产品编号：TKPLG101产品名称：M13噬菌体文库构建试剂盒产品描述：The M13 Cloning Kit could be used for phage display library construction and is best used to display small peptides, i.e. sequences of 50 amino acids or less. The M13KE Vector is based on M13mp18 containing the entire M13 genome, with specific cloning sites at the 5’gIII, encoding pIII coat protein. The short peptide sequences are displayed as N-terminal pIII fusions.规格：1 set展示肽：peptides about 50 amino acids or less试剂盒成分：M13KE gIII Cloning Vector   M13 Extension Primer保存条件：Store at -20°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles.运输条件：Shipped on ice packs.Note：研究使用，不能用于其他用途

产品编号：TKPLS101产品名称：噬菌体展示环七肽库筛选试剂盒产品描述：The Phage Display C7C Peptide Library is based on a combinatorial library of random disulfide looped peptides fused to the N-terminus of a minor coat protein (pIII) of M13 phage.  The ready to use complex phage library can be used to discover peptide binders in less than one week with straight-forward molecular biology and sterile culture techniques.规格：1 set展示肽：AC-X7-C-GGG-native M13 pIII特异性序列：~10^9浓度：1 x 10^13 pfu/ml试剂盒成分：噬菌体展示环七肽库 E. coli K12 ER2738保存条件： Store at -20°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles.运输条件：Shipped on ice packs.Note：研究使用，不能用于其他用途

泰克生物从事临床前（CRO）服务多年。我们提供从临床前研究方案设计到抗体偶联药物（ADC）发现以及动物验证的一站式服务，大大简化了抗体药物偶联物（ADC）和其他生物偶联物的开发。与会损害健康细胞的传统化疗治疗不同，抗体药物偶联物 (ADC) 是一种靶向药物，可将化疗药物输送到癌细胞。ADC 通过连接到单克隆抗体的接头传递化学疗法，该抗体与癌细胞上表达的特定靶标结合。与靶标（癌蛋白或受体）结合后，ADC 将细胞毒性药物释放到癌细胞中。“全人源”单克隆抗体（已被设计为携带人源抗体基因）是 ADC 的理想递送平台。它们具有高度靶向性和细胞特异性，循环半衰期长，免疫原性较低。将抗体和细胞毒性药物连接在一起的化学“接头”高度稳定，可在 ADC 进入肿瘤之前防止切割（分裂）。抗癌药物（或“有效载荷”）穿透肿瘤并通过破坏癌细胞的 DNA 或阻止新的癌细胞形成和扩散而导致细胞死亡。█ 偶联技术 半胱氨酸偶联泰克生物可以选择性地减少抗体的链间二硫键，产生可用于缀合的巯基，同时保持链内二硫键完整。使用这种基于半胱氨酸的偶联策略，抗体首先用还原剂处理，例如二硫苏糖醇 (DTT) 或三 (2-羧乙基) 膦 (TCEP)，将链间二硫化物转化为游离的半胱氨酸残基。然后可以将抗体的游离巯基 (SH) 与硫醇反应性接头（例如含有马来酰亚胺的接头）缀合，以形成 ADC，ADC 是 ADC 种类的异质混合物，每个抗体含有 0-8 个药物（DAR≤8）。这是一种有效的策略，不需要对抗体结构进行昂贵且耗时的重新设计。泰克生物 可以在每条重链上设计未配对的半胱氨酸残基，然后用于与硫醇反应性接头缀合，以创建更均匀的 ADC，药物与抗体的比率为 2。