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北京维洛信生物科技有限公司

北京维洛信生物科技有限公司成立于2019年,是北京百泰派克生物科技有限公司旗下病毒技术服务平台,主要为国内外各各科研院所,高校,药企,生物工程类企业提供载体构建、病毒包装等生物学技术服务与产品。基于先进的腺病毒、腺相关病毒与慢病毒技术平台,我们致力于快速、高纯度、高滴度、高感染活力的病毒颗粒制备与生产,并结合客户需求与应用领域,定制高效、高性价比的一站式服务。

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维洛信现推出以下四种病毒包装技术平台,结合专业技术团队,建立了完备的制备、纯化和质控的流程,确保生产的病毒颗粒产品满足各种体内、体外实验的需求。腺病毒平台:采用应用最广的5型腺病毒与新一代AdMax双质粒共转染系统进行重组腺病毒的生产与包装,能够得到高滴度、高纯度的病毒颗粒,确保满足各种类型的实验研究需求。腺相关病毒平台:采用三质粒共转染的Helper-free系统在293T细胞中进行AAV的生产与包装,确保满足各种体内/体外实验研究需求。慢病毒平台:基于国际学术界公认的标准流程,采用第三代包装系统系统在293T细胞中进行慢病毒的制备,确保生产出的慢病毒颗粒可应用于各种类型的体内与体外实验。Lenti-CAR平台:基于成熟的慢病毒包装技术平台,维洛信现提供CAR慢病毒(Lenti-CAR)包装服务,获得的病毒颗粒可以直接用于CAR-T细胞制备。多种病毒载体应用基因过表达RNA干扰MicroRNA研究基因编辑

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MicroRNA(miRNA)是一种内生的、短小的非编码单链RNA,它能够同靶点基因的3’UTR互补配对,并导致基因沉默或抑制表达。miRNA网络是转录后表达调控的重要机制之一,参与精细调节体内超过60%的基因。miRNA在进化中高度保守,在很多生物活动中扮演重要角色,miRNA的异常与很多疾病发病密切相关。基于先进的慢病毒技术平台,维洛信现提供介导microRNA表达/抑制的慢病毒制备服务。我们采用第三代包装系统系统在293T细胞中进行慢病毒的生产与包装,并建立了完善的纯化和质控方法,生产的慢病毒颗粒可直接应用于各类体内体外试验。慢病毒优势:1. 广泛宿主细胞:与逆转录载体不同,能够感染分裂期与静止期细胞;包膜质粒使用疱疹病毒VSVG蛋白,宿主范围更广,包括神经元细胞、肿瘤细胞、心肌细胞、干细胞等多种类型的细胞。2. 极强感染能力:慢病毒载体具有极高的感染效率,尤其适用于难转染的神经元细胞、干细胞、原代细胞和其他不分化细胞。3. 长期稳定表达:外源基因整合入基因组,实现持久性表达,可应用于构建稳定细胞系、制备转基因动物等。4. 低免疫原性:体内实验不易造成非特异性反应与免疫抑制。5. 高安全系数:尚未发现对人的致病性,已被应用于临床治疗;采用三质粒包装系统,去除致病基因和辅助序列,包装质粒和载体质粒尽量降低同源性,进一步提高了生物安全性。服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:根据目标miR,将其pri-miR及上下游构建入慢病毒转移质粒(miR表达)/设计miR封闭序列,并构建入慢病毒转移质粒(miR抑制);测序验证3. 病毒包装:三代慢病毒包装系统(转移质粒 + 包装质粒 + 包膜质粒)共转染入293T细胞4. 收毒:48 h、72 h孵育后收获培养上清5. 纯化浓缩:超速离心+超滤, 去除杂质蛋白和DNA;根据不同要求,我们还可应用切向流过滤、离子交换层析、蔗糖梯度离心等方式进一步纯化与浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- p24 ELISA核心蛋白定量- 细胞转导检测(带有荧光标签)- qPCR检测病毒滴度交付内容:定制慢病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信慢病毒平台:1. 三代慢病毒包装系统与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的慢病毒产品2. 多种优化启动子(CMV, mCMV, CAG, PGK, Ubc等)与报告基因(EGFP、mCherry、EYFP等)可供选择,满足您的不同需求3. 滴度高:维洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求4. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务5. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们提供以下慢病毒制备服务:用于基因过表达的慢病毒制备>>用于RNA干扰的慢病毒制备>>用于基因编辑的慢病毒制备>>

