人体皮肤逐渐衰老的重要原因是活性氧自由基对皮肤的长期氧化作用，具有抗氧化活性的化妆品能够清除皮肤表面自由基，通过斑马鱼技术可以有效评价化妆品及其原料清除自由基的能力。【评价原理】甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应，通过斑马鱼卵黄囊荧光强度评价供试品抗氧化作用。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成若干组，含正常对照组、模型对照组和化妆品组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组和化妆品组都加入等量的甲萘醌（甲萘醌通过溶解到标准稀释水中的方式摄入到斑马鱼体内）。化妆品组在加入甲萘醌的同时加入一定浓度的化妆品。使用化妆品24 hpf后，，我们对斑马鱼整体进行特异性荧光染色，观察斑马鱼卵黄囊活性氧自由基产生情况。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 斑马鱼卵黄囊荧光表型图黄色为分析区域，绿色荧光代表氧自由基可以看到，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。【评价结论】1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。2.本实验证实了该化妆品具有抗氧化的作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

皮肤亮白是东方女性一直以来对美的直观追求，因此美白类化妆品成为了市场的宠儿。人体皮肤变黑的主要原因是酪氨酸酶的存在促进了黑色素的合成和黑色素基因的表达，而在斑马鱼皮肤上也有类似的表达过程，因此，可以通过斑马鱼技术有效评价化妆品的美白功效。【评价原理】斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长。色素细胞起源于背部外胚层分化的一群细胞—神经嵴细胞，然后增殖、迁徙、分化成色素母细胞。在黑色素形成的过程中进行干预，可抑制黑色素的形成。【实验方案】我们将斑马鱼分成若干组，含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组使用受试化妆品，孵育48 hpf后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度，从而评价其美白功效。此外，将斑马鱼进行匀浆处理，分别提取其中的酪氨酸酶和黑色素蛋白，进行OD值测定，通过酪氨酸酶活性和黑色素蛋白的含量反映化妆品的美白功效。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 斑马鱼头部黑色素表型图（蓝色为分析区域）阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析，得出美白功效作用。图2 斑马鱼酪氨酸酶活力与正常对照组比较，**p<0.01供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性显著降低。图3 斑马鱼黑色素蛋白含量与正常对照组比较，***p<0.001供试品组与正常对照组相比，黑色素含量显著降低。【评价结论】1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素。2.经过对斑马鱼进行匀浆和蛋白质提取处理，可见供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性和黑色素蛋白含量均减少。3.本实验证实了该化妆品具有美白的作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

随着年龄的增长，人体皮肤因自身生理调节和外界因素的作用而逐渐出现雀斑、日晒斑、黄褐斑等色斑，色斑的形成与皮肤中黑色素的沉着有关，祛斑功效实质上是对黑色素的清除作用。通过班斑马鱼技术能简洁而有效的评价化妆品的祛斑功效。【评价原理】斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长，48h逐渐形成稳定并可见的黑色素色斑。将受试物于斑马鱼发育48h时加入鱼水中，72h时观察黑色素的降低程度，从而评价祛斑功效【实验方案】我们挑选2dpf的斑马鱼分成若干组，含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组使用受试化妆品，孵育24hpf后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度，从而评价其祛斑功效。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 斑马鱼头部黑色素表型图（蓝色为分析区域）阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析，得出祛斑功效作用。【评价结论】1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素。2.本实验证实了该化妆品具有祛斑作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

