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转录因子(TF)的转录活性常常是通过报告载体测定的，载体含有TF的顺式因子(DNA结合序列)和荧光素酶样的报告基因。报告基因导入细胞，激活的TF与顺式因子结合，介导报告基因的启动。这种启动可以通过生化分析报告基因的产物进行测定。然而这是一种单项测定，一次测一个TF。由于细胞的变化会导致多种TF的激活，检测这些TF就需要多次转染和生化测定。此外，由于被导入到不同的细胞培养孔，还需要标准化规范转染。美国Signosis 公司基于自有专利开发一种多重转录因子(TF)报告基因实时PCR检测试剂以同时检测多种TF，检测试剂中所选24种TF代表了大多重要的信号转导通路。在多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I中，24种TF报告载体混合物是一次性转染入细胞。24种TF活性用实时PCR SYBR green同时检测，采用试剂盒内自带的CLTM细胞裂解液，直接用细胞裂解物，勿需进行RNA制备。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有专利技术研发的多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂，具有下列优势： · 基于细胞的方法---基于细胞的方法检测TF 的活性 · 多重复合---24种TF活性可一次转染，同时检测 · 无需RNA制备---细胞裂解物可直接用于cDNA合成 · 定量比较---二个或以上样本可同时用实时PCR定量分析 B. 原理 多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I是一种实时方法，可同时定量检测24种TF活性。该技术中，构建一系列报告载体，每一种含有一个顺序因子和针对一种特异TF的载体标识序列。当载体做为文库加入96孔板某一孔，TF的激活将使其与相应的载体结合，介导标示序列的表达。细胞裂解物制备后，转录成cDNA，再进行实时PCR，TF的差异通过二个样本的比较进行区别。
表皮生长因子(EGF)是许多细胞强的有丝分裂原，例如成纤维细胞。 EGF刺激胚胎细胞的增殖，有些细胞系的增殖显示受EGF抑制。 EGF作为一些类型细胞的分化因子进行活动。 在一定程度上，EGF也增加血管形成，因为它是内皮细胞的有丝分裂原。 EGF对内皮细胞的有丝分裂活动可以由凝血酶增强。 EGF是成纤维细胞和上皮细胞的强趋化物。 单独EGF或与其它细胞因子组合是介导创伤恢复过程的一个重要因素。 (详见：http://www.zhongzhibio.com/kysj/521.htm) A. 优点： · 性价比高---高质量，低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人EGF的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理： EGF试剂为固相酶免法。 方法采用鼠抗人EGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的羊抗人EGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测， 待测样品EGF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物，产生蓝色反应， 加入终止液后转成黄色。EGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450 nm处测定吸光值进行定量。
神经增长因子(NGF)是特定靶神经元(神经细胞)分化和存续的小分泌蛋白。 NGF最近被认为是新的血管生成分子，对心血管系统和内皮细胞有各种作用。 NGF通过自分泌和旁分泌机制对内皮细胞进行支持、存续和功能化。 bNGF结构上与BDNF、NT-3和NT-4有关。 NGF通过其受体bNGFR发信号，在感觉和交感神经系统的发育和维持上起重要作用，是强的神经营养性因子。 bNGF也作为B淋巴细胞的成长和分化因素，提高B细胞生存期。 A. 优点： · 性价比高---高质量，低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人b-NGF的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理： b-NGF试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人b-NGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的兔抗人b-NGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测， 待测样品b-NGF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物，产生蓝色反应， 加入终止液后转成黄色。b-NGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450 nm处测定吸光值进行定量。
miRNA调控着30%哺乳动物基因的表达。miRNAs的异常表达表明与癌症相关。检测miRNA表达显示在不同癌症中有独特的一组组miRNAs。美国Signosis公司开发了一系列miRNA微孔板检测试剂来分析这些分子。 A.优点： 美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： ·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 ·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 ·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 ·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 B.原理： 基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。
