白介素-4 (IL-4)是有许多生物学作用的细胞因子,包括刺激激活的B细胞和T细胞增殖以及CD4+ T细胞分化为Th2细胞,是体液免疫和适应性免疫的一个重要调控者。 IL-4与细胞表面受体复合物结合,该复合物由IL-4结合蛋白 (IL-4R a)和IL-2受体复合物的r链(r c)组成。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IL-4的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理: IL-4试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人IL-4抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人IL-4抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IL-4夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IL-4的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
生物学功能是由启动表达和关闭表达的基因控制的。基因表达的改变与人类的许多疾病相关。基因芯片等分子检测技术为同时检测数千种基因表达提供了高通量的方法。这些方法已经应用于各种生物样本和各种疾病的样本,通过比较基因表达鉴别出差异表达的基因,将这些差异表达的基因抽提出来,用做检测生物过程和疾病状态的基因组。NFkB 是一种广泛存在的转录因子,在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用,这些刺激包括:压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与癌症、炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。NFkB激活时,与其抑制剂IkB解离,从细胞质移到细胞核,在此与靶DNA 结合,正调节基因的转录,参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡。美国Signosis公司研发的cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种NFkB调节基因表达。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的NFkB调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
核因子-kB(NF-kB)是一种转录因子,调控参与免疫反应、凋亡和细胞周期的基因表达。NF-kB可以由各种刺激物激活,这些刺激物有细胞因子、T、B细胞有丝分裂原、病毒蛋白、压力诱导物。刺激导致其抑制物IkB的磷酸化,使NF-kB从IkB复合物中释放出来。解离后,NF-kB从细胞质转至细胞核,与靶DNA因子结合,正向调节靶基因的转录。检测NF-kB的活性对研究NF-kB的激活及相关通路的潜在机制至关重要。美国Signosis 公司研发的NF-kB滤板法检测试剂与常规的凝胶迁移试验不同,它是一种高通量的检测方法,可同时分析多个标本,而且该方法较非放射的凝胶迁移试验简单的多,较基于P32的凝胶迁移试验安全的多。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的NF-kB滤板法检测试剂,具有下列优势: · 简单快速---比凝胶迁移试验简单、快速 · 高通量筛选---多个样品可在一个试验中得到分析 · 费用低廉---与基于ELISA的检测方法相比花费更少 · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析 B. 原理 美国Signosis 公司研发的NF-kB滤板法检测试剂,是基于微孔板检测NFkB活性的分析方法,该方法中使用二块板---过滤板和杂交板,预标记NFkB的DNA结合序列与核抽体物混合,形成NFkB与预标记的DNA序列。过滤板用于保留结合的DNA序列,除去游离的DNA序列。结合的预标记的DNA序列随后从过滤板上洗脱、收集,用于微孔板杂交。捕获的DNA序列进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测,在微孔板发光检测仪上读取发光度值(RLUs)。
细胞因子参与许多生物活动,如病毒感染、炎症、免疫和造血。细胞因子是许多类型细胞对不同刺激反应的产物。细胞因子基因的表达由复杂的机制调控。一种细胞因子基因的表达可由多种细胞因子调控。细胞因子基因表达调控的异常可由染色体改变或导致表达机制激活或失活的病毒感染引起。因此,检测细胞因子基因表达为揭示调控的潜在机制提供了一种实用的方法。美国Signosis公司研发的细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种细胞因子基因表达。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的人细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
miRNAs是非编码的小RNA分子,调控着30%哺乳动物基因的表达,其中一些分子是干细胞特异的。miRNA表达的芯片分析方法显示干细胞上存在一组独特的miRNAs。美国Signosis公司开发了一系列miRNA微孔板检测试剂来分析这些分子。 A.优点: 美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点: ·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验,无需用酶转换miRNA成cDNA,检测步骤只是孵育和洗涤。 ·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 ·分辨力强---在分辨同源miRNA 时,较Northern blot有更高的分辨力。 ·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 B.原理: 基于自有专利miRNA微孔板检测中,一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接,一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交,另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交,杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上,再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测,这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感,一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成,从而可分辨同源miRNA,而Northern blot则很难鉴别同源miRNA,此外该方法的敏感性较Northern blot高。
SATB1是在乳腺癌转移中起重要作用的核蛋白,通过改变数百基因的表达包括表皮生长因子基因Her2、影响细胞粘附、细胞信号传递、细胞周期调控和其它功能,促进肿瘤生长和转移。 SATB1不是所有细胞都表达,仅转移的细胞表达SATB1,浸润性最强的乳腺癌细胞有最高水平的SATB1。 当SATB1在乳房肿瘤中查出,癌症很可能会进展或复发。对人原发性乳腺癌组织样品的临床随访研究表明,存活时间最短的患者样品SATB1水平最高; 肿瘤样品没有SATB1表达的患者通常有更长的存活期。 另外, SATB1 调控基因表达的能力对T细胞发育至关重要。 研究表明SATB1与HDAC1或PCAF相互作用,受磷酸化调控并由天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 6切割,在Jurkat细胞表达较高,在HeLa细胞表达较低。 A. 优点: · 性价比高---质量高,价格低。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对SATB1的抗体。 · 操作简单---预包被96孔板的完整试剂系统。 B. 原理 SATB1 酶免试剂为固相酶免法。方法采用生物素标记的SATB1 DNA 结合序列与预包被板上的链酶亲和素结合,形成SATB1/DNA 复合物, 加入抗-SATB1抗体和抗-鼠IgG辣根过氧化物酶结合物孵育后,洗去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。 SATB1的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,测定450 nm 处的吸光值进行定量。
