抗体的结合亲和力是决定抗体药物疗效和剂量的关键参数之一。目前，提高抗体结合亲和力的方法主要集中在位点突变、CDR重排、DNA重组等方面。通过我们有效的亲和力成熟技术，我们可以快速发现抗体域中的关键氨基酸位点。这反过来又增加了抗体的结合亲和力，至少达到 nM 水平。█ 服务内容内容交付周期DNA改组抗体序列及测序报告优化抗体的 1-3 个完整分析报告 (PDF)24-28周文库构建与筛选抗体生产与验证█ 基于噬菌体的选择的好处 噬菌体选择非常通用，可以定制以获得所需的抗原特异性或亲和力参数。选项包括(1) 与阴性对照抗原竞争以对交叉反应结合剂进行阴性选择(2) 通过以较低浓度包被抗原或通过改变孵育和洗涤时间进行基于解离速率的动力学选择(3) 抗原构象特异性选择与重组和基于细胞的抗原兼容(4) 最后噬菌体病毒在 80°C 下稳定，允许选择热稳定、高表达的克隆我们在噬菌体淘选后进行快速筛选，选择后，产生数百个随机挑选的克隆，并从细菌上清液中筛选出可溶性 Fab。在进入耗时的 IgG 生产阶段之前，以高通量筛选先导候选物可节省大量时间和资源。除了全序列分析外，还可以通过ELISA、流式细胞术、功能测定和 BLI以高通量筛选重组或基于细胞的蛋白质。 █ 服务优势  ✔  通过 DNA 改组进行有效的随机突变✔  成熟的噬菌体展示平台，确保高质量的亲和力成熟服务✔  亲和力评估

泰克生物多年来致力于噬菌体展示技术和抗体领域研究，拥有丰富的抗体工程构造经验和成熟的抗体人源化技术。基于噬菌体展示技术平台，泰克生物能够提供高亲和力和低免疫原性的嵌合抗体改造服务，并且能对抗体序列进行人源化改造并确保改造后的人源化抗体亲和力能与人源化之后的抗体维持在同一数量级水平，为客户的后续项目研究带来便利。图1 基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务抗体人源化和抗体表征可以降低源自异种来源的单克隆抗体的免疫原性，同时保留亲本异种来源的单克隆抗体的亲和力和特异性，通过DNA重组技术和蛋白质工程技术，用人类抗体框架替换非人类抗体框架以提高它们对人类免疫系统的激活能力，这是治疗性抗体发现过程中非常重要的一步。为进一步减弱人源化抗体的免疫原性，泰克生物利用丙氨酸突变以及联合位点直接突变技术进行抗体超变区CDR高通量筛选，以进行人源氨基酸替换。目前为止，泰克生物已经成功为客户提供了上百种抗体人源化服务。泰克生物致力于打造完善的一站式抗体人源化技术服务平台，为客户提供从生物信息学分析，人源化抗体设计，高表达载体构建，抗体表达及纯化，亲和力测定，到抗体体外验证（包含阻断验证），抗体亲和力成熟等一系列相关服务，以满足不同客户的需求。█ 抗体人源化优点 (1) 降低机体的免疫排斥反应；(2) 体内的半衰期较非人源化抗体变长，改善了抗体药代动力学；(3) 更有效地募集机体效应因子或效应细胞；(4) 抗体亲和力和特异性与人源化之前相当。█ 抗体人源化服务内容 泰克生物能够提供以下三类人源化抗体定制服务：类型特点改型抗体将非人源抗体CDR区域移植到缺少CDR区域的人源抗体，如将鼠源抗体的CDR移植到人抗体支架中，使人源抗体获得鼠源单抗的抗原结合特异性，同时减少其异源性嵌合抗体利用DNA重组技术，将非人源抗体的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中，转染哺乳动物细胞进行重组抗体表达全人源化抗体利用基因编辑技术，将动物体细胞中抗体基因进行人抗体基因替换，动物免疫后直接产生全人源化的抗体杂交瘤测序客户需提供两管杂交瘤细胞（5×106个/管，冻存液冻存，细胞活率>90%）。泰克生物将通过RACE制备mRNA并制作与重链和轻链相对应的cDNA，为客户提供可变区、天然分泌信号和抗体同种型亚类的序列。重组抗体表达泰克生物可根据客户的具体需求获取可变区域的序列并将它们转化为真正的分子。可变区可以与原始恒定区或新恒定区组合以产生人源化或同种型转换抗体。泰克生物可应用现有的设计平台来优化表达和平衡链比率，从而更大限度地提高功能性抗体的产量。泰克生物提供一系列分析服务来分析客户的抗体的特性、亲和力、纯度、数量和质量。包括使用 ForteBio Octets 进行滴度和亲和力测量的生物层干涉测量法、通过尺寸排阻色谱法进行的聚集检测、通过qPCR机器测量的熔解温度和抗体稳定性、通过HPLC进行聚糖分析和使用质谱法进行分子质量测定。抗体人源化泰克生物通过计算机建模方法来将某些框架残基随机化到CDR嫁接，嫁接的CDR被克隆到噬菌体展示文库，通过筛选该噬菌体文库，筛选出亲和力较好的人源化抗体。为了进一步降低CDR移植的人源化抗体的免疫原性，泰克生物可以通过特异性决定残基(SDR)移植来更大限度地减少鼠源的含量。除此之外，泰克生物还可以从我们预制的人源抗体库中直接筛选得到人源抗体。 除以上传统抗体人源化的的方法之外，泰克生物还基于噬菌体展示技术平台和酵母展示平台，为客户提供抗体深度人源化服务。█ 服务内容 内容交付周期嵌合抗体构建5种人源化抗体变体及基因序列信息；至少 1 个人源化抗体变体具有与亲本抗体相当的结合亲和力；实验报告16-20周抗原抗体结合分析抗体模型库构建噬菌体展示抗体文库构建抗体高通量筛选人源化抗体检测生产█ 抗体人源化服务优势 ✔ 拥有深厚的抗体人源化专业知识科研团队，成功研制多个人源化抗体✔  灵活的人源化抗体制备策略，针对客户需求进行一对一方案定制✔  高亲和力和高特异性人源化抗体开发✔  高通量筛选与灵活的文库淘筛策略✔ 拥有自主研发的高表达载体✔ 从生物信息学分析，人源化抗体设计，抗体表达及纯化，到亲和力测定，抗体亲和力成熟等一系列服务✔ 专注于提供具有强大可制造性的人源化抗体，从而实现临床使用所需的优化大规模生产

