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  • 北京亿鸣复兴生物科技有限公司
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    Tunel法检测细胞凋亡

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      北京亿鸣复兴生物科技有限公司
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      其他
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    • Tunel法检测细胞凋亡
    
                    


    TUNEL细胞凋亡检测 (TUNEL Apoptosis Assay) 是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品,经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤,即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现 180-200bp的DNA ladder。

    基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP),随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合,最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞。

    服务内容

    1.      组织切片/细胞爬片

    2.      常规TUNEL检测

    3.      荧光TUNEL试剂盒检测

    4.      数据整理及结果分析

    *根据客户需要对细胞核进行荧光染色

    客户须知:

    1.      由客户提供荧光TUNEL检测试剂盒

    2.      本公司保证数据的客观性、准确性,但不保证与客户预期吻合

    服务价格及周期:

    服务项目

    服务内容 

    价格

    组织切片

    常规切片

    20元/片

    常规TUNEL

    DAB显色法TUNEL检测,成像分析

    400元/样本

    荧光TUNEL

    使用荧光TUNEL检测试剂盒,荧光成像分析

    300元/样本

    数据分析

    成像分析及数据统计

    套餐内(免费)

    交货时间: 15~20天 

    提供结果:

    1.      成像图片(或按客户需要排列图片,达到可直接发表水平)

    2.      实验详细流程

    3.      原始数据

    4.      标记后(处理后)的样本

    样本要求:

    1.      悬浮生长培养细胞的甩片或涂片

    2.      贴壁生长的培养细胞 

    3.      冰冻切片 

    4.      常规石蜡切片 

    取材保持组织新鲜(组织块以小于50px×37.5px×7.5px为宜),立即放入固定液(固定液用10%福尔马林液或4%多聚甲醛缓冲液,体积为组织块的10倍以上)中,避免干燥;对于有血迹的样本,可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中;经固定后的样本必须在48小时内处理。

    注意事项:

    1.      结果分析时注意:在坏死的晚期阶段或在高度增殖/代谢的组织细胞中可产生大量DNA片断,从而引起假阳性结果;而有些类型的凋亡性细胞死亡缺乏DNA断裂或DNA裂解不完全,以及细胞外的矩阵成分阻止TdT进入胞内反应,进而产生假阴性结果。

    2.      初次检测细胞凋亡,最好设置阳性对照片。血细胞含量高的组织,尽可能延长过氧化氢的灭活时间。苏木素的复染时间需要摸索。

    3.      每片所加试剂可调整,一般30~100 ul不等,但也要防止液体挥发而干片,且反应均在放置湿盒内。

     


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