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基于先进的腺病毒技术平台,维洛信现提供AAV定制服务,可适用于多种基因操作与编辑策略。我们采用三质粒共转染的Helper-free系统在293T细胞中进行AAV的生产与包装,并建立了完善的纯化与质控方法,生产的AAV颗粒可直接应用于各类体内体外实验。- 基于CRISPR的基因敲除的AAV载体构建与包装CRISPR系统是目前最常用的基因打靶系统之一。维洛信提供基于CRISPR系统的AAV载体构建预包装服务,根据目的基因设计short guide RNA (sgRNA) 序列并构建入我们专有的AAV载体pAAV-CR,进而断裂DNA双链,实现对基因的精确敲除。-Cre-LoxP重组系统的AAV载体构建与包装将Cre-LoxP重组系统与具有高效和特异感染的AAV载体结合,实现目的基因组织和时间的可控表达。-Tet-on转录系统的AAV载体构建与包装四环素转录调控系统(Tetracycline-Controlled Transcriptional Activation, Tet-on/off)是能够定时开启/关闭特定基因表达的转录调控系统。维洛信提供Tet-on转录系统的AAV载体构建与包装服务,实现基因的诱导表达。腺相关病毒优势:1. 宿主范围广:可感染分裂细胞与非分裂细胞;多种亚型具有多种组织亲嗜性,可以应用于神经系统、心肌、肝脏、眼睛、肌肉等定位注射。2. 扩散性佳:体积小、滴度高,具有远优于腺病毒与慢病毒的扩散性,可穿越血脑屏障,是优秀的神经元与胶质细胞感染工具。3. 安全系数高:迄今未发现野生型AAV对人体致病;ITR与rep/cap基因分别由独立的质粒传导表达,进一步去除感染风险。4. 免疫原性低:仅4.7kb的基因组便于重组DNA技术操作,在动物实验中局部大剂量使用极少造成非特异性反应与免疫抑制。5. 长时稳定表达:AAV感染可介导外源基因发生低频(<2%)定向整合,绝大多数重组AAV感染细胞后不会整合入基因组,而是在宿主细胞内形成伴随体,因此AAV能够介导外源基因长期、稳定的复制转录。6. 稳定性好:AAV在60℃不会被灭活,能抵抗多种有机溶剂的处理(例如氯仿)不同的AAV亚型具有不同的组织嗜亲性,我们推荐根据实验靶向的器官/细胞,选择具有相应亲和性的AAV亚型进行构建,能够有效提高感染效率。血清型组织嗜亲性AAV1肌肉,心脏,骨骼肌(包括心肌),神经组织AAV2中枢神经,肌肉,肝脏,脑组织,眼AAV3肌肉,肝脏,肺,眼AAV4中枢神经,肌肉,脑,眼AAV5中枢神经,肺,眼,关节滑膜,胰腺AAV6心脏,肺AAV7肝脏,肌肉AAV8中枢神经,肝脏,肌肉,眼AAV9中枢神经,肝脏,心脏,肌肉,肺(包括肺泡),可穿过血脑/胎盘屏障DJ肝脏,肾脏,肺,视网膜DJ/8中枢神经,肝脏,肌肉,眼Rh10中枢神经,肝脏,心脏,肌肉,肺PHP.eB中枢神经PHP. B中枢神经(神经元,神经胶质)PHP.S中枢神经(外周神经元)Retro中枢神经AAV-pan胰腺服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:将目的基因片段构建入我们的专有AAV转移质粒,测序验证3. 病毒包装:三质粒共转染(转移质粒+病毒包装质粒+辅助质粒)入293T细胞4. 收毒:72h孵育后分别收获培养上清与细胞沉淀中的病毒5. 纯化浓缩:碘克沙醇梯度离心,高效的分离空衣壳病毒与细胞杂质,将具备感染力的病毒富集到90%以上;超滤浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- qPCR检测病毒滴度- SDS-PAGE/考马斯亮蓝测定纯度- 细胞转导检测(带有荧光标签)- HPLC/内毒素检测/微生物检测(高纯度AAV可选)交付内容:定制AAV病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信腺相关病毒平台:1. 