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上海近岸科技有限公司（原欣百诺生物）成立于2004年，是国内首家专门从事重组蛋白质制备工艺开发及生产的高科技企业。novoprotein 隶属于上海近岸科技有限公司，提供重组蛋白制备相关的全套技术服务，包括：基因合成、表达载体构建、发酵、纯化、质量检测、活性检测及后期加工处理；我们也生产高品质细胞因子、生物活性酶等重组蛋白质相关的试剂产品。novoprotein 目前成熟的表达体系包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统，每种表达系统都具有克级以上的制备能力。novoprotein 建立了严格的产品质控体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度以确保为客户提供优质的产品及一流的服务。 基于公司出色的重组蛋白质制备平台，novoprotein 研发生产的细胞因子、酶试剂产品凭借其优良的品质、高性价比赢得了海外细胞因子及生物试剂销售商的认可，目前我们已与海外十几家细胞因子与生物试剂销售企业建立了合作关系。 八年来，我们已完成了千余种重组蛋白质的制备，并开发、制备了40多种分子生物学酶和600余种细胞因子。因为专注所以更专业，我们正在努力打造重组蛋白质制备领域内的旗舰企业。 近岸公司产品仅限于生命科学实验室科学研究使用，不得直接用于临床诊断及药物治疗。
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NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒（无缝克隆） (NR001)目录规格价格NR001-01A20次600NR001-01BA包装X52000产品描述：NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒(无缝克隆)是近岸蛋白质科技最新研发的专利产品。该产品可以不依赖于连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用同源重组的方法，完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体无缝连接，反应时间短至20分钟，阳性率达到95%以上，让您轻松完成实验。使用方法：A.线性化载体的获得线性化载体可以通过两种方法获得，不管采取哪种方法，最终线性化载体的 浓度需>15ng/μl。(高浓度的载体有利于提高效率)。1、酶切选取合适的位点，单酶切或双酶切皆可，并且5´端突出，3´端突出或平末端均适用本Kit。2、PCR 选取合适的位点，设计正向和反向引物，引物长度一般在18-20bp 左右，一般载体长度均大于3kb，建议用高保真的聚合酶扩增（推荐使用 Novoprotein pfu DNA 聚合酶，货号：E002）。为了避免模板质粒DNA对后续 试验的影响，建议载体酶切后再用PCR扩增，自连背景更低，阳性率更高。B.目的片段获得目的片段通常通过PCR获得。引物设计要保证目的片段两端有至少15bp序列与 线性化载体的两端一致，特殊应用引物设计请参照技术手册。为保证PCR扩 增的特异性及灵敏度，请尽可能选用pfu等高保真酶（推荐使用Novoprotein pfu DNA聚合酶，货号：E002）。PCR每条引物长度至少在35-40bp，包括5´ 端与载体同源的15bp以及目的片段特异性序列20-25bp，（注意事项：如果是 表达载体克隆构建，引物设计完全后，请注意检查读码框的正确）。引物设 计方法：使用NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）时，引物设计是很重要的，在设计引物时同样要遵循引物设计的基本原则，只不过上下游引物要加上15-18bp的载体同源序列。载体同源序列如何添加主要分以下两种情况： (1)载体酶切后是5'端突出或平末端，则引物上的同源序列包括5'端突出部分的序列；（2）载体酶切后是3’端突出，则因无上的同源序列不包含突出部分。（如下图，红色碱基为希望保留原有的酶切位点所额外添加的碱基，不计算在15bp之内。注：15bp同源序列不要求严格从载体最末端一届碱基计算，这是载体末端非同源序列将会被删除，同时导致重组效率的下降。