统、心血管系统、代谢、免疫等与不良反应相关的重要靶点，发展成目前90个靶点的安全性评价筛选模型。SafetyMax90为临床前候选化合物（PCC）优化提供数据，识别脱靶效应，有利于筛选药物，对候选药物ADRs进行评估与改进。我们通过功能活性筛选的方法评价化合物对靶点的激动或抑制作用，从而评估化合物的安全性，为化合物的后期研究提供参考依据，使客户能够快速、准确地评估、预测和缓解药物ADRs的潜在风险，尽早识别不安全的化合物，并设计、筛选出更好的候选药物，增加上市药物的可能性。图2 爱思益普mini-safety panel安全靶点和验证（部分）北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

一．模型背景肺纤维化疾病病变主要侵犯肺间质和肺泡腔，包括肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细胞、基底膜以及血管、淋巴管周围的组织，最终引起肺间质的纤维化，导致肺泡及毛细血管功能的丧失。间质性肺炎和肺纤维化是对同一类疾病的不同描述方式，间质性肺炎是病理学上的一个分类名称，而肺纤维化是在影像学和临床使用的疾病名称。目前特发性肺纤维化（IPF）的发病机制仍不明确，目前公认的发病机制理论假说是上皮细胞假说。上皮细胞损伤导致炎症介质的分泌，并触发血小板活化，从而增强血管通透性，以募集白细胞。这些炎症细胞释放促纤维化细胞因子，如TGF-β1，介导成纤维细胞的活化和募集，以及它们分化成肌成纤维细胞，并随后释放细胞外基质（ECM）成分以促进伤口愈合。生理条件下，纤维生成是对组织损伤的反应，并形成伤口修复过程的一部分，参与恢复稳态。伤口修复通常由上皮损伤引起，导致凝血和炎症级联反应的激活。这反过来导致成纤维细胞的激活、募集和增殖，这些细胞负责ECM成分的释放。在最后的重塑阶段，伤口区域得到了修复，恢复了正常的组织结构和结构完整性。在与IPF相关的纤维化过程中，伤口修复过程的任何阶段都可能发生失调，导致瘢痕组织的不可逆积累。一．造模方法本研究选用SD大鼠或者C57小鼠，通过博来霉素(5mg/kg)或者脂多糖(5mg/kg)气管内给药，建立特发性肺纤维化模型；检测阳性药吡非尼酮及化合物对特发性肺纤维化大鼠的影响。造模方法：1.麻醉动物，仰卧固定于实验台上；2.颈部去毛后碘伏消毒，切开皮肤，逐层暴露气管；3.将微量注射器经两气管软骨环间隙朝向心端刺入气管，回抽无阻力后，注入LPS溶液或者BLM溶液；4.手术完毕后迅速将动物直立、旋转，使药液在肺内分布均匀；5.动物清醒后常规饲养，注意术后护理；6.给予阳性药吡非尼酮。检测结果：一．结果分析检测指标：检测动物血清中NO含量、检测动物血清中IL-1β含量、肺组织病理学HE染色、肺组织病理学Masson染色、肺系数、肺组织湿/干重1.肺组织病理学HE染色：在Day21和Day28时，与Sham组相比，LPS组小鼠肺泡间隙增宽，病理学评分为4，肺泡腔内纤维化渗出严重，病理学评分为4，血管周围炎性细胞浸润严重，病理学评分为4，肺泡结构严重破坏；与Sham组相比，PFD组肺泡间隙增宽，病理学评分为2，肺泡腔内出现纤维化渗出，病理学评分为2，血管周围出现炎性细胞浸润，病理学评分为2，肺泡结构部分被破坏。肺组织病理学Masson染色显现出：在Day21和Day28时，与Sham组相比，LPS组小鼠肺组织出现大量胶原沉积，肺泡结构破坏严重，肺纤维化程度极其严重；与Sham组相比，PFD组出现少数胶原沉积，肺泡部分结构被破坏，肺部出现轻微肺纤维化现象。1.小鼠血清中IL-1β的含量：与LPS组相比，Sham组与PFD组血清中IL-1β的含量明显降低，差异极其显著。2.肺系数对比结果：，与LPS组相比，Sham组明显降低，有差异；PFD组有降低。3.右肺组织湿干重比（W/D）结果：与LPS组相比，Sham组和PFD组明显降低，有差异。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