泰克在通过这种方法生产 ADC 方面拥有丰富的经验。赖氨酸偶联基于赖氨酸的缀合是广泛使用的非特异性缀合策略之一。赖氨酸残基的侧链 ε-氨基是良好的亲和试剂，这意味着暴露在抗体表面的赖氨酸残基在结构灵活的区域具有较大的溶剂可及性，可用作药物结合的位点。 通常，赖氨酸偶联包括使带有活化酯（例如 N-羟基琥珀酰亚胺酯）的接头-有效负载构建体与抗体的赖氨酸残基反应以形成 ADC。或者，可以对抗体的赖氨酸残基进行化学修饰以将其他化学官能团并入抗体。泰克在用于 ADC 开发的一系列赖氨酸偶联技术方面拥有丰富的经验。有效载体泰克可以开发多种形式的有效载荷，包括蛋白质、DNA、RNA 和各种其他片段技术。我们基于噬菌体展示技术制备的纳米抗体跟人源抗体相似性在60%左右，分子量大小为15kDa（传统抗体为150kDa），比较容易进行人源化改造。同时特异性强，亲和力高，空间位阻更小。█ 抗体药物偶联物的分析和表征 泰克提供广泛的分析方法，以支持从早期抗体发现阶段到临床测试阶段的的选择。筛选抗体以获得更好的配方，在压力条件下研究其聚集和化学降解倾向。深入的生理化学表征允许识别翻译后修饰的存在，包括特定的碳水化合物表位，如 α-半乳糖或 N-乙醇酰神经氨酸。结构表征：完整和亚单位质量肽图分析，包括序列覆盖电荷变体分析N-聚糖分析（释放和糖肽水平）位点特异性修饰（脱酰胺、氧化、糖基化、焦谷氨酸、赖氨酸剪切）唾液酸分析（Neu5Ac 和 Neu5Gc 含量的定量）生物物理方法：熔点 (Tm) 的测定1H NMR图谱蛋白质和多肽鉴定提供鉴定单一蛋白质、单一蛋白质靶标以及全细胞裂解物蛋白质组学研究的服务。包括：☛蛋白质鉴定和表征☛蛋白质序列确认☛PAGE，蛋白质印迹☛全细胞裂解物蛋白质组学研究☛HLA-DR 呈递肽的鉴定ADC 表征泰克生物在抗体药物偶联物的表征方面拥有广泛的专业知识，支持选择更好候选药物进行临床研究。早期的 ADC 候选物可以由不同的抗体、不同类型的接头和有效载荷产生，以筛选有效的目标解决方案。通过确定配方稳定性、体外血清测定、体内分析以及测试不同条件下的结合和效力，可以使用一系列内部方法来支持候选者的选择和可制造性评估。结构表征和纯度预配制、体外和体内稳定性载药量 (DAR) 的测定离体血清稳定性测定结合位点分析ADC 药物释放分析ADC 同质性分析ADC 早期配方筛选色谱和光谱纯度VHH 的克隆和大规模表达残留未结合药物的定量█ 分析方法开发泰克的实验室配备了一系列先进的分析和制备 UPLC 和 LC 仪器。结合我们的多种 LC-MS 功能（TOF、Q-TOF、Orbitrap-MS 和 MALDI-MS）、500-MHz 和 300-MHz NMR 光谱仪，这使我们能够为客户提供非常全面的分析服务，可以为早期研究目的进行方法开发。目前，我们可以为以下项目进行方法开发：1. 分析和制备 UPLC 和 LC2. LC-MS 和 LC-MS/MS 用于小分子和大分子3. GC-MS（顶空分析）4. 所有类型的色谱（尺寸排阻/凝胶过滤色谱 SEC、反相 RP、疏水相互作用色谱 HIC、疏水相互作用液相色谱 HILIC、离子交换色谱 IEX、手性分离）5. 核磁共振分子结构解析，包括蛋白质核磁共振6. 1D-NMR 分析（300 MHz、500 MHz、1H、13C、31P、19F，多维）7. 二维 NMR 分析（gCOSY、ROESY、TOCSY、gHMQC、多重编辑的 HSQC、仅 CH 的 HSQC、gHSQCAD-TOCSY、gHMBCAD）8. 不同温度和湿度下的稳定性研究█ 其他可用的分析：☛卡尔费休滴定☛旋光度☛ATR FT-IR 分析

泰克生物一致力于基于噬菌体展示技术的纳米抗体发现服务，亲和力是鉴定筛选抗体与目标抗原相互作用的一项重要依据，泰克生物在此基础上建立了完善的亲和力测定平台，目前泰克生物每年成功交付上百个亲和力测定的项目，拥有丰富的经验，可以为客户提供高质量的亲和力测定服务。抗体由具有不同抗原结合位点的近乎无限的序列组成的不同氨基酸组成。抗体和抗原都是多价的，这意味着它们具有多个结合位点。抗体在所有这些位点的总结合强度被定义为亲和力。抗原和抗体的亲和力是指抗体和抗原在单个位点之间的表位-互补位键）。这些分子间相互作用不可能单独测量。相反，Affinity 测试从抗体浓度推断结合亲和力，该浓度表示为平衡解离常数 (KD)的函数。这用于对特定生物分子相互作用的强度进行排序，显示与抗体亲和力成反比。例如，小的解离常数是指抗体与其抗原的高结合强度。