【评价原理】

氨基糖苷类抗生素——新霉素会损伤人的内耳，影响内耳的听觉和位置感受等功能。斑马鱼具有典型的内耳结构，内耳的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似。在新霉素作用下也会出现听细胞损伤。

经过DASPEI特异性荧光染色（呈绿色），听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失（荧光减弱或者消失）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用听保护剂组。其中正常对照组未摄入新霉素，模型对照组与服用听保护剂组都摄入了等量的新霉素（新霉素通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用听保护剂组在摄入新霉素的同时摄入谷胱甘肽之类的听保护剂。

服用一段时间听保护剂后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毛细胞表型图

绿色荧光颗粒为毛细胞

可以看到，服用听保护剂组的毛细胞情况与未摄入新霉素的正常对照组比较相似，毛细胞损伤较轻。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用听保护剂组的毛细胞情况与未摄入新霉素的正常对照组相似，并未出现模型对照组的毛细胞缺失的情况。

2.本实验证实了谷胱甘肽具有显著的保护听力作用。

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【评价原理】

帕金森病是一种影响运动能力的退行性神经系统疾病，一般认为与黑质纹状体的多巴胺能通路破坏有关。中脑黑质多巴胺能神经元大量死亡可导致多巴胺减少，不能正常传递运动信号，乙酰胆碱功能也相对增强，导致帕金森患者出现静止性震颤和肌肉僵直等典型的运动症状。斑马鱼由于体积小、胚胎和早期幼鱼透明、神经系统在胚胎发育4天时就已发育成熟，在胚胎时期就能观察到完整的中枢神经系统。斑马鱼胚胎透明，能观察到多巴胺长投射纤维在脑和脊髓的分布，对帕金森病的发病机制研究有重要作用。6-OHDA是一种能有效导致多巴胺神经元变性的神经毒剂，广泛用于动物帕金森模型。诺米芬辛是4一氢异喹啉衍化的三环类化合物，它抑制多巴胺及NA的摄取，主要是通过抑制多巴胺转运体对生物体起作用。

经过行为学分析仪，患有帕金森病的斑马鱼的运动距离明显减少；经过免疫组化染色，患有帕金森病的斑马鱼多巴胺神经元面积明显减少。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用帕金森病治疗药物组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与阳性对照组都摄入了等量的6-OHDA（6-OHDA通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。帕金森病治疗药物组在摄入6-OHDA的同时摄入诺米芬新之类的帕金森治疗药物。

服用一段时间帕金森治疗药物后，我们用行为学分析仪测定斑马鱼的运动总距离，并对斑马鱼体内多巴胺神经元进行免疫组化染色，分析多巴胺神经元面积变化。

【结果展示】

图1. 各实验组斑马鱼运动总运动距离

与模型对照组比较，*p< 0.05

可以看到，模型对照组斑马鱼的运动总距离与正常对照组相比明显减少，帕金森病治疗药物组的运动总距离与正常对照组较相似，没有明显的减少。

图2. 帕金森病多巴胺神经元免疫组化染色

黄色区域为定量区域

可以看到，模型对照组的多巴胺神经元面积与正常对照组相比明显减小，帕金森病治疗药物组的多巴胺神经元面积与正常对照组比较相似，没有明显的减小。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用帕金森病治疗药物组的运动总距离、多巴胺神经元面积与正常对照组相似，并未出现模型对照组运动总距离明显减少和多巴胺神经元面积明显减小的情况。

2.本实验证实了诺米芬新具有防治帕金森病的作用。

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【评价原理】

毛蕊异黄酮，作为从黄芪中分离得到的异黄酮类成分已被证明了其具有促血管新生的活性，其表现为促进斑马鱼胚胎肠下血管增粗，诱导血管及血管之间的交联的形成。斑马鱼心血管系统在分子信号通路上与人和哺乳动物的同源性达到85%以上，近年来斑马鱼广泛地应用于心血管疾病研究领域。我们评价血管形成促进功效的指标为肠下血管面积。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成二组，分别是正常对照组和服用促血管形成剂组。其中正常对照组不做任何处理。服用促血管形成剂组加入毛蕊异黄酮之类的促血管形成剂。服用药物一段时间后在荧光显微镜下分析斑马鱼肠下血管面积。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肠下血管面积表型图

黄色虚线区域为肠下分析区域

可以看到，服用促血管形成剂组的肠下血管面积与正常对照组比较明显变大。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用促血管形成剂组斑马鱼与正常对照组比较，肠下血管面积明显变大。