一 Social Defeat模型研究背景：社交挫败抑郁，也称为社交心理障碍，表现为与人交往时（尤其是大众场合下），会不由自主地感到紧张、害怕，以致手足无措、语无伦次，严重的甚至害怕见人，常称为社交恐惧症、人际恐怖症。其中有些人主要表现为对异性的恐惧，称为异性恐惧症。在社会交往中想象成功的体验少，想象失败的体验多，缺乏自信，总认为自己不行，缺乏交往的勇气和信心。社会交往中过多地约束自己的言行，以致无法充分地表达自己的思想感情，阻碍了人际关系的正常发展等。随着人类文明的进步以及生活节奏的加快，越来越多的人受到不良情绪带来的负面影响，因此建立用于研究抑郁症的模型是研究精神心理学问题的重要基础。由于以下原因Social defeat模型被人们认为是可靠且可重复性的抑郁模型：1.实验周期较短，实验的稳定性和可重复性较高。2.可以较好的同时满足疾病同源性，表象一致性，药物可预见性。3.社会挫败应激的影响可以持续一个月，因此筛选抗抑郁剂和评估阳性药引起生理变化时,可以在 10d模型后连续给药观察，这样不会因造模过程中给药带来的外伤刺激影响模型的成败。二 Social Defeat模型建立：1、雄性ICR小鼠单笼饲养1-2天，用C57小鼠对其进行攻击性筛选：从C57放入ICR鼠笼中开始计时，记录ICR小鼠的攻击潜伏期以及3min内ICR小鼠攻击C57小鼠的次数，连续筛选3-4天；2、筛选出ICR中至少连续3天攻击潜伏期＜60s且攻击次数＞2的ICR小鼠参与后续建模；3、筛选出的ICR小鼠放进改造过的大鼠笼至少24h，然后将参与建模的C57小鼠放入鼠笼中ICR一侧，让ICR小鼠攻击C57小鼠10min，10min后将C57小鼠放在鼠笼分隔出的另一边24h，两只小鼠中间用带孔的隔板隔断；4、第二天C57小鼠交换一个ICR鼠笼，继续上述操作，连续10天；5、第11天，对建模后的动物使用社交回避实验筛选易感小鼠，同时对建模成功的小鼠检测其抑郁样行为——悬尾实验，2%蔗糖偏好实验；三 Social Defeat模型检测方法1、悬尾测试1）实验开始前所有实验动物均在测试环境下适应1h；2）使用医用纸胶带在距小鼠尾尖2cm处将小鼠悬挂到实验设备上；3）记录动物从挂上仪器开始，6min内的状态；并对后4min的小鼠静止不动时间进行统计分析；2、糖水偏好测试1）配制2%浓度的蔗糖溶液，在单笼饲养的小鼠笼上分别放置一瓶糖水和一瓶白水；2）24h后将鼠笼上的白水和糖水交换位置，避免产生位置偏好；3）24h后，糖水适应性饲养结束；每只小鼠禁水禁食24h；4）重新配制糖水，并在给水前称量白水和糖水的质量；5）每只小鼠分别给一瓶糖水和白水，不给予饲料；6）24h后再次称量白水和糖水的质量，计算糖水减少量占总水量减少量的百分比作为糖水偏好率。四 结果分析通过悬尾试验、糖水偏好试验评价小鼠抑郁样行为。在糖水偏好实验中，模型组与正常组相比糖水消耗率存在极显著差异，反映出在造模后模型组小鼠出现了快感缺失，而阳性药和待测化合物均可带来明显改善。在悬尾试验中模型组与对照组的不动时间相比具有显著差异，反映出在造模后模型组小鼠出现了绝望行为，而阳性药和待测化合物亦可带来明显改善。快感缺失与绝望行为是抑郁症的两大主要症状。同时，使用ELISA法测定不同脑区内MAO(单胺氧化酶）的含量，结果显示在黑质、海马和中缝背核等脑区，模型组的MAO-A和MAO-B的表达量都出现显著上升，而阳性药和待测化合物能起到改善作用北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