泰克生物基于 Biacore 平台和 ForteBio Octet 平台，为客户提供 SPR/BLI 亲和力测定分析服务。█ 生物膜干涉测量法 BLI 通过通过检测干涉光谱的位移变化来检测传感器表面相互作用的生物分子之间的结合和解离情况，是一种基于光学的对非标记的生物分子间的相互作用进行测定的技术。BLI基于捕获第一个分子的生物传感器，并在生物传感器的表面测量第二个分析物的结合，可用于测定分子间相互作用的结合和解离的动力学常数（kon、koff）、亲和常数 (KD) 或生物分子的量化（浓度），适用于各类小分子和生物大分子以及生物大分子和生物大分子之间的分子相互作用的表征。█ 表面等离子体共振（SPR）技术 表面等离子体共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）技术是一种基于光学的无标记检测技术，通过传感器芯片跟踪信号变化实时检测两个或多个分子之间相互作用，SPR信号通过折射率变化呈现。SPR 生物传感器可以研究天然脂质状态下的蛋白质。此外，在成功优化选定的蛋白或小分子之前，必须存在研究数百种潜在的“靶蛋白或靶分子”的阶段，这一阶段对靶标与目标蛋白质的相互作用进行全面表征非常重要。SPR 技术提供了一种方法，可以直接确定未标记化合物与目标之间的相互作用，从而为化合物表征提供了一种可用的方法。█ 服务内容 内容交付交付周期蛋白、抗体、多肽、化合物等小分子（样品>200ug纯度>85%）样品要求：缓冲液为PBS，不含甘油，Tris抗原抗体亲和力测定亲和力测定报告1-2周蛋白与蛋白亲和力测定蛋白（抗体）与多肽小分子亲和力测定高通量排序

泰克生物是由一群深耕于抗体药物发现方面的专家组成的团队，平均项目经验超过10年，建立了完善的基于噬菌体展示技术平台的抗体药物候选分子发现平台，能够为客户提供一系列跟治疗性生物大分子发现相关的服务，包括但不限于VHH抗体、scFv抗体和Fab抗体发现，CAR-T先导抗体序列设计，CAR-NK先导抗体序列设计等服务。经过10年左右的发展，泰克生物在抗体噬菌体展示技术平台的基础上，引入了单B细胞测序技术，能够更加快速的为客户提供高质量抗体先导序列的发现服务。CAR-T疗法是指嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy（CAR-NK类似，只是将T细胞更换成NK细胞）。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。T细胞也叫T淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能。技术人员通过基因工程技术，将VHH抗体基因，scFv抗体基因通过合适的方法，如慢病毒包装方式转入到T细胞中，通过VHH或scFv的膜定位表达，即给T或NK细胞定制了一套特殊的针对特异性肿瘤的定位导航装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体），即CAR-T细胞，利用其“定位导航装置”CAR，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，从而高效地杀灭肿瘤细胞，达到治疗恶性肿瘤的目的。相比于传统scFv抗体（来自普通的IgG抗体），来自驼源动物的VHH抗体（又称为重链抗体）分子量约为15kDa，具有更强的稳定性，现在被广泛的应用于CAR-T的先导抗体开发。泰克生物通过自有羊驼基地，能为客户提供背景纯净，来源清晰的健康羊驼进行纳米抗体（VHH抗体）发现服务。█ 羊驼VHH抗体 羊驼抗体只具有重链不含轻链，因此被称为重链抗体（heavy Chain Antibody，hcAb），如图1中D所示，羊驼抗体缺少轻链，由4个HC和2个VH组成，其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体（single domain antibody，sdAb）。独立的羊驼VH区域具有完整的抗原结合能力，同时不像人工改造的单链抗体片段(single chain Fv，scFv)，容易聚集。和传统抗体相比，羊驼抗体具有稳定的性质，例如在60℃仍能保持活性，抵抗极端的pH环境。目前泰克生物成功建立了来自300只羊驼的天然噬菌体抗体展示文库，有效库容量达到1010，通过该文库的筛选，能够缩短羊驼单抗的制备周期。同时，采用不同的筛选策略，如抗原递减法，结合我司的蛋白重组表达平台，能够为客户提供达-5g/L水平的重组抗体表达发酵服务，在很大程度上提高了抗体批间一致性和稳定性。