当非同源序列达到20bp时，效率下降一半。NovoRec一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）引物设计方法C.目的片段与载体的重组1.将目的DNA片段和线性化载体以一定的摩尔比加到管子中 进行重组反应2.混匀后在37℃放置20分钟;3.立即进行转化，剩余连接液可保存在4℃或-20℃待用。（注意：1.目的片段与载体的摩尔比在3：1-10：1之间，摩尔比低于3：1效率会降低 2.反应时间在20-40分钟，时间太长不利于重组反应）D.转化建议所使用的感受态细胞效率要达到或>5X106 cfu/μg.1.冰上融化一管100 μl的DH5a感受态细胞，轻弹管壁使细 胞重悬起来。加入10μl的反应液到感受态细胞中，轻弹数下，置冰上孵育45分钟。2.42℃水浴中热激90秒后快速放入冰上5分钟。3.加入500μl SOC液体培养基，37℃孵育45-60分钟。4.5k离心3分钟收集菌体，根据需要将一定量的菌体均匀的涂布在含抗生素平板上。E.阳性克隆鉴定一般的，我们建议采用菌落PCR进行阳性克隆鉴定(推荐使用Novoprotein 2x specificTM Master Mix 货号：E010)。鉴定引物的选择：为避免假阳性结果，我们建议一条引物为载体特异性引物，另一条引物为目的片段特异性引物。产品包装（20次）：组成体积NovoRec®重组酶20μl10×重组缓冲液50μl稳定性：此Kit在4℃保存3天不影响使用效率。保存条件：收到后请立即离心；可在-20oC长期保存，避免反复冻融常用反应体系（20μl）组成体积10×重组缓冲液2μlNovoRec®重组酶1μl线性化载体（>15ng/μl）N插入片段N线性化载体（>15ng/μl）NddH2O 至20μl载体与目的片段摩尔比的计算：载体与目的片段的摩尔比在1:3-1:10之间，如果摩尔比低于1:3，转化效率会下降。摩尔比可登录到www.sinobio.net在线计算，也可根据以下公式计算： NovoRec计算器项目体积总量载体1ul50.0ng插入片段0.9ul45.5ng10x缓冲液5ulddH2O42.1ulNovoRec酶1ul合计50ul请输入相关信息>>载体总量：ng载体大小：kb载体浓度：ng/ul插入片段长度：kb片段浓度：ng/ul载体/片段比例：1:31:51:10总反应体积：ul
PCR 增强剂I (E050)目录规格价格E050-01A500ul90E050-01BA包装X5405产品描述：PCR 增强剂Ⅰ的主要成份为甜菜碱，能与所有的耐热DNA聚合酶共同作用促进许多DNA 模板的有效扩增，增加PCR反应的灵敏度和特异性。在PCR反应中，PCR增强剂主要通过提高DNA聚合酶的热稳定性，降低DNA的二级结构起作用。注： PCR增强剂不能对所有的PCR反应起增强作用，有时需要从其他方面来改进PCR 体系。使用方法：本产品为10倍浓度。使用时直接加入到反应体系中即可，每10μl体系加入增强剂1μl。产品包装：组成体积PCR 增强剂Ⅰ500μl×1支
PCR 增强剂I (E050)目录规格价格E050-01A500ul90E050-01BA包装X5405产品描述：PCR 增强剂Ⅰ的主要成份为甜菜碱，能与所有的耐热DNA聚合酶共同作用促进许多DNA 模板的有效扩增，增加PCR反应的灵敏度和特异性。在PCR反应中，PCR增强剂主要通过提高DNA聚合酶的热稳定性，降低DNA的二级结构起作用。注： PCR增强剂不能对所有的PCR反应起增强作用，有时需要从其他方面来改进PCR 体系。使用方法：本产品为10倍浓度。使用时直接加入到反应体系中即可，每10μl体系加入增强剂1μl。产品包装：组成体积PCR 增强剂Ⅰ500μl×1支
NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒（无缝克隆） (NR001)目录规格价格NR001-01A20次600NR001-01BA包装X52000产品描述：NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒(无缝克隆)是近岸蛋白质科技最新研发的专利产品。该产品可以不依赖于连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用同源重组的方法，完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体无缝连接，反应时间短至20分钟，阳性率达到95%以上，让您轻松完成实验。