干细胞是重要细胞，其能够自我更新或者分化成多种类型的细胞，这种能力由细胞信号传导和转录调控所控制，因此转录调控在细胞识别和功能实现过程中起决定作用。干细胞逐步成熟成为终末分化细胞，需要由重要的转录因子适时的激活级联转录程序，多种转录因子和靶基因广泛报告与干细胞的自我更新和多能性有关，包括EGR1, OCT4, FOXD3, FOXO, Nanog, SOX2, SOX18, ETS, GLI, KLF4, MEF2, Myc, RNUX1, Pax6, TCF/LEF 和GATA。分析这些TF的活性可以为干细胞的研究和应用提供有价值的线索。美国Signosis 公司开发一种干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂，以同时分析哺乳动物样本中16种干细胞特异的TF，该方法可以用1000-10000个细胞的全细胞裂解物进行。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有技术研发的干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂，具有下列优势： · 多重分析---一次分析可以检测16种干细胞相关的TF · 定量比较---二个样本的差异可以定量分析和比较。 · 步骤简单---探针温育、柱分离、板杂交和HRP检测 · 无需贵重仪器---无需如luminex那样的贵重仪器 B. 原理 干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂用于同时检测多种TF活性。该技术中，基于TF DNA结合位点的一致性序列，制备一系列生物素标记的探针。当探针混合物与核提取物一起温育时，每个探针寻找相应的TF，形成TF/探针复合物，通过柱离心纯化可以很容易与游离探针分开。结合的探针从混合物中分离出来，通过板杂交分析。板孔中预包被上与探针互补的特异序列，捕获的DNA探针进一步用链酶亲和素-HRP检测，化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。
miR-21 在各种Ca症中出现过度表达，被认为是下调肿抑制因子的Ca基因，包括程序性细胞死亡4 (PDCD4)、肿抑制因子Pdcd4、PTEN 肿抑制基因和肿抑制基因的原肌球蛋白1 (TPM1)。miR-21 是Ca细胞生存的重要调节因子，与抗凋亡蛋白表达激活的IL-6/Stat3介导的生存通路不同，miR-21由Stat3上调，通过抑制TPM1 和/或其它蛋白介导凋亡的抑制。中帜生物研发的miR-21微孔板检测试剂提供了一种分析miRNA分子一种简便快速的方法。 A.优点： 中帜生物基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： ·操作简单——做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤 ·灵敏度高——较miRNA Northern blotting分析敏感100倍 ·分辨力强——在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力 ·差别定量——二个或二个以上样本的miRNA簇表达的差异可定量分析 B.原理： 基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。捕获的miRNAs进一步用辣根酶标记的亲和素检测，发光信号的强度用发光仪检测，miRNAs表达水平直接与发光度值成正比。
miRNAs参与调解各种生物过程，如细胞死亡和细胞增殖。miRNA可以做为原癌基因和肿瘤抑制基因，在肿瘤形成中起着重要作用。miRNAs表达水平的变化是与其相应的蛋白编码的靶基因功能不正常有关，其中许多参与癌症的发生和发展。例如，BCL2原癌基因是miR-15a和miR-16的靶向基因，PTEN肿瘤抑制物是miR-21、HOXD10是miR-10b、Pak是miR-7、MYOD1和ER是miR-206、Her2是miR-125a的靶向基因。美国Signosis研发的肿瘤miRNA微孔板检测试剂I是定量检测7种有名的癌相关miRNAs的表达，分别是miR-15a、miR-16、miR-21、miR-21、miR-10b、miR-7、miR-125a和miR-206。RNU48用于试剂盒的标准化。 A.优点： 美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： ·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 ·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 ·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 ·差别定量---二个或二个以上样本的miRNA簇表达的差异可定量分析。 B.原理： 基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。捕获的miRNAs进一步用辣根酶标记的亲和素检测，发光信号的强度用发光仪检测，miRNAs表达水平直接与发光度值成正比。
T细胞是一类在免疫反应中起着重要作用的淋巴细胞。T细胞受体是一种合成体蛋白，参与T细胞抗原应答时的激活，这种激活需要受体合成体亚单位和其它膜分子，使细胞外受配体反应与下游的信令通道结合，如肌酸磷酸的增加，细胞外钙水平和蛋白磷酸化增高。TCR激活促成许多信号级联反应，通过调节细胞因子的产生、细胞生存、增殖和分化，最终确定细胞的命运。美国Signosis公司人T细胞受体信令cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种相关基因。 A. 优点： 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的人T细胞受体信令cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点： ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理： 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法，该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似，加入生物素-dUTP后，总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸，将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物，cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
免疫共沉淀是一种研究蛋白质相互作用的常用方法，其应用抗体免疫沉淀抗原，以共沉淀相互作用的蛋白。传统的免疫共沉淀方法用琼脂糖蛋白A或G共洗脱抗体轻、重链，这会掩盖重要结果。Signosis C-Myc标签免疫共沉淀试剂盒提供了一种简单快速的方法，用连接有抗C-Myc标签抗体的磁珠研究带C-Myc标签的蛋白，抗体和磁珠的共价连接形成的沉淀产物进行WB检测时背景较低，高亲和性和特异性抗体包埋的磁珠高效特异的免疫沉淀或共沉淀相互作用物。 A. 优点： ·C-Myc免疫共沉淀试剂盒具有下列优势： · 快速---高亲和性的抗·C-Myc抗体交联的磁珠免疫沉淀带·C-Myc标签的蛋白或免疫共沉淀相互作用物，无需前分离步骤，缩短孵育时间。 · 噪音低--- 抗体与磁珠的共价连接，形成的沉淀终产物无抗体污染。 ·结果一致性高---磁珠易于通过磁架分离，少而快的洗涤无样品丢失。 ·简便---试剂盒包含全部试剂组份。 B. 原理： Myc标签的表达载体用于转染靶细胞。转染后，特异蛋白表达Myc抗原决定部位标签，与反应蛋白结合。复合物与相应蛋白可以快速高效的与抗Myc抗体免疫共沉淀，共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开，洗涤后，复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来，用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。