图1 A，传统IgG；B，传统抗体Fab片段；C，传统抗体的单链scFv片段；D，重链抗体或驼类抗体；E，驼类抗体的VH区域或单域抗体（sdAb）█ 制备流程 图2 基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务█ 服务内容 步骤服务内容交付材料周期半抗原改造客户提供小分子结构式和CAS号改造后的小分子衍生物LC-MS、NMR的鉴定结果3-4周完全抗原制备BSA、KLH和OVA偶联小分子完全抗原SDS- PAGE、UV、ELISA（需客户提供一抗）或MALDI-TOF鉴定结果3个工作日重组蛋白免疫原需要客户（或委托泰克生物进行制备）提供3.5mg，纯度>85%鉴定报告具体分析噬菌体抗体库的制备抗原乳化，免疫1只羊驼4-5次PCR结果，免疫检测结果（含ELISA的效价和特异性检测结果），实验记录3-4个月收集脾细胞（或者外周血淋巴细胞），可变区基因分离噬粒构建，转染表达，文库构建，文库筛选重组抗体表达抗体筛选，构建表达质粒，真核或原核表达重组抗体产品和报告4-5周█ CAR-T 细胞疗法的研发流程 图3 泰克生物CAR-T/NK项目服务流程针对CAR-T/NK我们能够提供的额外增值服务：(1) CAR表达测试(2) 靶点蛋白与先导抗体抗原识别区专属性(3) 针对先导抗体抗原识别区的抗独特性（Anti-idiotype）测试(4) 针对不同靶点蛋白的Fab形式抗体抗原识别区检测(5) 细胞因子释放试验a) 细胞因子种类：ɣ链共受体家族、IL-12家族、IL-1超家族等b) 方法：酶联免疫斑点试验（ELISpot）、细胞内细胞因子染色试验（ICS）、流式细胞术等(6) 体外细胞毒性试验泰克生物能够提供体外细胞毒性试验，以验证评估CAR-T细胞的细胞毒性和可能的不良反应。例如，CAR-T细胞疗法可能会引起的一些急性的靶向/肿瘤毒性（细胞因子释放综合征、肿瘤溶解综合征）或靶向/非肿瘤毒性，以及由于CAR-T细胞经历抗原-独立增殖可能会增加细胞介导的毒性而导致的CAR-T细胞永生失败。(7) CAR细胞增殖试验泰克生物开发的第二代和第三代CAR产品，能够增强CAR-T细胞或NK细胞增殖的持久性，并且泰克生物能够通过不同的测定方法对这种活化和增殖过程进行评估，例如 MTT、MTS、细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)、5,6-羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯 (CFSE) 结合流式细胞术分析等技术。(8) 活力和生物分布分析泰克生物能够提供活力和生物分布分析，以验证评估CAR-T细胞在生理条件下的正常增殖能力，为 CAR-T细胞疗法提供临床前服务。例如，针对CAR-T细胞有限的复制寿命而导致的疗效减弱的CAR-T细胞疗法障碍，活力和生物分布分析为CAR-T细胞的长期治疗效果评估提供重要支持。█ 服务优势✔采用成熟的羊驼免疫程序结合噬菌体展示技术，构建驼源免疫抗体库，筛选得到高亲和力和特异性的单克隆抗体✔ 丰富的经验积累，成熟的技术路线，保证产品质量稳定可靠✔ 严格的质控体系：标准硬件设施平台，满足cGMP的文件关键管理规则，可提供手写实验记录本✔能克服传统方法难以解决的靶点、副作用大等问题，是理想的抗体药制备来源✔ 提供单克隆抗体大规模生产服务，满足工业化生产需求✔ 完整的上下游服务：提供从抗原制备、噬菌体文库构建羊驼免疫、抗体筛选到抗体人源化等一体化服务✔ 服务可定制：根据客户需求制备，为每一个客户量身定制实验方案，满足每一位客户的特殊需求

泰克生物一直致力于抗体药物发现与制备，是由一群项目经验超过10年的抗体发现专家组成的团队，能够为客户提供高质量的动物免疫以及抗体发现服务。泰克生物的抗体发现服务包括免疫抗原制备，动物免疫，优质抗体序列发现，抗体体外重组表达，抗体规模制备等，并提供全程可追溯的文件体系。目前泰克生物已经为国内外客户提供过数千次不同物种的动物免疫服务，包括羊驼免疫服务，骆驼免疫，牛免疫服务，羊免疫服务，兔子免疫服务 ，大鼠免疫服务等，配套严格执行的多位点免疫方式以及免疫时间计划表，为客户提供高质量的免疫血清制备和PBMC细胞分离服务。█ 动物免疫平台 图1 动物免疫抗体血清制备与PBMC分离服务示意图泰克生物为国内外客户提供高质量的免疫技术服务，包括羊驼，骆驼，牛，羊，鼠等动物免疫抗体血清制备以及PBMC分离服务。