模型制作方法:SD大鼠,7日龄,体重11-17g。新生大鼠清醒局部麻醉状态下,行右侧颈总动脉结扎术,再将动物置于恒温密闭玻璃容器中,通以8%O2+92%N2的混合气体,2h后取出,造成幼鼠窒息脑瘫模型。观察指标与分析:症状观察;头部血流量测定;脑组织水含量测定;脑组织中NO含量测定;脑组织中丙二醛含量测定。实验热线:19931682702
6-OHDA损毁MFB造成的大鼠PD模型有两个明显的弊端:一是神经元急性死亡。6-OHDA注入后15分钟即可检测到DA含量的下降,在第30-60分钟时更加明显,3-5天内绝大多数神经元死亡。二是损伤严重。经APO诱发旋转7圈/分以上者,黑质内多巴胺能神经元的死亡率已经超过90%。可见这种模型对于研究多巴胺能神经元慢性进行性病变的全过程不甚理想。但由此得到启发,人们发现机械损伤MFB同样可以造成黑质内的多巴胺能神经元变性坏死,并且这种变化呈现慢性、进行性过程。已经建立的造模方法有MFB轴突切断术(medial forebrain bundle axotomy)和中脑半切术(hemitransection of midbrain)。(一)大鼠MFB切断术: 1.操作步骤 Wistar大鼠,雌性,体重185-210g。常规注射水合氯醛麻醉后,置于Kopf立体定位仪上固定。切开皮肤,暴露颅骨前囟。选择部位在前囟后3.8mm,中线旁开2.4mm处打孔。将Kopf公司(Kopf Instruments,Tuyunga,CA,USA)生产的可伸缩电线刀(retractable wire knife)垂直伸入孔内达颅骨平面下8mm处,固定外套管,将电线刀的刀刃由外套管中推出2.0-3.0mm。上提电线刀约2.5mm,然后下放回原处。再重复一次,以保证MFB充分切断。然后回收刀刃,退出电线刀。缝合皮肤(Lapchak PA等,1993)。2.模型检测(1)旋转行为学检测:术后4周,将大鼠腹腔内注射AMPH(5mg/kg)诱发大鼠旋转。计数90分钟内的旋转次数。(2)其它检测:病理和生化检测与6-OHDA损毁模型同。(二)中脑半切术(hemitransection of midbrain)1.操作步骤SD大鼠,雌雄不限,体重200-250g。常规方法麻醉,立体定位仪上固定和暴露颅骨前后囟。在前囟后1mm,中线旁开0.5mm处打孔。将以特制的4mm宽的刀,沿与颅骨成68度角的方向,斜插入9mm,然后将刀退出。缝合皮肤。(Toffano G等,1984)2.模型检测(3)旋转行为学检测:术后8周,皮下注射APO(0.25mg/kg),诱发大鼠向健侧旋转。(4)其它检测:病理和生化检测与6-OHDA损毁模型相似。实验专线:19931682702(同微信)
肽链的设计多肽是复杂的大分子,每条序列在物理和化学特性上都是独特的,研究人员设计多肽时应考虑到合成,纯化以及溶解等过程中的难度,从而能够使用该多肽达到自己的实验目的。以下是设计过程中的一些建议:如何降低肽链合成的难度1、减少序列长度2、减少疏水性残基数3、减少困难残基如何增强肽链的可溶性1、改变N端或C端2、缩短或加长序列3、加入可溶性残基4、通过置换一个或多个残基改变序列5、通过选用不同框架来改变序列多肽保存1、冻干多肽可在-20度保存或室温保存 2、溶液肽远比冻干形式不稳定,溶液应为中性PH(5-7)-20度保存。 3、为避免样品的反复冻融,最好分成小样存放。多肽的溶解大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水,稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽,建议用DMF,脲,guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。多肽的用途主要用于抗体的制备,多肽疫苗,多肽微注射剂对基因结构与功能关系的研究。本公司提供不同纯度的多肽,多粗提产物到98%的医药级别,客户可根据需求进行选择。>80% :免疫学应用,多克隆抗体制备>90%:SAR研究,生物测定>95%:NMR,结晶化,体外生物测定>98%:NMR,结晶化,敏感的生物测定实验热线:19931682702(同微信)
我实验室自有动物实验中心,可以对候选药物进行筛选,用来提高新药研发的成功率,减少研发费用,缩短新药的研发时间。细胞水平的药物筛选是种简单易行的检测药物在细胞中功能的方法。实验成本低、周期短、重复性好,可作为早期药物筛选的有效方法。建立的多种药物体外筛选模型,可为药物的药效提供有效的评价,作为早期药物筛选的有效方法。实验热线:19931682702(同微信)