创新性AAV载体与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的AAV产品2. 多种AAV血清型可供选择(AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...)3. 20余种组织特异性启动子(CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等)与多种报告基因(EGFP、mCherry、RFP,EYFP等)可供选择,满足您的不同需求4. 滴度高:维洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求5. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务6. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们还提供以下AAV制备服务:用于基因过表达的腺相关病毒(AAV)制备>>用于RNA干扰的腺相关病毒(AAV)制备>>用于表达/抑制microRNA的腺相关病毒(AAV)制备>>

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腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)是一种无被膜、具有20面体结构的病毒,含有4.7kb的线状单链DNA基因组。AAV具备宿主范围广、安全性高、免疫原性低、长期稳定表达等优点,是一种理想的基因治疗工具,广泛应用于各种领域的基础研究与临床试验中。基于先进的腺病毒技术平台,维洛信现提供基因过表达AAV制备服务。我们采用三质粒共转染的Helper-free系统在293T细胞中进行AAV的生产与包装,并建立了完善的纯化与质控方法,生产的AAV颗粒可直接应用于各类体内体外实验。腺相关病毒优势:1. 宿主范围广:可感染分裂细胞与非分裂细胞;多种亚型具有多种组织亲嗜性,可以应用于神经系统、心肌、肝脏、眼睛、肌肉等定位注射。2. 扩散性佳:体积小、滴度高,具有远优于腺病毒与慢病毒的扩散性,可穿越血脑屏障,是优秀的神经元与胶质细胞感染工具。3. 安全系数高:迄今未发现野生型AAV对人体致病;ITR与rep/cap基因分别由独立的质粒传导表达,进一步去除感染风险。4. 免疫原性低:仅4.7kb的基因组便于重组DNA技术操作,在动物实验中局部大剂量使用极少造成非特异性反应与免疫抑制。5. 长时稳定表达:AAV感染可介导外源基因发生低频(<2%)定向整合,绝大多数重组AAV感染细胞后不会整合入基因组,而是在宿主细胞内形成伴随体,因此AAV能够介导外源基因长期、稳定的复制转录。6. 稳定性好:AAV在60℃不会被灭活,能抵抗多种有机溶剂的处理(例如氯仿)不同的AAV亚型具有不同的组织嗜亲性,我们推荐根据实验靶向的器官/细胞,选择具有相应亲和性的AAV亚型进行构建,能够有效提高感染效率。服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:将目的基因cDNA(Gene of Interest)构建入我们的专有AAV转移质粒,测序验证3. 病毒包装:三质粒共转染(转移质粒+病毒包装质粒+辅助质粒)入293T细胞4. 收毒:72h孵育后分别收获培养上清与细胞沉淀中的病毒5. 纯化浓缩:碘克沙醇梯度离心,高效的分离空衣壳病毒与细胞杂质,将具备感染力的病毒富集到90%以上;超滤浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- qPCR检测病毒滴度- SDS-PAGE/考马斯亮蓝测定纯度- 细胞转导检测(带有荧光标签)- HPLC/内毒素检测/微生物检测(高纯度AAV可选)交付内容:定制AAV病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信腺相关病毒平台:1. 创新性AAV载体与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的AAV产品2. 多种AAV血清型可供选择(AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...)3. 20余种组织特异性启动子(CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等)与多种报告基因(EGFP、mCherry、RFP,EYFP等)可供选择,满足您的不同需求4. 滴度高:维洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求5. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务6. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们还提供以下AAV制备服务:用于RNA干扰的腺相关病毒(AAV)制备>>用于表达/抑制microRNA的腺相关病毒(AAV)制备>>用于基因编辑的腺相关病毒(AAV)制备>>