一、促进组织再生功效评价【评价原理】机械损伤将产生皮肤组织的结构性破坏，斑马鱼尾鳍具有自我再生功能，通过对尾鳍再生速度的观察可以评价受试物促进组织再生功效。【实验方案】将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍，从而完成造模处理，供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后，将各组斑马鱼在体视显微镜下拍照并保存图片，用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍面积进行定量分析，以尾鳍面积的增量评价受试化妆品促进组织再生功效。【结果展示】斑马鱼尾鳍面积图1. 斑马鱼尾鳍面积表型图红色区域为分析区域可以看到，孵育相同时间后，供试品组斑马鱼尾鳍面积明显大于模型对照组，说明该化妆品具有促进组织再生功效。【评价结论】1.经过斑马鱼对比实验，供试品组与模型对照组相比，斑马鱼尾鳍面积明显增加。2.本实验证实了该化妆品具有促进组织再生功效。二、促进伤口愈合（抗炎）功效评价【评价原理】斑马鱼幼鱼的再生能力非常强大：切断尾鳍后，伤口立即紧缩、上皮细胞覆盖，数小时内便出现炎症反应，伤口处中性粒细胞的数量可以反映炎症反应的程度。转基因中性粒细胞荧光斑马鱼的中性粒细胞可在荧光显微镜下被明显观察，因此可以通过实时观察斑马鱼伤口附近的中性粒细胞数量评价受试物的抗炎功效。【实验方案】将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍，从而完成造模处理，供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后，将各组斑马鱼在荧光显微镜下拍照并保存图片，用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍损伤部位的中性粒细胞进行计数，以中性粒细胞相比于模型对照组的减少量评价受试化妆品促进组织再生功效。此外，可通过Q-PCR检测IL-1β、IL-6和IL-10等炎症因子的表达，通过相关炎症因子表达量的降低评价受试化妆品的抗炎功效。【结果展示】1、尾鳍损伤部位中性粒细胞（推荐）图2 斑马鱼尾鳍中性粒细胞表型图黄色虚线区域为计算区域，绿色荧光点为中性粒细胞可以看到，供试品组斑马鱼的中性粒细胞数目比模型对照组明显减少。2、炎症因子的表达量（提供柱状图）【评价结论】1.经过各组斑马鱼的对比实验，水溶给予供试品组的斑马鱼中性粒细胞数目及炎症因子的相对表达量与模型对照组相比明显减少。2.本实验证实了该供试品具有促进伤口愈合（抗炎）功效。三、促进疤痕淡化【评价原理】    冰乙酸对皮肤伤口具有一定的损伤作用，斑马鱼皮肤表面被注射冰乙酸后，伤口部位将出现色素的聚集，口修复过程中色素含量逐渐减少。通过观察对伤口部位的色素含量的减少量可以评价受试物对伤口的愈合作用。【实验方案】将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用注射方式在斑马鱼躯干部位定量注射冰乙酸，受试化妆品以一定浓度水溶添加到供试品组中。各实验组在避光条件下孵育一段时间后，在显微镜下拍照保存图片，用高级图像处理软件分析斑马鱼伤口部位色素的不透光总和，计算供试品组相对于模型对照组的色素减少量，从而评价受试化妆品的促进伤口愈合功效。【结果展示】图3 斑马鱼躯干色素表型图可以看到，供试品组斑马鱼躯干部位的色素含量比模型对照组明显减少。【评价结论】1.经过各组斑马鱼的对比实验，水溶给予供试品组的斑马鱼躯干部位色素含量与模型对照组相比明显减少。2.本实验证实了该供试品具有促进疤痕淡化功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

肤色暗沉是体内外多种因素共同作用的结果，其中重要的一种因素是由活性氧自由基引起的氧化应激反应，导致皮肤色素沉着，看上去黯淡无光。通过斑马鱼技术能有效评价化妆品提亮肤色的功效作用。【评价原理】甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应,最终导致皮肤色素沉着。用甲萘醌处理后的斑马鱼，被供试品作用后，在白光条件下分析皮肤局部亮度，通过亮度的增加程度反映受试物提亮肤色的功效。【实验方案】我们将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组用甲萘醌处理，供试品组用甲萘醌处理后再用供试品处理，孵育一定时间后，对斑马鱼进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马卵黄囊部分的色素信号强度，从而评价其提亮肤色功效。【结果展示】图1. 斑马鱼卵黄囊色素表型图（红色为分析区域）【评价结论】1.经过各组斑马鱼对比实验，供试品组与模型对照组对比，斑马鱼卵黄囊部分的色素明显降低，亮度增加。2.本实验证实了该供试品具有提亮肤色的功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