泰克生物收到客户免疫抗原且通过QC验证后，交付给客户设计好的免疫计划表，包括采血计划、血清效价ELISA检测计划，动物免疫剂量，采血分离PBMC计划等内容，如表1所示病毒免疫案例：表1 免疫计划表流程时间描述日期阴性血清采集Day 0免疫前血清采集10mL***一免Day 15ml纯病毒肌肉注射***二免Day 145ml纯病毒肌肉注射***三免Day 285ml纯病毒肌肉注射***三免血清采集Day 35采集检测血清2ml效价检测***四免Day 425ml纯病毒肌肉注射***四免血清采集Day 49采集检测血清2ml效价检测***五免Day 565ml纯病毒肌肉注射***五免血清采集Day 63采集检测血清2ml效价检测***中和效价测定Day 63同时检测四免和五免血清中和效价***图2常规动物免疫免疫流程表█ 动物免疫平台质量标准（QC标准） ✔ 针对蛋白抗原或者病毒抗原，免疫ELISA血清效价>105；针对多肽抗原免疫效价（载体蛋白偶联），免疫ELISA血清效价>104✔ 免疫次数不低5次（除非客户特别要求，均设置5次免疫程序）✔ 分离的PBMC细胞，可随意选择细胞冻存液或者Trizol裂解形式，保证28S，18S和5S主条带清晰✔ 针对血清纯化项目，IgG纯度>90%

DNA 免疫作为一种先进的技术方法能有效地诱导针对各种病原体的抗体和T细胞免疫应答，并且在免疫的动物或人血清中有效诱导高质量多克隆抗体应答，具有高度的构象特异性和高亲和力。与常规免疫方法不同，DNA 免疫使宿主能够在体内产生具有常见转录后修饰的目的抗原，且该抗原较大限度地保持原始结构，绕过了耗时的免疫原（例如肽和重组蛋白）合成和纯化过程。DNA免疫特性有助于产生针对靶抗原自然构象的高亲和力抗体，这也是开发治疗性抗体的关键特征。同时，这种方法也是开发针对膜蛋白或其他具有挑战性抗原的抗体的理想方案。此外，DNA 免疫也是免疫治疗及DNA 疫苗开发早期阶段的一种新工具。泰克生物能够为客户提供多种抗原（包括但不限于PTM蛋白、细胞内蛋白、分泌蛋白）的DNA免疫抗体制备服务，基于杂交瘤的融合与筛选技术的抗体药物制备服务平台，泰克生物能够为客户提供一系列跟治疗性生物大分子免疫抗体制备相关的服务，包括但不限于VHH纳米抗体，scFv抗体，Fab抗体，DNA免疫抗体等制备服务。经过10年的发展，泰克生物建立了完善的杂交瘤的融合与筛选平台，具备为客户提供一系列基于杂交瘤的融合与筛选技术平台的高质量DNA免疫抗体制备服务的实力。此外，泰克生物拥有包括从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务，并且有配套的抗原抗体结合分析、抗原抗体BLI亲和力测定、抗体细胞系验证、等许多下游配套服务，为客户的抗体药研发与生产提供有力的支撑。█ DNA免疫诱导免疫应答机制 诱导机制具体内容直接转染体细胞将外源DNA分子直接转入到动物体内，肌肉细胞将激活产生MHC I类分子，从而诱导机体免疫应答直接转染专职抗原递呈细胞少量的专职APCs可在注射部位直接被转染，产生内源性蛋白，经MHC I和MHC II分子完全内源性抗原的递呈。类似凋亡机制目的抗原或者表达目的抗原的重组质粒序列本身具有转导特性。█ DNA免疫的递送方式传递方式靶向抗原类型基因枪单次跨膜蛋白胞内蛋白病毒外壳蛋白肌肉注射细菌毒素7次跨膜蛋白病毒外壳蛋白分泌蛋白，酶皮内注射单次跨膜蛋白细胞外基质和血浆糖蛋白肌肉注射之后电脉冲刺激7次跨膜蛋白细菌毒素皮内注射之后电脉冲刺激跨膜蛋白、细胞内蛋白等水动力静脉注射多次跨膜转运蛋白 █  DNA免疫诱导生产单抗的优点-- DNA免疫同时刺激体液免疫和细胞免疫, 加快抗原特异性B淋巴细胞的成熟, 从而可诱导产生有效识别靶点抗原表位的高特异性抗体。-- 将目的基因直接导入到宿主细胞内得以表达, 因此可以避免蛋白质天然构象和免疫原性因外界因素的干扰而受到影响。-- 在应用过程中按照自己的实际需要可以设计多种不同的免疫策略, 也可以选择符合靶点抗原特异性的候选方案。-- 比传统的免疫方法更安全、操作简便、经济且可靠, 为制备高质量单克隆抗体提供良好的技术平台。█ DNA免疫服务流程服务项目内容周期基因合成基因模板合成，密码子优化，AAV载体构建4-6周动物免疫皮下多点注射，标准免疫流程，ELISA测血清效价10周融合与筛选脾细胞与骨髓瘤细胞融合，ELISA筛选阳性克隆，扩增4-6周抗体生产杂交瘤细胞生产，抗体纯化可选█ 泰克服务优势✔ 只需要计算机上的DNA 序列✔ 无需重组蛋白或多肽，省时省力✔ 无抗原污染风险✔ 生成具有高亲和力和特异性的抗体✔ 阳性的杂交瘤细胞株3-5株✔ 可提供抗体人源化服务并获得的与原抗体具有相同的亲和力的人源化抗体✔ 可提供一系列抗体体外验证服务✔ 从基因合成与修饰、AAV载体构建、动物免疫、杂交瘤细胞的融合与筛选、抗体生产等一站式技术服务