产后抑郁（PPD）模型一．模型背景产后抑郁症是指女性于产褥期出现明显的抑郁症状或典型的抑郁发作，与产后心绪不宁和产后精神病同属产褥期精神综合征。发病率在 15%～30%，典型的产后抑郁症于产后6周内发生。在文献中，产后抑郁症通常被定义为发生在产后期间的重度抑郁症（但有时包括轻微抑郁症）。PPD的病因与多方面的因素有关，其中主要包括产后神经内分泌的变化和社会心理因素的改变。在生物学方面，妊娠后期体内雌激素、孕酮明显增高，皮质固醇、甲状腺素也在一定程度上增加。产后这些激素突然迅速撤退，雌激素和孕酮水平下降，大脑中5-羟色胺活性降低，从而影响高级脑活动；社会因素方面，家庭经济状况、夫妻感情不和、住房困难、婴儿性别和健康状况等都是重要的诱发因素；产妇心理因素方面，对母亲角色不适应、性格内向、保守固执的产妇好发此病。目前，关于产后抑郁的发病机制尚不清楚，许多临床研究显示PPD可能与雌二醇（E2）的撤退有关，产后女性内体的雌二醇和孕酮的变化和波动有可能是引起产后情绪失调的一个重要因素。二．造模方法1.雌性小鼠适应7天，手术摘除双侧卵巢；2.动物修养2周后，对雌鼠进行阴道涂片，检测体内激素情况；3.对雌鼠进行苯甲酸雌二醇（EB)和孕酮（P)诱导16天，接着高剂量EB诱导7天；随后进行阴道涂片，检测体内激素情况；4.进行行为学检测，检测雌鼠抑郁状态；5.给予阳性药Fluoxetine（10 mg/kg),灌胃给药，连续7天；6.进行行为学检测。三．数据展示1.双侧卵巢摘除模型验证（阴道涂片）-瑞氏染色2.行为学检测结果1)给药前行为学结果：2)Fluoxetine给药后行为学结果：3.结果评价1)阴道涂片结果：Control组明显可见很多无核的角化鳞状细胞，处于发情期；Model组、Fluoxetine组可见白细胞，处于发情间期（如Fig.1）。2)旷场试验结果：a.给药前与Control组相比，旷场试验结果显示Model组、Fluoxetine组穿过中心区域次数和运动总距离均低于Control组且存在极显著性差异（p＜0.001）（如Fig.2）；b.Fluoxetine给药后与Model组相比，旷场试验结果显示Fluoxetine组穿过中心区域次数和运动总距离均高于Model组且存在统计学差异（p＜0.05）（如Fig.5）。3)高架十字迷宫试验结果：a.给药前与Control组相比，高架十字迷宫试验结果显示Model组、Fluoxetine组运动总距离和进入开臂次数均低于Control组且存在极显著性差异（p＜0.001）（如Fig.3）；b.Fluoxetine给药后与Model组相比，高架十字迷宫试验结果显示Fluoxetine组运动总距离和进入开臂次数均高于Model组且存在统计学差异（p＜0.05）（如Fig.6）。4)糖水偏好试验结果：a.给药前与Control组相比，糖水偏好试验结果显示Model组、Fluoxetine组糖水偏好率均低于Control组且存在极显著性差异（p＜0.001）（如Fig.4）；b.Fluoxetine给药后与Model组相比，糖水偏好试验结果显示Fluoxetine组糖水偏好率高于Model组且存在显著性差异（p＜0.01）（如Fig.7）。综上所述：通过阴道涂片结果显示双侧卵巢摘除手术成功；通过行为学检测显示激素诱导的产后抑郁模型建立成功；检测出阳性药Fluoxetine对产后抑郁有改善作用。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