皮肤组织中由于存在胶原蛋白、弹性蛋白等多种蛋白成分而具有一定的弹性，皮肤弹性是衡量皮肤健康与否的重要标志，很多针对熟龄肌的化妆品是由于提高了皮肤弹性而具有抗衰老功效。通过斑马鱼技术能有效评价化妆品增加皮肤弹性的功效。【评价原理】通过检测皮肤弹性相关基因的相对表达量（皮肤胶原蛋白col1a1a、col1a1b、col1a2基因）来表明样品是否具有增加皮肤弹性作用。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成若干组，含正常对照组和化妆品组。其中正常对照组未经任何处理，化妆品组添加受试化妆品。使用化妆品24 hpf后，我们对每组斑马鱼进行收样，使用试剂盒提取RNA后，使用q-PCR检测目的基因的转录水平，通过斑马鱼皮肤胶原蛋白基因相对表达量评价化妆品增加皮肤弹性作用。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 斑马鱼体内col1a1b基因相对表达量可以看到，化妆品高浓度组的col1a1b相对表达量较正常对照组显著增加。【评价结论】1.经过各组斑马鱼和两组平行对照的对比实验，化妆品高浓度组的col1a1b相对表达量较正常对照组显著增加。2.本实验证实了该化妆品具有增加皮肤弹性的作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。当生物暴露在环境污染物中，生物可能会发生氧化应激，主要表现为活性氧（ROS）产生和消耗的不平衡。在需氧生物的活细胞中，活性氧被一种由水和脂溶性低分子量自由基清除剂、特异性抗氧化酶组成的抗氧化防御机制解毒。 应用ROS特异性荧光检测试剂，它的水解产物能被ROS氧化为高荧光物质，用多功能酶标仪检测荧光值反映氧化应激的程度。本方法已被授予国家发明专利。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是底物对照组、正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内），并加入ROS特异性荧光检测试剂。服用供试品一段时间后，我们使用酶标仪对斑马鱼体内ROS进行荧光定量。【结果展示】图1. 斑马鱼体内ROS荧光值可以看到，服用供试品组斑马鱼体内荧光值比正常对照组有明显升高。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的斑马鱼ROS水平明显高于正常对照组，与正常对照组存在显著性差异。2.本实验证实了该供试品诱发斑马鱼氧化应激。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼成鱼体长5 cm左右，其胚胎透明，在受精72 h后完成孵化，并在孵出后3个月内性成熟。成年斑马鱼的繁殖周期短(一般7 d左右)，若条件适宜，成年雌性斑马鱼可定期产卵(每次200～300个)。在斑马鱼的早期胚胎及幼体的发育过程中，尚无性别分化，原始性腺都是相同的且具有双向发育的潜能，易受环境(温度、光照、pH值等)因素的影响而改变其遗传性别。对于雌性斑马鱼而言，产卵量是评价其繁殖力的常用生物指标，它与鱼类繁殖过程中的多个环节（卵子发育、雌雄交配行为、性激素刺激等）相关，并对环境化学物质具有高敏感性，能直接反应鱼类繁殖力变化。环境化学物质除了直接对亲代斑马鱼的生殖系统造成损害，还可能对其子代的正常生长发育。卵黄蛋白原在斑马鱼雌鱼成熟过程中发挥重要作用，成熟雌鱼在体内17β-雌二醇的刺激下，由肝脏合成的VTG经过血液到达卵巢并加工成卵黄蛋白，促进性腺发育。幼鱼和雄鱼在正常情况下不合成VTG,但在受到雌激素和类雌激素刺激时能合成VTG，导致鱼体内VTG浓度升高，出现雌性体征。鱼类的性腺发育和繁殖行为受到下丘脑-垂体-性腺轴（HPG 轴）的调控。下丘脑分泌促性腺激素释放激素（GnRH），其作用于脑垂体，刺激其分泌促黄体生成素（LH）和促卵泡素（FSH），这两种激素通过血液循环与相应的受体结合后作用于性腺，刺激性腺产生睾酮（T）、17β-雌二醇（E2）和 11-酮基睾酮（11-KT） 等类固醇激素，进而促进精子和卵子的发育和成熟。