泰克生物着力于为客户提供高质量，且具性价比的抗体药物前期发现技术服务。我们在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得，积累了充足的抗体定制和重组蛋白生产经验。基于酵母体展示技术（Yeast Display Technology）平台的服务，泰克生物能够为客户提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、驼源等不同物种的单克隆抗体制备服务，及其配套的完整可追溯性文件体系。酵母抗体展示技术（Yeast Display Technology）是指用抗体序列可变区与凝集素Aga2p融合表达，Aga2p蛋白亚基通过两个二硫键与固定在酵母细胞壁上的Aga1p 蛋白亚基结合，结合流式分选技术，将靶向抗原的特异性抗体给筛选出来。█ 酵母展示抗体文库构建服务 泰克生物可为客户提供来自驼源VHH纳米抗体库，以及其他物种scFv形式抗体的酵母展示文库构建及筛选服务。VHH纳米抗体库，又称为驼源重链抗体文库，抗体分子量大小为15kDa，是驼源动物产生的特有的一种抗体。酵母抗体文库展示体系受限于自身物理特性限制，物理库容滴度一般<107，因此主要应用于客户对项目库容要求不高，动物免疫后PBMC细胞经过二次分选以及避免漏掉二硫键形成的抗体发现项目。同时酵母展示文库相对噬菌体展示文库技术而言，前者在微量抗体表达后抗体活性层面相较于后者要高，得益此基础，在流式筛选时就能区分抗体的亲和力高低。 目前被广泛应用于CAR-T/CAR-NK治疗性抗体，主要以驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）发现为主，VHH/scFv抗体酵母展示发现路径如图1所示：图1基于酵母技术平台的VHH/scFv抗体发现服务█ 服务内容和周期 步骤服务内容QC标准周期Step1:蛋白表达(1) 密码子优化+基因模板合成+表达载体构建；(2) 质粒抽提+转染（哺乳表达系统）目的蛋白检测（WB，SDS-PAGE）；(3) 蛋白表达放大+蛋白亲和纯化；交付：表达载体，克隆甘油菌，重组蛋白3-3.5mg，纯度>85%，标准实验报告 4-6周Step2:动物免疫(1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针；(2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价；(3) 若第4针血清抗体效价（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫；(4) 效价合格，采血分离单核细胞；动物：背景清晰（年龄，性别，防疫情况）；免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104；采血：数量100ml以上；PBMC细胞：>105/vial 8-10周Step3:模板cDNA制备(1) PBMC总RNA提取（RNA提取试剂盒）(2) 高保真RT-PCR制备cDNA（反转录试剂盒）cDNA：反转后>1ug/ul，胶图分布均匀；cDNA模板总量>150ug；1 天Step4:抗体酵母展示文库构建(1) 以cDNA为模板，两轮PCR扩增VHH基因酵母表达质粒构建与转化： VHH基因拼接酵母展示载体，电击转化酵母宿主菌，构建抗体库，电击次数不低于10次鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率+PCR鉴定多样性+插入率文库阳性率：>90%；文库插入性率：>90%；库容：>1061-2周Step5:文库筛选（磁珠+Facs）(1) 磁珠分选；(2) FACS分选（免疫双标分选）；(3) 铺板+阳性克隆菌培养+抗体基因测序；（>20个，多达96个）；阳性标准：双阳性菌株；VHH筛选标准：CDR氨基酸序列不同2-3周Step6:抗体验证（体外验证）(1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量；(2) Elisa验证抗体与抗原结合，进行下游验证（交付EC50数据）;(3) BLI法验证抗体亲和力；(4) 细胞功能验证：流式验证；(5) 