液相维护常见问题

一、流动相

（1）溶剂的过滤：目的是为了防止固体颗粒损伤液相系统（譬如比例阀、止回阀、管路和色谱柱的滤头等）。注意过滤水相和有机相应选用不同的滤膜。常用0.45um的滤膜，如果使用亚二微米颗粒色谱柱，建议使用0.22um的滤膜；纤维素膜主要用于水溶液；尼龙滤膜和PTFE（聚四氟）膜均是通用型滤膜。

（2）溶剂的脱气：目的是为了排除溶解在流动相中的空气（适用于RPC，正相色谱可选，长期用正相色谱的需要更换流路，不经过脱气机）。气泡会造成泵输出的问题，也能造成检测器的出现假的色谱峰。脱气方法有氦气脱气（适用于荧光、电化学、时差检测器）、真空脱气、管内脱气（在线脱气，液相的脱气机见附件1）回流加热脱气、超声脱气（最为常用）

（3）溶剂的更换：因为不干净的溶剂（长菌、溶剂中不溶物、乙腈的自聚）会阻塞溶剂过滤器，降低泵的性能。遵循下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：避免溶剂瓶直接日照、用滤膜过滤溶剂出去微生物、四氢呋喃（THF）醚类等有机溶剂应放在棕色瓶中，以防止光照变质、水也最好放置在棕色瓶中，以防长菌、注意定期更换和过滤溶剂，尤其水相或缓冲盐类流动相。

（4）避免的溶剂：避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：

卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液、高浓度的无机酸，例如硝酸和硫酸、能够形成卤素自由基或酸的卤化试剂及其混合物、在有机溶剂中有一定的有机酸的溶液、含有强烈络合剂的溶液、四氯化碳和异丙醇或四氢呋喃混合液、含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂、如果使用PEEK毛细管，还应注意尽量避使用二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃等有机溶剂。

二、泵的维护和保养

（1）检查purge阀滤芯：打开purge阀，泵流速为5ml/min，观察泵的排气压力，若超过10Bar，则及时更purge阀的滤芯。

（2） 更换泵头冲洗液：流动相为缓冲盐溶液和有机溶剂比例混合时，应设置泵头冲洗液（10%异丙醇水溶液）定时冲洗，减少盐溶液对活塞杆及柱塞密封圈的磨损。

（3）常见问题：

1、压力波动超过2%以上：排除气泡后一步步排查，流动相入口滤头、单向阀、泵的高圧密封圈、进样器的转子密封垫和针的底座、比例阀、脱气机等等

2、压力过高：一个字就是“堵”，可能原因有色谱柱进样口过滤芯被污染、冲洗阀过滤芯被污染、色谱柱被污染、连接管路的管线堵塞、进样器转子上的凹槽被堵赛、进样针或针座被阻塞，可以使用分段法来检查。

3、压力过低：一个字就是“漏”，可能原因有溶剂入口处过滤器堵塞、连接管路泄漏、主动阀失灵、单向阀失灵、色谱柱失效、四元比例阀失效。

三、自动进样器的维护和保养

（1） 自动洗针：设置以溶剂为洗针液的进样瓶，去掉瓶盖，设置进样前后洗针功能可以有效去除针外壁残留的样品。

（2） 转子密封垫的选择：标准密封垫为Vespel（聚酰亚胺）密封垫，pH耐受范围为2.3-9.5，当流动相pH低于2.3或高于9.5时，会降低Vespel密封垫的寿命，选择使用Tefzel（乙烯和四氟乙烯聚合）密封垫，其耐受更极端的pH范围的材料。

（3）常见问题：

1、 转子密封垫漏液：将排液的塑料管提起，当有液体流出，或当出现压力不稳，保留时间重复性差，残留严重，说明转子密封圈磨损，应及时更换。

2、 进样残留：一般出现进样残留问题是外壁残留更换洗针液即可。也有转子密封垫损坏的情况。

3、 进样报错：进样瓶或者进样盘放置位置不标准，这种情况容易引起进样针弯曲，出现针偏移需要调整后，重新校准进样针位置。排线或者感应器问题，更换排线或者感应器，更换后需校准进样器移动杆的位置。

4、 进样针问题：进样针需要用耐腐带涂层的，以防酸碱腐蚀性样品，进样针更换后需要校准位置

四、 柱温箱的维护和保养

（1）连接的管路尽量短，防止热扩散及峰增宽。

（2）使用流速小于0.2ml时，使用左边3ul、死体积小的柱温箱。

（3）柱温箱加热模块堵塞：将泵与柱温箱出口连接后，开泵反冲。

（4）常见问题：

1、控温不准：检查柱温箱门是否关严

五、检测器的维护和保养

在更换氘灯或钨灯后，应进行光强度测试；在更换流通池后应进行氧化钬测试及波长校准。如测试失败，需进行维修或更换。

（1）光强度测试：测定全波长范围内氘灯和钨灯的光强，用四个光谱范围来评价光强谱图，光强谱图会应灯、光栅、二极管阵列的不同而不同，因此不同仪器光强谱图会不同，测试会自动评估结果。

（2）波长校准：在流通池维护、灯更换或大修后（如更换主板或光路原件）需进行波长校准，使用氘灯发出的656nm和468nm射线进行波长校准，把增益设为零，在流通池中注入水进行试验。

（3）氧化钬测试：对内置的氧化钬滤光片的三个特征吸光度进行测试，进行精度确认，测试会自动评估结果。

（4）灯能量测试：进行测试时，流通池充满水，若里面有其他试剂或气泡会导致失败，测试会自动评估结果，一般检测器寿命为2000h，超过2000h后进行灯能量测试，若测试结果小于400mv或测试失败，则需要更换氘灯。

（5）常见问题：

1、检测器基线噪音大或出现鬼峰：排查是否有气泡，流通池是否污染，是否漏液，流通池污染可用1m的硝酸或者10%的磷酸冲洗，这个也适用清洗整个液相系统，流通池漏液一般需要更换密封垫。

2、紫外灯能量不足：这个寿命到了及时更换即可。

六、其他部件及模块的维护和保养

1、清洗溶剂过滤头，用35%浓硝酸浸泡1小时，禁止使用超声清洗。

2、正相色谱和反相色谱切换时用异丙醇切换，长期使用应更换正相柱塞密封垫。

3、整机系统的清洗，用温水及异丙醇接入两通对整机系统进行冲洗，系统出现鬼峰可用10%的磷酸冲洗整个系统，解决不了再用鬼峰捕集柱。，

4、色谱柱的维护和保养

色谱柱使用一定要在它规定的PH范围内，有的禁用高比例有机相，有的怕纯水，要按说明书要求使用。

（1）使用保护住，保护柱的作用是保护分析柱不受样品污染；保护住的填料应与分析柱的填料完全一致，已达到真正保护分析柱的目的。

（2）每天实验结束前都应该用适当的溶剂充分冲洗色谱柱、不同色谱柱所用的冲洗溶剂也不同，请参考所用色谱柱使用说明书进行操作。

（3）建议记录色谱柱的性能指标：包括记录色谱柱温度理论板数、拖尾因子、柱压力、色谱柱长度及内径、所用固定相及流动相、流速、进样量、温度条件等方便以后进行平行比较，评价色谱柱温度性能变化。

（4）暂时不用的色谱柱的保存：缓冲盐冲洗干净后，根据说明书保存在相关溶剂中。

5、、维护保养的频次（参考《现代液相色谱技术导论（第3版）》）