血管形成从无血管状态转变成有血管状态是生长维持的一个关键因素。 血管形成作为一种生物学的转换过程由促进和抑制血管形成的许多因素控制,包括血管内皮细胞生长因子(VEGF), 碱性成纤维细胞生长因子(FGFb),表皮生长因子(EGF)和促生长因子b(TGF-b)。 这些因子的作用机制是不同的,就象它们的来源和它们产生的刺激物一样。 血管形成的转换通常是促进和抑制血管形成因素之间的平衡结果。所以,描绘这些因素对了解血管形成至关重要。 美国Signosis 8种血管生成细胞因子复合酶免法平行检测试剂可同时检测8种血管形成细胞因子:TNFa、IGF-1、VEGF、IL-6、FGFb、TGFb、EGF和Leptin。板条每个孔包被有针对血管形成蛋白的特异抗体,一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。二个样品之间蛋白质的区别可以通过数据比较加以测定。 A. 优点: · 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种血管形成细胞因子 · 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 · 差别定量---不同于膜芯片方法,样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外, EA- 1012为做标准曲线提供标准品。 · 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法,勿需贵重仪器 · 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理 板条每个孔包被有针对血管形成细胞因子的特异抗体,8个孔包被有8不同抗体,一个板条8个孔可测定8不同细胞因子。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应,血管形成细胞因子夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后,洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。450 nm处测定吸光值。 血管形成细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
白介素 12 (IL-12)是有许多重要作用的白介素,包括NK细胞和T淋巴细胞的激活,初始T细胞分化为Th1细胞, T细胞生长和功能化, T细胞和自然杀伤细胞(NK) 产生干扰素r(IFN-r) 和坏死因素-a (TNF-a),IL-4介导的对IFN- r的抑制。IL-12 通过增加IFN- r的产生,反过来增加IP-10的产生,在抗血管生成活性中起重要作用。 IL-12是在对抗原刺激应答时由树状细胞、巨噬细胞和人B-淋巴母细胞系细胞自然产生。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IL-12的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理: IL-12试剂为固相酶免法。 方法采用羊抗人IL-12抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人IL-12抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IL-12夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IL-12的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
过氧化体增殖物激活型受体-α(PPAR-α)在细胞分化、发育、代谢(碳水化合物、脂质、蛋白)和肿瘤发生中起着重要作用,PPAR-α是一种核受体蛋白,做为转录因子调控基因表达,其可以与其它许多共调节物如P300,TRIP3相互作用调控着下游基因的表达。美国Signosis提供的PPAR-α免疫共沉淀试剂盒包括带Myc标签的PPAR-α表达载体,其可用于分析PPAR-α和PPAR-α相关蛋白之间的相互作用。 A. 优点: PPAR-α免疫共沉淀试剂盒具有下列优势: · 蛋白相互作用的功能性检测方法——可用于RXR与其它蛋白的相互作用。 · 噪音低——WB检测时非特异信号非常低。 · 结果一致性高——磁珠易于通过磁架分离,少而快的洗涤无样品丢失。 · 快速——蛋白用抗Myc磁珠沉淀,无需预分离步骤,缩短孵育时间。 · 简便——试剂盒包含全部试剂组份。 B. 原理: Myc标签的PPAR-α表达载体用于转染靶细胞。转染后,PPAR-α表达Myc抗原决定部位标签,与反应蛋白结合。PPAR-α复合物与相应蛋白可以快速高效的与抗Myc抗体免疫共沉淀,共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开,洗涤后,复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来,用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。
白介素-6 (IL-6)是调控免疫反应、造血、急性相反应和炎症的一种多功能细胞因子。IL-6产生的下调涉及到几种疾病过程的病理学。在几种疾病观察了它的水平,包括风湿性关节炎(RA)。IL-6以促炎和抗炎细胞因子发挥作用,由T细胞和巨噬细胞分泌刺激免疫反应。另外,IL-6象TNFa一样也许是介入胰岛素抵抗的另一种脂肪细胞分泌产物。IL-6是许多细胞分泌的细胞因子,包括脂肪细胞和脂肪基质细胞。IL-6的分泌在肥胖者的脂肪细胞是增加的,作为一种循环激素或胰岛素活动的局部调节剂也许有其重要性。IL-6涉及肥胖者胰岛素抵抗的发展。象TNF,IL-6抑制LPL表达,但是不同于TNF,IL-6不刺激脂肪分解。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对人IL-6的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: IL-6试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人IL-6抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人IL-6抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品IL-6夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。IL-6的浓度与待测样品的颜色呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对人IL-6的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: IL-6试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人IL-6抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人IL-6抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品IL-6夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。IL-6的浓度与待测样品的颜色呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。