细胞因子是在多种生物活动中发挥重要作用的必不可少的细胞分子，这些生物活动包括病毒感染、炎症、免疫和造血。细胞因子是由多种类型的细胞在对不同的刺激应答时产生。一种细胞因子基因的表达受其它细胞因子的调节。细胞因子基因表达的调控异常可以由染色体改变或由于引发表达机制激活或失活的病毒感染引起。因此检测细胞因子对理解这些生物活动有重要作用。美国Signosis公司人8种细胞因子复合酶免试剂I可同时检测8种细胞因子：VEGF、EGF、IL-6、Resistin、PAI-1、IL-12、IL-13和 Eotaxin。该试剂板条的每孔包被有抗特定细胞因子的特异抗体，板条上的8个孔可测定8种不同的细胞因子抗体。二个样品中细胞因子的差异可通过数据比较加以测定。 　　A. 优点: 　　· 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种细胞因子 　　· 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 　　· 差别定量---不同于膜芯片方法，样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外， EA-1082为做标准曲线提供标准品。 　　· 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法，勿需贵重仪器 　　· 操作简单---一12x 8孔预包被板的完整操作系统. 　　B. 原理 　　板条每个孔包被有针对细胞因子的特异抗体，8个孔包被有8种不同抗体，一个板条8个孔可测定8种不同蛋白质。待测样品中的细胞因子在固相抗体和酶标记抗体之间，可与二个抗体组成的抗体对反应。孵育后，洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。 450 nm处测定吸光值进行定量。

　　受体酪氨酸激酶(RTKs)在把信号从细胞外转至细胞内的过程中发挥重要作用。人类基因组上共计有58种RTKs。RTKs与某种生长因子、细胞因子或激素结合后被激活，导致自身的磷酸化。酪氨酸自身的磷酸化产生含有SH2信号蛋白传递的补充位点。与含有不同SH2结构域信号蛋白的结合代表了不同信号通路的激活。因此信号通路的激活通过检测SH2结构域的结合来评价。比较二个样本的SH2结构域结合可以促进发现信号通路的差异。 　　A. 优点: 　　· 多种复合--- 一次试验可测定RTK与46种SH2结构域的相互作用 　　· 差别定量--- 在与SH2结构域相互作用的各个蛋白的差别，可以定量比较。 　　· 操作简单--- 步骤简单如同ELISA 　　B. 原理 　　基于SH2结构域的RTK检测试剂是一种类似ELISA方法的检测。SH2结构域被固相化在微孔板上。生物素化标记的phosphotyrosine抗体以及亲和素辣根酶结合物检测。46个孔包被了46种不同的SH2结构域，因此可检测46种的结合。96孔板可以检测2份样品。待测样本可同时与结构域和抗体结合。孵育后，洗涤板孔除去未结合的抗体。 加入HRP底物TMB，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。450 nm处测定吸光值。

　　肌红蛋白是一种血红素蛋白，存在于心肌和骨骼肌，携带氧气。肌肉受损时，如心脏病发作，大量的肌红蛋白释放，造成血液水平迅速上升。肌红蛋白是上升超过正常水平的第一个标志物之一。肌红蛋白水平在心脏病发作后2-4个小时内超过基线水平，9-12个小时达到高峰，24-36个小时回到基线水平。在没有骨骼肌损伤或其它非心脏病引起的循环肌红蛋白增加时，其水平可用做早期心肌梗塞的标志。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对肌红蛋白的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理 　　肌红蛋白试剂为固相酶免法。方法采用抗肌红蛋白的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗肌红蛋白抗体做检测抗体，待测样品中的肌红蛋白可同时与捕获抗体和标记抗体反应。孵育后，洗去未结合的标记抗体。加入HRP底物TMB产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。肌红蛋白的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。

　　pTF-Luc报告载体是一系列用于定量测定细胞内转录活性构建的载体。每个载体含有cis因子(DNA结合序列)— 一种最小的启动子，荧光素酶基因。当TF激活，其与cis因子结合，导致诱导荧光素酶基因的表达。因此荧光素酶活性代表TF的活性。 　　A. 优点: 　　TF荧光素酶报告载体具有下列优点： 　　· 功能性检测---功能性方法检测TF的活性 　　· 定量分析---TF活性通过通过荧光素酶基因表达加以测定 　　· 稳定的细胞系---载体可被用于建立表达报告体的稳定细胞系 　　B. 原理 　　TF靶向TATA启动子上游的结合位点，诱导荧光素酶基因的表达，产生荧光素酶活性。通过比较2份样品荧光素酶的活性，TF上调还是下调可以定量测定。

　　MicroRNAs (miRNAs)是非编码的小RNA分子，调控30%哺乳动物基因的表达。人染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。MiRNAs异常表达与人的癌症有关。系统检测miRNA的表达显示出癌症独有的特点，比较一组miRNA的表达显示不同的癌症是有区别的。美国Signosis公司肿瘤miRNA芯片专注于检测与癌症相关的miRNAs。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点： 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大(2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。 所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但是这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两条引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后，经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司的癌miRNA芯片试剂测定132个最有影响的的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。(详见：http://www.zhongzhibio.com/kysj/590.htm )