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，进行21天的暴露实验，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间供试品后，观察每次的产卵量、受精率及孵化率；对受精卵进行子一代发育毒性与致畸性评价。在实验终点取斑马鱼的组织，检测卵黄蛋白原（VTG）含量及相关基因表达，并对性腺进行病理组织学检查，指标主要包括：睾丸卵母细胞、睾丸间质细胞增生、卵黄形成减少、精原细胞和滤泡增生；其他性腺损伤包括：卵母细胞闭锁、睾丸变性和分期改变。【结果展示】图1. 供试品对斑马鱼体内卵黄蛋白原（VTG）的影响可以看到，供试品组VTG有下降趋势，但与正常对照组比较没有显著性差异。 图2. 斑马鱼发育毒性与致畸性表型图可以看到，供试品组斑马鱼诱发眼睛变小，下颌异常，心血管毒性等。 图3. 斑马鱼性腺病理切片可以看到，供试品组斑马鱼精巢精子量变少，卵巢中卵母细胞体积变小、数量减少 。图4. 供试品对斑马鱼基因表达的影响可以看到，供试品组FSHβ、LHβ基因相较于正常对照组显著表达。【评价结论】1.经过各组斑马鱼的对比实验，摄入供试品组的斑马鱼体内VTG有下降趋势，子一代斑马鱼有致畸性，性腺病理切片有不同程度的异常，与性腺发育和繁殖行为相关基因的上调。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有生殖毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】OECD近年大力推崇的“有害结局路径”（Adverse Outcome Pathway，AOP）毒性评估策略来测试类雌激素这一大类有害物质。本方法参照粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO，2000）关于类雌激素物质最高日摄取量来评估测试物的安全性，通过转基因标记技术表达的绿色荧光蛋白含量来量化类雌激素物质含量，绿色荧光蛋白特异性地在肝脏表达，一旦供试品中含一定量的类雌激素化学物质，雌激素转基因斑马鱼暴露后肝脏部位会出现绿色荧光，可用绿色荧光量化供试品中的类雌激素物质含量，从而达到检测效果。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼肝脏荧光。【结果展示】图1.含类雌激素物质的供试品处理后斑马鱼荧光表型图黄色曲线部位为肝脏，绿色荧光量化类雌激素含量可以看到，摄入供试品组肝脏部位有明显的绿色荧光。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，摄入含类雌激素物质的供试品组斑马鱼肝脏荧光明显，与正常对照组存在明显差别。2.本实验证实了该供试品含有类雌激素物质。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】目前国际上公认的药物毒性与安全性评估实验方法分为体外与体内实验2种。斑马鱼实验为整体动物研究，能反映化合物吸收、分布、代谢与排泄的过程。而且，斑马鱼与人类基因组的相似度高达87%，有与人类近似的毒性特征和信号传导通路，斑马鱼的各种器官和组织在解剖学、生理学和分子水平上类似于哺乳动物，因此是一种可比性较强的模式生物，可以用于各种类型供试品的急性毒性评价。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性发生率。【结果展示】图1. 斑马鱼胚胎毒性表型图可以看到，服用/注射供试品组的眼变小、心包水肿、肝脏变性、卵黄囊吸收延迟、肾性水肿、胃肠道发育延迟。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的组织器官产生明显的急性毒性表型，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有急性毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼胚胎在母体外发育，从合子期到孵化期仅72小时，且发育的完整过程均是透明的，利于实时观察和检测。斑马鱼幼鱼长3~4毫米，拥有6-384孔板的高通量检测体系，可实现低费-高效筛选。斑马鱼与人类基因同源性达到87%，用于保健食品的体内快速评价实验结果可比性强。故可以利用斑马鱼早期各个阶段的发育形态，准确高效的确定保健食品暴露在胚胎中的毒性，广泛应用于保健食品的发育毒性与致畸性研究。实验结束后，在显微镜下观察并记录各浓度组织器官反应及死亡情况，用来保健食品对斑马鱼的毒性，并对典型毒性器官进行拍照。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和保健食品组。其中正常对照组为标准稀释水处理组，保健食品组按照既定浓度摄入了不同浓度的待测保健食品（待测保健食品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。在保健食品暴露过程中，每天观察记录各个浓度组斑马鱼的死亡情况，并及时挑除死鱼。