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基于国际学术界公认的标准流程,维洛信现提供介导RNA干扰的慢病毒制备服务。我们采用第三代包装系统系统在293T细胞中进行慢病毒的生产与包装,并建立了完善的纯化和质控方法,生产的慢病毒颗粒可直接应用于各类体内体外试验。RNA干扰(RNA interference, RNAi)是借助双链RNA(dsRNA)引发的同源mRNA高效特异性降解、导致基因沉默的现象。RNAi技术即为在靶细胞中导入外源dsRNA,生成小分子干扰RNA(siRNA)以达到特异性剔除或沉默某个基因的表达。将针对siRNA设计的shRNA装载入慢病毒载体中,进而高效感染细胞或动物,是人工RNAi的一项主要技术。借助慢病毒的感染能力,不仅宿主细胞范围大大扩大,shRNA也能够更加高效、稳定的转导入细胞,实现长期稳定的RNAi效果。慢病毒优势:1. 广泛宿主细胞:与逆转录载体不同,能够感染分裂期与静止期细胞;包膜质粒使用疱疹病毒VSVG蛋白,宿主范围更广,包括神经元细胞、肿瘤细胞、心肌细胞、干细胞等多种类型的细胞。2. 极强感染能力:慢病毒载体具有极高的感染效率,尤其适用于难转染的神经元细胞、干细胞、原代细胞和其他不分化细胞。3. 长期稳定表达:外源基因整合入基因组,实现持久性表达,可应用于构建稳定细胞系、制备转基因动物等。4. 低免疫原性:体内实验不易造成非特异性反应与免疫抑制。5. 高安全系数:尚未发现对人的致病性,已被应用于临床治疗;采用三质粒包装系统,去除致病基因和辅助序列,包装质粒和载体质粒尽量降低同源性,进一步提高了生物安全性。服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:针对目的基因ORF设计3-4个靶点,将对应shRNA构建入我们的专有慢病毒转移质粒,测序验证3. 病毒包装:三代慢病毒包装系统(转移质粒pLV-MNG + 包装质粒 + 包膜质粒)共转染入293T细胞4. 收毒:48 h、72 h孵育后收获培养上清5. 纯化浓缩:超速离心+超滤, 去除杂质蛋白和DNA;根据不同要求,我们还可应用切向流过滤、离子交换层析、蔗糖梯度离心等方式进一步纯化与浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- p24 ELISA核心蛋白定量- 细胞转导检测(带有荧光标签)- qPCR检测病毒滴度交付内容:定制慢病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信慢病毒平台:1. 三代慢病毒包装系统与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的慢病毒产品2. 多种优化启动子(CMV, H1, U6等)与报告基因(EGFP、mCherry、EYFP等)或药筛基因(Neo, Puro, Hygromycin等)可供选择,满足您的不同需求3. 滴度高:维洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求4. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务5. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们提供以下慢病毒制备服务:用于基因过表达的慢病毒制备>>用于表达/抑制microRNA的慢病毒制备>>用于基因编辑的慢病毒制备>>