泰克生物一直致力于开发单克隆抗体，在抗体开发和工程抗体所需的平台方面拥有超过8年的经验，已经开发出了不同的抗体库，用于抗体筛选、抗体测序、抗体人源化等。泰克生物投资了尖端技术，使用复杂的工程、计算机3-D 建模和合成生物学技术生产定制的双特异性抗体。从客户的需求出发，泰克生物可以帮助客户设计、开发和验证用于研究和临床前的双特异性抗体。双特异性抗体（bsAbs）是抗体含有不同的表位（通常在两个单独的抗原表位）即两个抗原结合位点。通常，一种结合特异性针对靶细胞的特定细胞表面抗原，而另一种针对效应细胞表面上的“触发”分子，例如FcγR或CD3/T细胞受体复合物之一。双特异性抗体可以超越效应细胞对其天然靶标的特异性，并将其重定向以杀死原本会忽略的靶标。不同的细胞毒性表达不同的触发分子（受体）。因此，通过改变靶标和效应子结合域的特异性，可以针对大多数类型的靶细胞产生多种效应子反应。或者，可以通过将一种结合特异性靶向血清免疫球蛋白来赋予全范围的效应子功能（即 ADCC、吞噬作用、补体激活和延长的血清半衰期）。目前，市场上有两种用于治疗的双特异性抗体。由于其不同的作用机制，双特异性抗体越来越受到关注，更多的双特异性抗体正在进行临床试验，不仅针对癌症，还针对其他疾病。█ 如何制备双特异性抗体 泰克生物已经开发了许多方法来产生双特异性抗体。杂交瘤是较早用于生产双特异性抗体的技术。它基于表达所需特异性鼠 IgG 的两种不同杂交瘤细胞系的体细胞融合。然而，功能性双特异性抗体的真实百分比是不可预测的，并且需要复杂的过程来从副产物中分离双特异性抗体。通过使用分子克隆技术，可以从同一生产细胞中表达两条不同的重链和轻链组装双特异性 IgG 抗体。双特异性抗体的生产需要至少两个用于异二聚化重链的质粒和一个用于共同轻链的质粒或两个轻链质粒（如果使用两条不同的轻链）。值得注意的是，建议在不同的质粒上表达 HC 和 LC，因为控制质粒比例是一种简单有效的方法，可以优化所需产品的蛋白质组装。随后，通常需要一个费力且耗时的过程来从异质稳定转染池中选择最理想的克隆细胞系，以进行大规模抗体生产。与稳定转染相比，瞬时转染可以在几天内获得结果，而无需将重组 DNA 整合到宿主基因组中。人类胚胎肾 (HEK293) 和基于 HEK 的 Expi 293 细胞是用于瞬时表达的人类细胞，已在bsAb 开发的早期使用。█ 服务内容 步骤内容基因合成生成多达 3 个不同设计的序列，从头生成重组抗体 DNA 质粒小试双特异性抗体蛋白的产生→小规模表达到哺乳动物细胞系中→通过 SDS-PAGE验证→通过ELISA与重组蛋白抗原的结合分析→将克隆与亲本抗体进行比较。鉴定前 2 个全长双特异性抗体的表达→通过ELISA进行结合分析→抗小鼠抗体识别的抗体的ELISA评估。生产大规模抗体生产█ 附加检测服务 步骤内容流式细胞仪分析FACS与抗原阳性细胞系的结合分析BLI 结合分析  通过 Octet 系统生物层干涉法进行抗体结合亲和力分析Biacore TM SPR 生物传感器 使用 Biacore TM SPR 生物传感器进行结合和动力学分析以确定抗体亲和力、Ka、Kd、KD 值█ 服务优势 ✔  CHO 细胞中的高蛋白表达✔  非常稳定：在 37 °C 的血清中 >2 周✔  无溶解度问题：> 30 mg/ml✔  开发了许多不同的具有肿瘤抗原的稳定细胞系，以验证许多双特异性抗体