实验结束后，统计斑马鱼死亡情况并使用OriginPro 8软件拟合数据曲线，获得保健食品的最大非致死浓度（MNLC）和LC10。保健食品暴露一段时间后，我们在显微镜下观察记录斑马鱼身体各个指标的情况并对典型毒性器官进行拍照。【结果展示】图1. 斑马鱼发最大非致死浓度（MNLC）和LC10摸索数据拟合图可以看到，该保健食品的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL。图2. 斑马鱼发育毒性与致畸性表型图H=Heart;J=Jaw;In=Intestinal tract;L=Liver;Y=Yolk sac;E=Eye可以看到，保健食品组较正常对照组出现卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。【评价结论】1.该保健食品的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL，诱发斑马鱼卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。2.本实验证实了该保健食品对斑马鱼有发育毒性与致畸性风险。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。通过环特生物剂量换算公式，将人每日推荐服用剂量换算为斑马鱼使用浓度进行安全性评价,梯度设置浓度进行安全性评价。服用一段时间供试品后，我们观察斑马鱼各组织脏器的表型。【结果展示】图1. 斑马鱼毒性表型图J：下颌；E:眼；H：心脏；L：肝脏；In：胃肠道；Y：卵黄囊可以看到，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品组未见明显异常，服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品组诱发斑马鱼肝脏变性和卵黄囊吸收延迟。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品未诱发斑马鱼明显毒性表型，与正常对照组斑马鱼类似；服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品诱发斑马鱼明显的肝脏毒性表型。2.本实验证实了在短期服用中，该供试品应限量使用，否则会出现安全性风险。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。通过环特生物剂量换算公式，将人每日推荐服用剂量换算为斑马鱼使用浓度进行安全性评价。服用一段时间供试品后，我们观察斑马鱼各组织脏器的表型。【结果展示】图1. 斑马鱼毒性表型图J：下颌；E:眼；H：心脏；L：肝脏；In：胃肠道；Y：卵黄囊可以看到，服用人每日推荐服用剂量的供试品组未见明显异常。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用人每日推荐服用剂量的供试品组未诱发斑马鱼明显的毒性表型，与正常对照组斑马鱼相似。2.本实验证实了在短期服用时，该供试品以人每日推荐服用剂量使用并未诱发安全性风险。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼皮肤结构与功能与人类高度相似，斑马鱼皮肤含有基底层、棘层、颗粒层、透明层和表皮角质细胞层；另外尚有与人皮肤结构相同的固有层、半桥粒、黑色素细胞、血管和皮下脂肪细胞等。斑马鱼皮肤间质结缔组织、胶原及其临近的纤维母细胞及皮肤基因表达亦与人类皮肤相似。我们评价斑马鱼皮肤肌肉毒性有4个指标：1.皮肤刺激；2.肌肉纹理；3.皮肤凋亡细胞定量；4.皮肤色素变化。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。皮肤吸收供试品一段时间后，我们通过中性粒转基因荧光斑马鱼，观察皮肤/肌肉刺激性；通过表型拍照，观察肌肉纹理及皮肤色素变化；通过AO染色凋亡细胞，观察皮肤细胞凋亡情况。【结果展示】图1. 斑马鱼皮肤刺激性典型图片可以看到，供试品组皮肤/肌肉可见明显中性粒细胞聚集。图2. 斑马鱼皮肤损伤典型图片可以看到，供试品组可见明显肌肉纹理不清晰。图3. 斑马鱼凋亡细胞表型图可以看到，供试品组尾部可见明显凋亡（绿色荧光亮点）。图4. 斑马鱼皮肤色素异常表型图可以看到，供试品组躯干可见明显色素异常（黄色虚线区域）。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，供试品组的斑马鱼皮肤肌肉产生明显的毒性表型（包括肌肉纹理异常和色素异常），在斑马鱼尾部可见明显的凋亡细胞，在躯干部可见明显的中性粒细胞聚集。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有皮肤肌肉毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能，包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。