类风湿性关节炎(RA)的病因与病理一直是医药工作者研究的热点,建立起理想的动物模型是十分必要的。近年来报道较多的是Ⅱ型胶原(CⅡ)和不完全弗氏佐剂(IFA)混合注射所致的关节炎模型(CIA)及弗氏完全佐剂诱导的佐剂动物关节炎模型。胶原关节炎模型比佐剂关节炎模型更接近人类RA的病理特征。本实验根据文献[1]的研究结果,为了更有效地观察到关节骨破坏模型,对传统的方法进行改良后得到大鼠类风湿颞下颌关节炎动物模型。 1 材料与方法 1.1 实验动物:Wistar大鼠48只,雌性,5周龄,体重约(120±15)g,随机分成两组,正常对照组、实验组各24只。 1.2 主要试剂:牛源性Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ),弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund’s Adjuvant,IFA),美国Sigma公司产品。 1.3 方法 1.3.1 诱导产生大鼠类风湿颞下颌关节炎模型:剃除大鼠背部周围毛,取配置好的乳剂100μl,自鼠尾部开始,在脊柱两旁皮下多点注射,每只鼠注射1.0ml,1周后加强免疫1次,注射0.5ml/只。建立胶原诱导的大鼠实验性关节炎动物模型。对照组用生理盐水同期注射。实验热线:19931682702
模型制作方法 新西兰白兔,体重2-2.5kg,雌雄兼用。参照图开胸冠状动脉左室支结扎/开放为心肌缺血再灌注模型的分法予以改进。实验前禁食12小时,耳缘静脉麻醉,将其仰卧固定预实验台上。沿颈部正中剪开,实施气管插管。沿胸骨左缘逐层切开胸壁软组织,剪断2-4肋骨,扩开切口,暴露心脏,剪开心包膜,用自制拉钩将心包膜对称、均匀牵拉并固定,在冠状动脉左室支离主动脉根部约8-10mm处,用眼科圆形弯针穿1根2-0丝线以备结扎。观察45min以上,使血液动力学各项指标稳定,收紧结扎线是动脉左室支缺血40min,然后放松结扎线,在灌注120min。观察160min.观测指标与分析1、心肌中INOS反转录PCR测定;2、心肌iNOS蛋白表达水平的检测;3、心肌细胞中iNOSmRNA原位杂交观察。实验专线:19931682702(同微信)
细胞划痕愈合法是测定细胞迁移运动与愈合能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移及修复能力。特点: 1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。2. 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。传统实验方法 实验步骤: 1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。2. 细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。3. 细胞铺满板底后,用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法最大的缺陷。)4. 吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。 5. 加入无血清培养基,拍照记录。6. 将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。7. 根据收集图片数据分析实验结果。
脑胶质瘤模型制作:1、常规术前大鼠禁食禁水,腹腔注射麻醉后将大鼠取俯卧位固定于脑立体定向仪(江湾Ⅱ型)上。2、剪去头顶部眼裂至外耳道之间的毛发,常规消毒铺敷后,于右顶叶处(矢状缝旁开3mm,冠状缝前1mm)用直径1mm的牙科钻小心钻穿颅骨,以20μl微量进样器抽取配好的细胞悬液10μl,缓慢垂直颅骨板进针6mm,回退1mm,缓慢(约2μl/min)注入4μl细胞悬液。3、留针5min后缓慢拔针。用骨蜡封闭骨孔,生理盐水冲洗术野,缝合头皮,常规饲养。
脊髓损伤是一种致残率很高的疾 病, 给家庭、社会均带来沉重的负担。 随着工业、建筑业和交通 运输的飞速发展, 脊髓损伤患者数量呈逐年上升趋势。常用的造模方法有以下几种:1)脊髓撞击伤模型2)脊髓压迫伤模型3)脊髓横断损伤4)脊髓牵拉损伤模型5)脊髓缺血性损伤整体课题实验外包:19931682702(同微信)
细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。细胞的生长需要营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。细胞培养泛指所有体外培养,其含义是指从动物活体体内取出组织,于模拟体内生理环境等特定的体内条件下,进行孵育培养,使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域,成为最重要的基础科学之一。优点1、能长期传代,保持活性,便于监控检测结构功能和生命活动。2、培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响3、可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化(变异、分化)。可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。4、研究范围和细胞来源广泛,选择性广。5、不同代次细胞可长期保存,既可开展同代次不同条件和方法研究,又可观察不同代次的动态变化。6、耗资少、经济、成本低、可大量培养,利于生物制品的生产。实验热线:19931682702(同微信)