产品编号：TKPLS103产品名称：噬菌体展示十二肽库筛选试剂盒产品描述：The Phage Display 12 Peptide Library is a combinatorial library of random 12-mer peptides fused to the N-terminus of a minor coat protein (pIII) of M13 phage. The ready to use complex phage library can be used to discover peptide binders in less than one week with straight-forward molecular biology and sterile culture techniques.规格：1 set展示肽：X12-GGG-native M13 pIII特异性序列：~10^9浓度：1 x 10^13 pfu/ml试剂盒成分：噬菌体展示十二肽库   E. coli K12 ER2738保存条件：Store at -20°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles.运输条件：Shipped on ice packs.Note：研究使用，不能用于其他用途

产品编号：TKPLS102产品名称：噬菌体展示七肽库筛选试剂盒产品描述：The Phage Display 7 Peptide Library is a combinatorial library of random 7-mer peptides fused to the N-terminus of a minor coat protein (pIII) of M13 phage. The ready to use complex phage library can be used to discover peptide binders in less than one week with straight-forward molecular biology and sterile culture techniques.规格：1 set展示肽：X7-GGG-native M13 pIII特异性序列：~10^9浓度：1 x 10^13 pfu/ml  试剂盒成分：噬菌体展示七肽库   E. coli K12 ER2738保存条件：Store at -20°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles. 运输条件：Shipped on ice packs.Note：研究使用，不能用于其他用途