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要性。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 到目前为止，人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。人miRNA芯片检测试剂III可检测132种miRNA。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一条DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片II试剂测定72个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　细胞因子是信号分子，在细胞生长、分化、基因表达、迁移、免疫和炎症的许多生物过程中发挥重要的作用。细胞因子由细胞分泌，与细胞表面受体结合，激活细胞信号传导通路，传递细胞间的讯息。细胞因子的功能异常导致许多疾病，如关节炎、急慢性肝病、肠炎、心脏相关疾病。许多细胞因子常常涉及一种生物学或疾病过程。因此全面分析多种细胞因子的表达可以有效揭示疾病的潜在机制。人细胞因子微孔板阵列试剂以高通量的方式同时监测31种人类细胞因子，该方法快速敏感的同时定量检测不同样本多种细胞因子的水平。 　　A. 优点: 　　· 多重复合—— 一次试验可同时测定4份样品的23种细胞因子 　　· 敏感性高——只需少量样本 　　· 勿需贵重仪器——与珠式方法不同，不需要贵重仪器 　　· 操作简单——试剂盒包括预包被板等所有组分 　　B. 原理： 　　96孔白板分成3个区，每个区有4列，每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔，1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育，捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测，待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后，洗涤除去未接合的标记抗体，加入酶及化学发光底物，用微孔板化学发光检测仪测定发光度值，每种特异的细胞因子表达水平与发光强度成正比。 　　A. 优点: 　　· 多重复合—— 一次试验可同时测定4份样品的23种细胞因子 　　· 敏感性高——只需少量样本 　　· 勿需贵重仪器——与珠式方法不同，不需要贵重仪器 　　· 操作简单——试剂盒包括预包被板等所有组分 　　B. 原理： 　　96孔白板分成3个区，每个区有4列，每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔，1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育，捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测，待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后，洗涤除去未接合的标记抗体，加入酶及化学发光底物，用微孔板化学发光检测仪测定发光度值，每种特异的细胞因子表达水平与发光强度成正比。

　　细胞因子是信号分子，在细胞生长、分化、基因表达、迁移、免疫和炎症的许多生物过程中发挥重要的作用。细胞因子由细胞分泌，与细胞表面受体结合，激活细胞信号传导通路，传递细胞间的讯息。细胞因子的功能异常导致许多疾病，如关节炎、急慢性肝病、肠炎、心脏相关疾病。许多细胞因子常常涉及一种生物学或疾病过程。因此全面分析多种细胞因子的表达可以有效揭示疾病的潜在机制。人细胞因子微孔板阵列试剂以高通量的方式同时监测31种人类细胞因子，该方法快速敏感的同时定量检测不同样本多种细胞因子的水平。 　　A. 优点: 　　· 多重复合—— 一次试验可同时测定3份样品的31种细胞因子 　　· 敏感性高——只需少量样本 　　· 勿需贵重仪器——与珠式方法不同，不需要贵重仪器 　　· 操作简单——试剂盒包括预包被板等所有组分 　　B. 原理： 　　96孔白板分成3个区，每个区有4列，每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔，1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育，捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测，待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后，洗涤除去未接合的标记抗体，加入酶及化学发光底物，用微孔板化学发光检测仪测定发光度值，每种特异的细胞因子表达水平与发光强度成正比。

　　细胞因子是不同细胞类型产生的细胞外信号蛋白，其作用于靶细胞，调节靶细胞多种细胞功能，如吸引特定类型的细胞到炎症部位，增加免疫细胞活性和生存期，抑制细胞反应。 炎症是对组织损伤的反应。 在急性和慢性炎症过程中，多种可溶性因子参与细胞浸润、细胞激活和炎症的全身反应。 细胞因子是炎症反应的主要方式。 多数细胞因子是以自分泌或旁分泌的方式作用于局部或全身的多功能分子。 细胞因子进入的广泛网络，具有协同性和对抗性相互作用，对各种靶细胞发挥着负性的和正性的调节作用。 所以，描述细胞因子的表达方式为观察潜在的免疫机制提供可贵的视角。美国Signosis 炎症细胞因子复合酶免法平行检测试剂可定量测定和描述8种细胞因子：TNFa, IFNr, G-CSF, GM-CSF, IL-1a, IL-8, IP-10, and Rantes. 　　A. 优点: 　　· 多种复合---单一板条可同时测定8种肥胖症生物标记物 　　· 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 　　· 差别定量---不同于膜芯片方法，样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外， EA-1032为做标准曲线提供标准品。 　　· 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法，勿需贵重仪器 　　· 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理 　　板条每个孔包被有针对炎症细胞因子的特异抗体，8个孔包被有8不同抗体，一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应，肥胖症生物标记蛋白夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后，洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。 炎症细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。 450 nm处测定吸光值进行定量。

　　干扰素(IFNs)是宿主防御和体内平衡的细胞外蛋白强的介导剂。 它们是免疫系统细胞产生的细胞因子，对外源物如病毒、寄生虫的入侵进行应答。 它由各种细胞产生，以应对双链核糖核酸出现，双链核糖核酸是病毒感染的一个关键指示物。 IFNs分成二主要亚群。 I型 IFNs所有的都与I型 IFN受体结合，例如IFN-a和IFN- b。 IFN-r是单一的II 型IFN，结合不同的II型受体。几乎所有类型细胞产生I型IFNs，而II型 IFN-r由T细胞和在免疫刺激的自然杀伤细胞(NK) 产生。 IFN-r通过免疫相关基因的转录调节来协调不同的细胞程序。 IFN-r的细胞作用包括病原生物识别，抗原加工和呈递、抗病毒状态、抑制细胞增殖和作用于凋亡，活化杀微生物效应器的功能，免疫调节和白细胞运输。 　　A. 优点： 　　· 性价比高---高质量，低价格。 　　· 高效灵活---多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量。 　　· 特异性强---优选高度特异的针对人IFN-r的配对抗体。 　　· 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. 　　B. 原理： 　　IFN-r试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人IFN-r抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的兔抗人IFN-r抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测， 待测样品IFN-r夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物，产生蓝色反应， 加入终止液后转成黄色。IFN-r的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450 nm处测定吸光值进行定量。