而且斑马鱼幼鱼通体透明，血细胞在心脏和血液循环系统的堆积非常容易观察，因而利用斑马鱼模型研究心血管毒性极为方便。我们评价斑马鱼心血管毒性有4个指标：1.心率；2.心节律；3.心包水肿面积；4.静脉瘀血面积。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼的心脏进行观察评价。【结果展示】图1. 斑马鱼心血管毒性表型图红色虚线框内为心脏可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有心血管毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，斑马鱼肝脏中有许多与哺乳动物同源的脂质代谢酶，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。而且斑马鱼幼鱼通体透明，容易观察到毒性表型。我们评价斑马鱼肝脏毒性有4个指标：1.肝脏面积；2.肝脏变性程度；3. 卵黄囊吸收延迟的发生率（卵黄囊是脂肪，卵黄囊吸收与肝功能密切相关）；4. 肝脏病理切片。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们观察斑马鱼肝脏及卵黄囊表型，同时制作成病理切片观察肝脏的病理结构变化。【结果展示】图1. 斑马鱼肝脏毒性表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼肝脏肿大、变性、卵黄囊吸收延迟。图2. 斑马鱼肝脏病理切片绿色箭头指向红细胞淤积从病理切片中可见，正常对照组肝组织结构规则，肝细胞形态完整，细胞质均匀，细胞核呈规则圆形，位于细胞中央；服用/注射供试品组的斑马鱼肝脏红细胞淤积严重，细胞肿胀现象严重，细胞核萎缩变形，位于细胞边缘，局部可见炎性浸润，坏死。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼肝脏产生明显的毒性表型且组织病理学改变，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有肝脏毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的胃肠道在细胞功能和解剖学方面均与人类相似，由内皮细胞、结缔组织、外纵肌和环状肌组成。胚胎发育至26～126 hpf( hours post fertilization，受精后小时)，斑马鱼胃肠道的管腔形成并不断生长，形成有功能的肠道上皮。在未喂食情况下，斑马鱼胚胎受精约72 hpf，肠道首次出现不稳定的自发收缩。伴随着发育的进行，第120～144 hpf，斑马鱼大部分的卵黄囊被吸收，肠道自发的蠕动及摄食能力增强。我们评价斑马鱼胃肠道毒性有2个指标：1.胃肠道形态的变化；2.肠蠕动功能抑制。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入供试品之前提前给予食物，摄入供试品一段时间后，我们观察斑马鱼肠道表型。服用一段时间供试品后，我们观察胃肠道形态及内容物的情况。【结果展示】图1. 斑马鱼胃肠道形态表型图可以看到，服用/注射供试品组可见明显肠褶皱缺失、肠腔异常等。图2. 斑马鱼肠蠕动功能抑制表型图可以看到，斑马鱼给予食物后，食物充盈肠道。服用/注射供试品组食物明显多于正常对照组，表明肠蠕动功能被抑制。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼胃肠道形态与正常对照组比较，发生了明显的变化，且肠道蠕动功能被抑制。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有胃肠道毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼肾脏的肾小球具有与高等脊椎动物肾脏同样的细胞组成，同样的血液滤过、肾小管重吸收功能，一旦肾功能损伤或缺失，斑马鱼就会因无法调节渗透压而产生严重的水肿，同时可能导致肾小球滤过功能下降。因此，我们可以用两种方法评价肾脏毒性：1. 肾性水肿发生率。由于斑马鱼通体透明，肾性水肿可以明显的被观察到。2. 肾小球滤过率。我们可以对斑马鱼注射一种荧光标记物，一段时间后，正常斑马鱼可将荧光标记物排出体外，而肾小球滤过功能损伤的斑马鱼则不能，通过荧光标记物排泄的情况可以反应斑马鱼肾脏的功能。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼表型进行观察评价，统计肾性水肿发生情况【结果展示】图1. 斑马鱼肾脏毒性表型图可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼出现了明显的肾性水肿的表型。