嵌合抗体（Chimeric Antibody）是指来源于一种物种的抗体可变区与另外一种物种的恒定区片段进行嵌合后形成完整的IgG抗体，如人-鼠，人-兔，鼠-兔，人-羊驼嵌合抗体等。不同物种的嵌合抗体改造主要是为了改善亲本抗体的免疫原性，种属特性，半衰期等特性，其核心诉求是获得抗体的可变区序列，借助于噬菌体展示技术和酵母抗体展示技术，可以发现多种物种的单克隆抗体，进而获得不同来源的嵌合抗体。2014 年，WHO（世界卫生组织）发布了新指南，重新定义了不同类别的治疗性抗体。其 INN（国际非专有名称）抗体药物命名法将治疗性抗体分为 3 类：嵌合型或"-ximab，人源化或"-zumab，全人源或"-umab。根据世卫组织命名法对特定抗体进行分类，来源于小鼠（或更普遍的非人类）序列的抗体将被归类为-祖马抗体，而来源于人类（噬菌体展示、转基因小鼠或 B 细胞克隆技术）的抗体将被归类为-乌马单抗。在一个标准项目中，与 IMGT 数据库进行 BLAST 的小鼠抗体通常会在 VL 结构域显示出与最接近的人类种系约 65-80% 的同一性，在 VH 结构域显示出 60-75% 的同一性。因此，要想在 VH 结构域达到所需的同一率，通常需要对 CDR 中的一些残基进行突变。因此，在人源化过程中需要对 CDR（根据 Kabat 的定义）进行突变，以达到 VH 结构域 85% 的同一性。泰克生物是一家专业的嵌合抗体的构建与生产公司，拥有成熟的重组抗体哺乳表达平台，能为客户提供高质量的嵌合抗体表达定制服务。全套Gibco无血清哺乳细胞培养，配合来源清晰的293F，CHO悬浮细胞系，整个体系满足于不同客户对天然构象蛋白的体外重组表达需求。泰克生物为客户提供的全套高性价比研究服务满足GMP-like体系，包括细胞种子库来源文件记录体系、细胞种子批检定，动物源成分的质控，标准化细胞培养与转化操作流程等。█ 嵌合抗体的分类  嵌合抗体种类简介嵌合原理嵌合IgG抗体在免疫过程中，抗体Fc段能与效应细胞发生相互作用，从而发挥特异的生物学功能；IgG1和IgG3与Fc受体的结合能力最强，IgG4次之，IgG2几乎检测不到结合。构建嵌合抗体首先需从生产鼠源单抗的杂交瘤细胞中得到V区基因，再与人类的C区基因重组并克隆到合适载体中，然后转入受体细胞表达。嵌合Fab和F（ab'）2抗体该种抗体最大的优势是渗透力强，由于该类型抗体的亲和力较低，分子量小，很容易被肾小球过滤而从血液中消失，因此，大多数不适合单独用于临床治疗。将功能性抗体L，H链的V区基因与人的轻链K和H进行重组，然后再转入宿主细胞中表达。█ 人鼠嵌合抗体构建策略 1.模板替换：与鼠对应部分有较大同源性的人抗体FR替换鼠FR，利用已有晶体结构数据的人源抗体的可变区框架（VH如NEW，KOL，VL如REI等)用作替换的基本模板或在已有的抗体序列库中搜寻与鼠McAb FR有最大同源性的人源FR用于替换。2.表面重塑：对鼠CDR及FR表面残基进行镶饰（veneering）或重塑（resurfacing），以使之类似于人抗体CDR的轮廓（profile）或人 FR 的型式。3.补偿变换：在人FR选择与CDR有相互作用、与抗体的亲和力有密切关系或对FR空间结构折叠起关键作用的残基进行改变，以补偿完全的CDR移植。4.定位保留：人源化McAb保留了鼠源McAb可变区中参与抗原结合的氨基酸残基，包括CDR和FR中的一些关键残基。 █ 嵌合抗体设计与表达服务周期  步骤服务内容周期基因克隆及载体构建* 扩增/鉴定基因片段或合成目的基因，插入哺乳动物细胞表达质粒* PCR及测序检测确定亚克隆基因* 交付：测序数据和实验方案1-2周瞬时蛋白表达* 重组质粒转染细胞(293F， CHO) ：瞬时表达* SDS-PAGE和WB检测* 交付：表达载体，克隆菌株，重组抗体，纯度>85%2–3周稳定表达（可选）* 重组蛋白CHO稳定表达细胞系构建和筛选* 交付：稳定细胞系，构建报告；边际产物，3个克隆，每个克隆50ml发酵产物及纯化产物12–14周 █ 泰克服务优势✔ 可变区多种属选择：人、小/大鼠、犬、鸡、骆驼等✔ 免费重组嵌合抗体表达方案设计✔ 有自主优化的HEK293/CHO平台能够进行更好的糖基化及翻译后修饰✔ 自主设计哺乳体系表达载体✔ 过重规格的放大表达体系可供选择✔ 恒定区有多种属选择：人、大/小鼠、犬、恒河猴、兔等✔ 具有多亚型构建的经验：IgG、IgA、IgM和IgE

产品编号：TKPLG102产品名称：T7噬菌体文库构建试剂盒产品描述：The T7 Cloning Kit could be used for phage display library construction and has the capacity to display peptides or proteins up to about 1200 amino acids in size in mid-copy number (5-15 per phage).  In vectors, coding sequences for the peptides or proteins to be displayed are cloned within a series of multiple cloning sites following aa 348 of the 10B protein.规格：1 set展示肽：peptides or proteins up to about 1200 amino acids特异性序列：浓度：试剂盒成分：    T7 Cloning EcoR I/Hind III Vector Arms    T7 Cloning Control Insert    T7 Packaging Extracts    T7 Cloning Packaging Control DNA    BL21 glycerol stock    T7 CloningUP primer    T7 CloningDOWN primer保存条件：Store at -80°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles.运输条件：Shipped on dry ice.Note：研究使用，不能用于其他用途