验证细胞系（抗原受体过表达细胞系）；交付：表达载体，克隆菌株，表达菌株，重组抗体蛋白1mg，纯度90%；快速亲和力测定结果；4-6周█ 服务优势 ✔物种适应性广泛：人，鼠，兔，羊，羊驼，骆驼，鱼等物种的单抗开发均兼容✔技术平台成熟：提供的1级免疫文库的建库库容为107-108；插入率均满足>95%，筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM- pM级别✔开发周期短：获得PBMC后，建库到筛选获得抗体序列，3-4周✔产品交付标准高：针对免疫库，交付免疫前后血清，抗体展示文库，酵母表达菌株，抗体序列✔实验记录可追溯：QC质控标准（含RNA提取，cDNA制备等），中英文实验报告，手写实验记录本 

泰克生物着力于为客户提供高质量，且具性价比的抗体药物前期发现技术服务。我们在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得，积累了充足的抗体定制和重组蛋白生产经验。基于噬菌体展示技术（Phage Display Technology）平台的服务，泰克生物能够为客户提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、驼源及牛源等不同物种的单克隆抗体制备服务，及其配套的完整可追溯性文件体系。噬菌体展示技术（即：纳米抗体技术）是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，通常为M13噬菌体的P3蛋白，使外源基因随外壳蛋白的表达而展示到噬菌体表面的生物技术。噬菌体展示的优势在于其展示纳米抗体文库中变异抗体基因的多样性，各个重组噬菌体（常用噬菌体为M13噬菌体）表面展示出不同的抗原结合域，相较于传统杂交瘤方法，噬菌体展示技术在抗体基因展示与筛选层面则具有非常突出的效率优势（如杂交瘤融合效率一般<0.4%，即1000次融合细胞中，大概4个融合子；而噬菌体展示轻松可以获得108-109个正确抗体序列）。█ 噬菌体展示抗体文库构建服务 泰克生物可为客户提供驼源VHH纳米抗体库，scFv抗体库，Fab抗体文库构建以及筛选服务。其中VHH纳米抗体库，又称为驼源重链抗体文库，抗体分子量大小为15kDa，是驼源动物产生的特有的一种抗体。目前被广泛应用于CarT/Car-NK治疗性的驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）噬菌体展示发现路径如图1所示：图1基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务泰克生物还可以提供一系列的抗体验证服务，例如：通过GST pull-down或CO-IP策略检测展示的蛋白质与其他分子之间的相互作用或分离特定目标、抗原抗体BLI亲和力测定、细胞功能验证及细胞系体外验证等。泰克生物提供的纳米抗体库具有丰富的多样性和规模，是筛选所有抗原类型以及选择具有高亲和力的功能性抗体的理想选择。凭借多年的经验，我们开发了多种噬菌体平台，可以为您定制特定的纳米抗体文库。如果您有兴趣开展噬菌体展示抗体项目，或者其他相关服务，例如抗体测序、scFv、Fab和Fc 融合蛋白等，请联系我们！█ 服务内容和周期 步骤服务内容QC标准周期Step1:蛋白表达(1) 密码子优化+基因模板合成+表达载体构建；(2) 质粒抽提+转染（哺乳表达系统）目的蛋白检测（WB，SDS-PAGE）；(3) 蛋白表达放大+蛋白亲和纯化；交付：表达载体，克隆甘油菌，重组蛋白3-3.5mg，纯度>85%，标准实验报告 4-6周Step2:动物免疫(1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针；(2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价；(3) 若第4针血清抗体效价（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫；(4) 效价合格，采血分离单核细胞；动物：背景清晰（年龄，性别，防疫情况）；免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104；采血：数量100ml以上；PBMC细胞：>105/vial 8-10周Step3:模板cDNA制备(1) PBMC总RNA提取（RNA提取试剂盒）(2) 高保真RT-PCR制备cDNA（反转录试剂盒）cDNA：反转后>1ug/ul，胶图分布均匀；cDNA模板总量>150ug；1 