图2. 斑马鱼肾小球滤过率典型图可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼荧光强度明显强于正常对照组，标记物排泄明显减少，肾小球滤过率下降，肾脏功能受损。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼有明显的肾性水肿和肾小球滤过率明显下降，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验说明该供试品对斑马鱼有肾脏毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】药物骨毒性的安全性研究与肝、肾、心脏毒性等一般毒性相比较为薄弱，尤其是儿科人群用药的骨毒性安全问题，骨毒性非临床安全性评价愈加受到重视。斑马鱼是一种与人类同源性较高的脊椎动物，和哺乳动物一样，斑马鱼的骨骼是从3种胚胎干细胞系即神经嵴、体节中胚层和侧板发育而来的。斑马鱼骨骼经过特异性的荧光染色后，经荧光显微镜采集到荧光强度能反映出骨密度和脊椎骨的数量，从而评价供试品骨毒性。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射供试品一段时间后，我们对斑马鱼整体做骨钙染色，以脊椎骨荧光强度和脊椎骨数量评价供试品的骨毒性。【结果展示】图1. 斑马鱼骨密度表型图黄色虚线区域为计算用脊椎骨可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脊椎骨荧光强度明显减弱。图2. 斑马鱼脊椎骨数量表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脊椎骨数量明显减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼脊椎骨荧光强度明显减弱、数量明显减少，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有骨毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】免疫毒性是指化合物对机体免疫系统的损伤作用，包括两类，一是免疫抑制，即免疫系统的广泛抑制，可致机体对感染的易感性增加及肿瘤发生率增高；另一是免疫增强，即免疫系统反应性过度增强，可能包括免疫性产生，过敏反应（超敏反应或变态反应）、自身免疫反应以及不良免疫刺激等。斑马鱼具有先天免疫系统和获得性免疫系统，与果蝇和线虫模型相比，斑马鱼的免疫系统发育的更完整。研究证实斑马鱼与哺乳动物一样，具有T细胞、B细胞、自然杀伤细胞，其免疫系统对于环境中的免疫毒性物质（包括哺乳动物）非常的敏感。免疫毒性指标有3个：（1）应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，观察中性粒细胞数量；（2）应用转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，观察巨噬细胞数量（荧光强度）；（3）注射红色荧光微球，巨噬细胞吞噬微球排出体外，用体内微球的数量反映巨噬细胞吞噬功能。（4）检测T/B相关基因（rag1和rag2）表达。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成二组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射供试品一段时间后，我们对斑马鱼检测中性粒细胞和巨噬细胞计数、巨噬细胞吞噬功能和T/B相关基因（rag1和rag2）表达。【结果展示】（1）中性粒细胞数量 图1. 斑马鱼中性粒细胞表型图绿色小点为中性粒细胞可以看到，服用供试品组斑马鱼体内中性粒细胞数量比正常对照组明显减少。（2）巨噬细胞数量图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图可以看到，服用供试品组斑马鱼体内巨噬细胞数量比正常对照组明显减少。（3）巨噬细胞吞噬功能图3. 斑马鱼巨噬细胞表型图可以看到，服用供试品组的吞噬颗粒的巨噬细胞数量与正常对照组比较有明显减少，说明巨噬细胞吞噬功能下降。（4）T/B相关基因表达（rag1和rag2）图4. 斑马鱼rag1和rag2表达左图为rag1基因相对表达量，右图为rag2基因相对表达量可以看到，服用供试品组的rag1和rag2相对表达量与正常对照组比较均有减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的中性粒细胞和巨噬细胞数量与正常对照组比较均有减少，其巨噬细胞吞噬功能有所下降，且rag1和rag2相对表达量减少。2.本实验证实了该供试品具有免疫毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）