产品编号：TKPLG101产品名称：M13噬菌体文库构建试剂盒产品描述：The M13 Cloning Kit could be used for phage display library construction and is best used to display small peptides, i.e. sequences of 50 amino acids or less. The M13KE Vector is based on M13mp18 containing the entire M13 genome, with specific cloning sites at the 5’gIII, encoding pIII coat protein. The short peptide sequences are displayed as N-terminal pIII fusions.规格：1 set展示肽：peptides about 50 amino acids or less试剂盒成分：M13KE gIII Cloning Vector   M13 Extension Primer保存条件：Store at -20°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles.运输条件：Shipped on ice packs.Note：研究使用，不能用于其他用途

产品编号：TKPLS101产品名称：噬菌体展示环七肽库筛选试剂盒产品描述：The Phage Display C7C Peptide Library is based on a combinatorial library of random disulfide looped peptides fused to the N-terminus of a minor coat protein (pIII) of M13 phage.  The ready to use complex phage library can be used to discover peptide binders in less than one week with straight-forward molecular biology and sterile culture techniques.规格：1 set展示肽：AC-X7-C-GGG-native M13 pIII特异性序列：~10^9浓度：1 x 10^13 pfu/ml试剂盒成分：噬菌体展示环七肽库 E. coli K12 ER2738保存条件： Store at -20°C. Avoid repeated freezing and thawing cycles.运输条件：Shipped on ice packs.Note：研究使用，不能用于其他用途

泰克生物一致力于基于噬菌体展示技术的纳米抗体发现服务，亲和力是鉴定筛选抗体与目标抗原相互作用的一项重要依据，泰克生物在此基础上建立了完善的亲和力测定平台，目前泰克生物每年成功交付上百个亲和力测定的项目，拥有丰富的经验，可以为客户提供高质量的亲和力测定服务。抗体由具有不同抗原结合位点的近乎无限的序列组成的不同氨基酸组成。抗体和抗原都是多价的，这意味着它们具有多个结合位点。抗体在所有这些位点的总结合强度被定义为亲和力。抗原和抗体的亲和力是指抗体和抗原在单个位点之间的表位-互补位键）。这些分子间相互作用不可能单独测量。相反，Affinity 测试从抗体浓度推断结合亲和力，该浓度表示为平衡解离常数 (KD)的函数。这用于对特定生物分子相互作用的强度进行排序，显示与抗体亲和力成反比。例如，小的解离常数是指抗体与其抗原的高结合强度。泰克生物基于 Biacore 平台和 ForteBio Octet 平台，为客户提供 SPR/BLI 亲和力测定分析服务。█ 生物膜干涉测量法 BLI 通过通过检测干涉光谱的位移变化来检测传感器表面相互作用的生物分子之间的结合和解离情况，是一种基于光学的对非标记的生物分子间的相互作用进行测定的技术。BLI基于捕获第一个分子的生物传感器，并在生物传感器的表面测量第二个分析物的结合，可用于测定分子间相互作用的结合和解离的动力学常数（kon、koff）、亲和常数 (KD) 或生物分子的量化（浓度），适用于各类小分子和生物大分子以及生物大分子和生物大分子之间的分子相互作用的表征。█ 表面等离子体共振（SPR）技术 表面等离子体共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）技术是一种基于光学的无标记检测技术，通过传感器芯片跟踪信号变化实时检测两个或多个分子之间相互作用，SPR信号通过折射率变化呈现。SPR 生物传感器可以研究天然脂质状态下的蛋白质。此外，在成功优化选定的蛋白或小分子之前，必须存在研究数百种潜在的“靶蛋白或靶分子”的阶段，这一阶段对靶标与目标蛋白质的相互作用进行全面表征非常重要。SPR 技术提供了一种方法，可以直接确定未标记化合物与目标之间的相互作用，从而为化合物表征提供了一种可用的方法。█ 服务内容 内容交付交付周期蛋白、抗体、多肽、化合物等小分子（样品>200ug纯度>85%）样品要求：缓冲液为PBS，不含甘油，Tris抗原抗体亲和力测定亲和力测定报告1-2周蛋白与蛋白亲和力测定蛋白（抗体）与多肽小分子亲和力测定高通量排序