天Step4:噬菌体展示文库构建(1) 以cDNA为模板，两轮PCR法扩增VHH基因；(2) 噬粒构建与转化： VHH基因拼接噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库，混合建库电击次数不低于30次（单靶点建库，电击次数不低于15次）；(3) 鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率+插入率(4) 辅助噬菌体准备：M13噬菌体扩增+纯化；(5) VHH展示文库救援文库阳性率：>90%；文库插入性率：>90%；库容：>1081-2周Step5:文库筛选（3轮筛选）(固相筛选)(1) 抗原包被（单个蛋白筛选，常规默认是固相筛选法或磁珠分选；细胞筛选方法需要单独核算费用）；(2) 默认3轮筛选：压力筛选，最大限度去除非特异性抗体；(3) 挑取96个克隆扩增噬菌体+IPTG诱导表达+ELISA检测阳性克隆；(4) 挑取全部阳性克隆进行基因测序（>20个，多达96个）；ELISA阳性标准：P/N>3；VHH筛选标准：CDR氨基酸序列不同2-3周Step6:抗体验证（体外验证）(1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量；(2) Elisa验证抗体与抗原结合，进行下游验证（交付EC50数据）;(3) BLI法验证抗体亲和力；(4) 细胞功能验证：流式验证；(5) 验证细胞系（抗原受体过表达细胞系）；交付：表达载体，克隆菌株，表达菌株，重组抗体蛋白1mg，纯度90%；快速亲和力测定结果；4-6周█ 服务优势 ✔ 物种适应性广泛：人，鼠，兔，羊，羊驼，骆驼，鱼等物种的单抗开发均兼容（不适用牛源单抗开发）✔ 技术平台成熟：噬菌体展示技术提供1级免疫文库的建库库容为108-109，插入率均满足>95%，筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM- pM级别✔ 开发周期短：获得PBMC后，建库到筛选获得抗体序列，3-4周✔ 产品交付标准高：针对免疫库，交付免疫前后血清，抗体展示文库，筛选洗脱产物，抗体序列✔ 文库淘筛定制化（噬菌体展示方式）：根据客户需求不同以及靶点性质不同，会设计不同的筛选方法，如固相，固相/液相和细胞筛选✔ 实验记录可追溯：QC质控标准（含RNA提取，cDNA制备等），中英文实验报告，手写实验记录本 

Catalog Number:TKPA111Product Name:Rabbit Anti-Alpaca IgG3 AntibodyAlias:Rabbit anti alpaca IgG3, Anti-Alpaca Secondary AntibodiesSize:20ul,50ul,100ulApplications:WB, ELISAIsotype:Rabbit IgGPurity:>90%Buffer:Supplied in PBS, PH7.4Background:The Rabbit Anti-Alpaca IgG3 Antibody (TKPA111) are produced in rabbit using purified alpaca IgG3 as the immunogen. This antibody can be used in ELISA and WB and are suitable for other immunoassay applications.Storage:This antibody can be stored at 2°C-8°C for one month without detectable loss of activity. Antibody products are stable for twelve months from date of receipt when stored at -20°C to -80°C. Aliquot and store at -20°C to -80°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles.Shipping Condition:Shipped on ice packs.NOTE:This product is used for research use only. Not for human or diagnostic use.