一．模型背景精神分裂症是一种慢性衰弱性神经精神疾病，影响着全球约1%的人口。症状分为三类：积极（包括听觉和视觉幻觉、妄想、概念混乱和思维障碍）、消极（情绪迟钝、社交退缩、快感缺乏、意志丧失、思想和言语内容匮乏）和认知功能障碍。精神分裂症是一种非常严重的精神疾病，给家庭和社会带来了沉重的负担。目前的研究主要是给予SD大鼠 NMDA 受体拈抗剂快速阻断受体功能，而引起异常行为，如活动增多、刻板行为、社会功能障碍、感觉运动门控障碍、以及学习和记忆功能障碍等。用典型抗精神病药物只能改善部分症状，其代表药物有氯胺酮、PCP、MK-801。其中MK-801可以模拟精神分裂的阳、阴性症状。二．造模方法1.SD大鼠环境适应适7天；2.大鼠在第8-13天腹腔注射MK801，连续6天；3.第14-18天测定PPI（提前适应PPI）、高架十字迷宫、旷场试验；4.在第35-37天给予阳性药Risperidone，连续3周；5.在测定PPI、高架十字迷宫、旷场试验。三．数据展示1.矿场检测结果2.高架十字迷宫检测结果3.前脉冲抑制检测结果4.结果评价l旷场试验结果：Fig.1显示，与Control组相比，Model组运动总距离明显提高，穿过中心区域的次数明显增加，有显著差异（P<0.001）；给药后与Model组相比，Risperidone组运动总距离明显降低，穿过中心区域的次数明显减少，有显著差异（P<0.001）；l高架十字迷宫结果：Fig.2显示，与Control组相比，Model组运动总距离明显提高（P<0.001），进入闭臂的次数有明显增加（P<0.01），有显著差异；给药后与Model组相比，Risperidone组运动总距离明显降低（P<0.001），进入闭臂的次数明显减少（P<0.01），有显著差异；lPPI（前脉冲抑制）结果：Fig.3显示，与Control组相比，Model组前脉冲抑制明显减弱甚至消失，Risperidone给药后，前脉冲抑制得到明显恢复（P<0.001）。综上所述：通过行为学检测发现MK801诱导的精神分裂模型建立成功；检测发现阳性药Risperidone对精神分裂疾病有一定的疗效。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

乙酰胆碱（Ach）是一种小分子兴奋性神经递质，广泛存在于哺乳动物的中枢神经系统，脑组织和体液中。是中枢胆碱能系统中重要的神经递质之一，其主要功能是维持意识的清醒，在学习记忆中起着重要作用。在人脑组织中有大量的乙酰胆碱，但乙酰胆碱会随着年纪的增加而减少，记忆力也随之下降，补充一定的乙酰胆碱，会明显减少记忆力的减退，其含量测定对神经运动学，运动生理学，临床医学等疾病诊断都有重要的意义。ICE团队利用液相色谱质联用法对Ach检测进行方法学验证，并开展了动物模型脑内神经递质的含量测试。对于神经递质检测，与传统的HPLC-ECD检测相比，UPLC-MS或UPLC-MS/MS具有灵敏度高，特异性强，检测时间短的优势。从而为客户提供更全面更细致有关神经递质相关的服务。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务。

在电生理hERG试验中，经常会出现药效减弱的情况。其中一种原因是因为有些药物的稳定性较差，配制完成后静置一段时间就会发生降解而引起了药效变化，不仅导致药效减弱而且会引起药物变质生成有毒物质。影响药物稳定性有很多因素，例如光照，温度，湿度等等都会影响药物的稳定性。所以药物的稳定性对药品的安全性至关重要。预测药物制剂的有效期，既能减少药物的损耗，也能保障药物的安全有效。我们利用供试品分析考察了某种药物的稳定性，首先配制出三个不同浓度的制剂，仪器分析合格后在室温遮光条件下放置6h后，再次取样检测分析，测得0.30 μM制剂中浓度均值为0.25 μM，准确度偏差为-16.67 %；3.00μM制剂浓度均值为2.57 μM，准确度偏差为-14.22%；30.0 μM 制剂中浓度均值为29.67 μM，准确度偏差为-1.11%；结果表明这种药物低中浓度稳定性均不合格（判定标准为RE%<10%），需现配现用进行试验，供试品分析对药物的稳定性评价，具有至关重要的作用。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务。