使用方法：A.线性化载体的获得线性化载体可以通过两种方法获得，不管采取哪种方法，最终线性化载体的 浓度需>15ng/μl。(高浓度的载体有利于提高效率)。1、酶切选取合适的位点，单酶切或双酶切皆可，并且5´端突出，3´端突出或平末端均适用本Kit。2、PCR 选取合适的位点，设计正向和反向引物，引物长度一般在18-20bp 左右，一般载体长度均大于3kb，建议用高保真的聚合酶扩增（推荐使用 Novoprotein pfu DNA 聚合酶，货号：E002）。为了避免模板质粒DNA对后续 试验的影响，建议载体酶切后再用PCR扩增，自连背景更低，阳性率更高。B.目的片段获得目的片段通常通过PCR获得。引物设计要保证目的片段两端有至少15bp序列与 线性化载体的两端一致，特殊应用引物设计请参照技术手册。为保证PCR扩 增的特异性及灵敏度，请尽可能选用pfu等高保真酶（推荐使用Novoprotein pfu DNA聚合酶，货号：E002）。PCR每条引物长度至少在35-40bp，包括5´ 端与载体同源的15bp以及目的片段特异性序列20-25bp，（注意事项：如果是 表达载体克隆构建，引物设计完全后，请注意检查读码框的正确）。引物设 计方法：使用NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）时，引物设计是很重要的，在设计引物时同样要遵循引物设计的基本原则，只不过上下游引物要加上15-18bp的载体同源序列。载体同源序列如何添加主要分以下两种情况： (1)载体酶切后是5'端突出或平末端，则引物上的同源序列包括5'端突出部分的序列；（2）载体酶切后是3’端突出，则因无上的同源序列不包含突出部分。（如下图，红色碱基为希望保留原有的酶切位点所额外添加的碱基，不计算在15bp之内。注：15bp同源序列不要求严格从载体最末端一届碱基计算，这是载体末端非同源序列将会被删除，同时导致重组效率的下降。当非同源序列达到20bp时，效率下降一半。NovoRec一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）引物设计方法C.目的片段与载体的重组1.将目的DNA片段和线性化载体以一定的摩尔比加到管子中 进行重组反应2.混匀后在37℃放置20分钟;3.立即进行转化，剩余连接液可保存在4℃或-20℃待用。（注意：1.目的片段与载体的摩尔比在3：1-10：1之间，摩尔比低于3：1效率会降低 2.反应时间在20-40分钟，时间太长不利于重组反应）D.转化建议所使用的感受态细胞效率要达到或>5X106 cfu/μg.1.冰上融化一管100 μl的DH5a感受态细胞，轻弹管壁使细 胞重悬起来。加入10μl的反应液到感受态细胞中，轻弹数下，置冰上孵育45分钟。2.42℃水浴中热激90秒后快速放入冰上5分钟。3.加入500μl SOC液体培养基，37℃孵育45-60分钟。4.5k离心3分钟收集菌体，根据需要将一定量的菌体均匀的涂布在含抗生素平板上。E.阳性克隆鉴定一般的，我们建议采用菌落PCR进行阳性克隆鉴定(推荐使用Novoprotein 2x specificTM Master Mix 货号：E010)。鉴定引物的选择：为避免假阳性结果，我们建议一条引物为载体特异性引物，另一条引物为目的片段特异性引物。产品包装（20次）：组成体积NovoRec®重组酶20μl10×重组缓冲液50μl稳定性：此Kit在4℃保存3天不影响使用效率。保存条件：收到后请立即离心；可在-20oC长期保存，避免反复冻融常用反应体系（20μl）组成体积10×重组缓冲液2μlNovoRec®重组酶1μl线性化载体（>15ng/μl）N插入片段N线性化载体（>15ng/μl）NddH2O 至20μl载体与目的片段摩尔比的计算：载体与目的片段的摩尔比在1:3-1:10之间，如果摩尔比低于1:3，转化效率会下降。摩尔比可登录到www.sinobio.net在线计算，也可根据以下公式计算： NovoRec计算器项目体积总量载体1ul50.0ng插入片段0.9ul45.5ng10x缓冲液5ulddH2O42.1ulNovoRec酶1ul合计50ul请输入相关信息>>载体总量：ng载体大小：kb载体浓度：ng/ul插入片段长度：kb片段浓度：ng/ul载体/片段比例：1:31:51:10总反应体积：ul