2.本实验证实了毛蕊异黄酮之类的药物具有显著的血管形成促进作用。

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【评价原理】

醉酒实为急性乙醇中毒，使人大脑兴奋，引起行为异常。乙醇进入人体后90%进入肝脏进行代谢，乙醇脱氢酶（ADH）可以将其氧化为乙醛，在乙醛脱氧酶（ALDH）催化下，乙醛转化为乙酸，最后转化为二氧化碳和水。在ADH和ALDH两种酶的作用下，乙醇能够被机体代谢而避免引起机体损伤。由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似，当乙醇被过量摄入后，经过代谢产生大量乙醛，致使乙醛在体内积累，出现醉酒现象。

解酒有两种评价方法：1. 总运动距离，应用行为分析仪分析斑马鱼的运动轨迹，醉酒斑马鱼的总运动距离比正常斑马鱼明显增多。2. ADH和ALDH两种酶的含量，通过检测斑马鱼体内ADH和ALDH两种酶的含量，分析两种酶的调节作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用解酒剂组。其中正常对照组未摄入酒精，模型对照组和服用解酒剂组都摄入了等量的酒精（酒精通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用解酒剂组在摄入酒精之前摄入RU21、海王金樽之类的解酒剂。

服用一段时间解酒剂后，应用行为分析仪分析摄入酒精后的斑马鱼总运动距离；同时用ALDH和ADH试剂盒检测两种酶的含量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼运动轨迹图

黑线：慢速运动轨迹；绿线：中速运动；红线：快速运动，红线代表醉酒行为状态

可以看到，服用解酒剂组的运动轨迹与模型对照组比较，快速运动明显减少，醉酒行为有所改善。

图2. 斑马鱼体内乙醇脱氢酶含量

与模型对照组比较，** p < 0.01

图3. 斑马鱼体内乙醛脱氢酶含量

与模型对照组比较，** p < 0.01

从柱状图中可以出来，服用解酒剂组的ADH和ALDH两种酶含量与模型对照组比较明显增高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用解酒剂组的总运动距离与模型对照组比较明显降低，并ADH和ALDH两种酶含量明显增高。

2.本实验证实了RU21、海王金樽具有明显的解酒功效。

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【评价原理】

斑马鱼与哺乳动物有相似的神经系统。在哺乳动物体内起到睡眠调节作用的分子和细胞群（单胺能、胆碱能、下丘脑素能）的斑马鱼体内大部分是守恒的。各种催眠药物如H1组胺能拮抗剂、褪黑激素激动剂、-2肾上腺素能激动剂和γ-氨基丁酸（GABA）能调节剂在斑马鱼体内的反应也很保守。GABA是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。戊四唑（PTZ）是GABA抑制剂，小剂量PTZ可诱导既有躁狂症又有抑郁症的双相精神障碍，从而造成失眠。

患有失眠症的斑马鱼会表现出行为异常，表现为总运动距离明显增加，可以用行为分析仪观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和安神助眠剂组。其中正常对照组未摄入PTZ，模型对照组与安神助眠剂组都摄入了等量的PTZ（PTZ通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。安神助眠剂组在摄入PTZ前服用睡安片之类的安神助眠剂。

服用一段时间安神助眠剂后，我们通过行为分析仪检测斑马鱼的总运动距离。

【结果展示】

图1. 斑马鱼的运动轨迹图

红色线条表示快速运动轨迹，绿色线条表示中速运动轨迹，黑色线条表示慢速运动轨迹

可以看到，服用安神助眠剂组的运动明显比加了模型对照组减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用安神助眠剂组的总运动距离相对于模型对照组明显减少，能缓解斑马鱼的躁狂症。

2.本实验证实了睡安片具有安神助眠功效。

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【评价原理】

斑马鱼为鲤科短担尼鱼属的小型硬骨鱼，1998年国际经济合作与发展组织将斑马鱼胚胎发育方法列入测定单一化学品毒性的标准方法。由于斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，近年来斑马鱼被广泛应用于人类疾病模型及药物筛选、毒理学与环境检测中，使其成为新型的脊椎模式生物。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或胚胎注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性发生率。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胚胎毒性表型图

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼眼变小、心包水肿、肝脏变性、卵黄囊吸收延迟、胃肠道发育延迟。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的组织器官产生明显的毒性表型，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有胚胎毒性。

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【评价原理】

斑马鱼的听觉外侧系统由内耳和侧线两个关键的感觉结构组成，斑马鱼具有典型的内耳结构，内耳的毛细胞和侧线的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似，包括对耳毒性药物的相似反应。

经过特异性荧光染色（呈绿色），听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失（荧光减弱或者消失）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毛细胞表型图

绿色荧光颗粒为毛细胞

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼毛细胞减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。

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【评价原理】

由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性，而且与其他的动物模型相比，斑马鱼具有个体小适合高通量化学筛选、幼鱼身体透明易于观察骨骼发育的特点，所以近年来以斑马鱼为模型的骨骼研究逐渐成为这一领域的热点。斑马鱼从前向后的脊椎发育过程是非连续的，而是分成两个不同的区域：前域（包括前3块椎骨）和后域（包括第4-31块椎骨）。将斑马鱼脊椎骨钙化过程分成两个不同区域是基于第2和第3椎骨的出现晚于第4椎骨。我们利用斑马鱼骨骼发育的规律，摄入生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨发育会加快。

脊椎骨染色应用与钙特异性结合的荧光染料（呈绿色），经荧光显微镜观察脊椎骨的数量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用生长发育促进剂组（维生素D3、碳酸钙之类的生长发育促进剂通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间生长发育促进剂后，我们对斑马鱼做骨骼特异性荧光染色，观察斑马鱼脊椎骨的发育情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼脊椎骨荧光图

黄色虚线区域为定量的脊椎骨

可以看到，服用生长发育促进剂的脊椎骨数量明显比正常对照组增多。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨数量比正常对照组增多。

2.本实验证实了维生素D3、碳酸钙具有明显促进生长发育功效。

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【评价原理】

伤口在愈合过程中会出现一系列的机体反应，如形成新生毛细血管、损伤部位出现黑色素募集现象、伤口部位会出现大量的白细胞以增强伤口对感染的抵抗能力，并有大量的坏死细胞以及凋亡细胞被清除等。

利用斑马鱼幼鱼通体透明，成年斑马鱼尾鳍结构简单、易于手术操作、损伤后不影响生存等特点，通过物理/化学方法损伤斑马鱼肌肉、皮肤造成斑马鱼组织再生或伤口损伤。可以观察到幼鱼伤口部位（1）黑色素；（2）新生血管；（3）凋亡细胞；（4）巨噬细胞；（5）坏死细胞。可以观察到成鱼尾鳍的再生面积和长度。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和伤口愈合促进剂组。其中正常对照组未经过物理/化学损伤，模型对照组与伤口愈合促进剂组都经过了同程度的损伤。服用伤口愈合促进剂组在损伤后摄入胶原蛋白类等伤口愈合促进剂。

在幼鱼上服用一段时间伤口愈合促进剂后，观察伤口色素变化、新生血管情况、伤口部位凋亡细胞和巨噬细胞的荧光强度以及坏死细胞的数量。

在成鱼上服用一段时间伤口愈合促进剂后，观察成鱼尾鳍再生面积和长度的情况。

【结果展示】

白色虚线为尾鳍切除范围，红色虚线为尾鳍再生面积，黑色箭头所指为沿鳍条再生射线方向统计尾鳍再生长度的示意图

可以看出，伤口愈合促进剂组的组织再生面积与模型对照组比较增多。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用伤口愈合促进剂组与模型对照组比较，黑色素明显减轻、新生血管数明显增多、凋亡细胞、巨噬细胞及坏死细胞明显减少。

2.经过每组10尾斑马成鱼的对比实验，服用伤口愈合促进剂组与模型对照组比较，组织再生面积较模型对照组增多。

3.本实验证实了胶原蛋白具有促进伤口愈合功效。

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【评价原理】

Wnt是一种分泌的糖蛋白，发育调控的的wnt基因编码分泌的糖基化蛋白质，作用于细胞表面，大多数的wnt基因在机体伤口修复和再生需要组成受伤组织的各种细胞类型之间做协调。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分为体轴发育和断尾再生两种模型。

体轴发育评价分成两组，分别是正常对照组和服用Wnt信号通路抑制剂组（Wnt信号通路抑制剂LGK974通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间Wnt信号通路抑制剂后，对斑马鱼体轴长度进行测量，观察体轴长度的变化。

断尾再生评价分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用Wnt信号通路抑制剂组（Wnt信号通路抑制剂LGK974通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间Wnt信号通路抑制剂后，对斑马鱼尾鳍面积进行测量，观察尾鳍再生的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体轴发育表型图

黑色箭头所指为缺失的尾鳍

可以看到，服用Wnt信号通路抑制剂组的体轴长度较正常对照组明显变短。 

图2. 斑马鱼尾鳍再生表型图

红色区域为向尾鳍再生部位

可以看到，服用Wnt信号通路抑制剂组的斑马鱼尾鳍再生面积相比模型对照组明显变小。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用Wnt信号通路抑制剂的体轴长度和尾鳍再生面积均小于正常对照组。

2.本实验证实了LGK974具有体轴发育和组织再生抑制作用，作用机制与抑制wnt信号通路相关。

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