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MicroRNA(miRNA)是一种内生的、短小的非编码单链RNA,它能够同靶点基因的3’UTR互补配对,并导致基因沉默或抑制表达。miRNA网络是转录后表达调控的重要机制之一,参与精细调节体内超过60%的基因。miRNA在进化中高度保守,在很多生物活动中扮演重要角色,miRNA的异常与很多疾病发病密切相关。基于先进的慢病毒技术平台,维洛信现提供介导microRNA表达/抑制的慢病毒制备服务。我们采用第三代包装系统系统在293T细胞中进行慢病毒的生产与包装,并建立了完善的纯化和质控方法,生产的慢病毒颗粒可直接应用于各类体内体外试验。慢病毒优势:1. 广泛宿主细胞:与逆转录载体不同,能够感染分裂期与静止期细胞;包膜质粒使用疱疹病毒VSVG蛋白,宿主范围更广,包括神经元细胞、肿瘤细胞、心肌细胞、干细胞等多种类型的细胞。2. 极强感染能力:慢病毒载体具有极高的感染效率,尤其适用于难转染的神经元细胞、干细胞、原代细胞和其他不分化细胞。3. 长期稳定表达:外源基因整合入基因组,实现持久性表达,可应用于构建稳定细胞系、制备转基因动物等。4. 低免疫原性:体内实验不易造成非特异性反应与免疫抑制。5. 高安全系数:尚未发现对人的致病性,已被应用于临床治疗;采用三质粒包装系统,去除致病基因和辅助序列,包装质粒和载体质粒尽量降低同源性,进一步提高了生物安全性。服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:根据目标miR,将其pri-miR及上下游构建入慢病毒转移质粒(miR表达)/设计miR封闭序列,并构建入慢病毒转移质粒(miR抑制);测序验证3. 病毒包装:三代慢病毒包装系统(转移质粒 + 包装质粒 + 包膜质粒)共转染入293T细胞4. 收毒:48 h、72 h孵育后收获培养上清5. 纯化浓缩:超速离心+超滤, 去除杂质蛋白和DNA;根据不同要求,我们还可应用切向流过滤、离子交换层析、蔗糖梯度离心等方式进一步纯化与浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- p24 ELISA核心蛋白定量- 细胞转导检测(带有荧光标签)- qPCR检测病毒滴度交付内容:定制慢病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信慢病毒平台:1. 三代慢病毒包装系统与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的慢病毒产品2. 多种优化启动子(CMV, mCMV, CAG, PGK, Ubc等)与报告基因(EGFP、mCherry、EYFP等)可供选择,满足您的不同需求3. 滴度高:维洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求4. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务5. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们提供以下慢病毒制备服务:用于基因过表达的慢病毒制备>>用于RNA干扰的慢病毒制备>>用于基因编辑的慢病毒制备>>

基于先进的腺病毒技术平台,维洛信现提供AAV定制服务,可适用于多种基因操作与编辑策略。我们采用三质粒共转染的Helper-free系统在293T细胞中进行AAV的生产与包装,并建立了完善的纯化与质控方法,生产的AAV颗粒可直接应用于各类体内体外实验。- 基于CRISPR的基因敲除的AAV载体构建与包装CRISPR系统是目前最常用的基因打靶系统之一。维洛信提供基于CRISPR系统的AAV载体构建预包装服务,根据目的基因设计short guide RNA (sgRNA) 序列并构建入我们专有的AAV载体pAAV-CR,进而断裂DNA双链,实现对基因的精确敲除。-Cre-LoxP重组系统的AAV载体构建与包装将Cre-LoxP重组系统与具有高效和特异感染的AAV载体结合,实现目的基因组织和时间的可控表达。-Tet-on转录系统的AAV载体构建与包装四环素转录调控系统(Tetracycline-Controlled Transcriptional Activation, Tet-on/off)是能够定时开启/关闭特定基因表达的转录调控系统。维洛信提供Tet-on转录系统的AAV载体构建与包装服务,实现基因的诱导表达。腺相关病毒优势:1. 宿主范围广:可感染分裂细胞与非分裂细胞;多种亚型具有多种组织亲嗜性,可以应用于神经系统、心肌、肝脏、眼睛、肌肉等定位注射。2. 扩散性佳:体积小、滴度高,具有远优于腺病毒与慢病毒的扩散性,可穿越血脑屏障,是优秀的神经元与胶质细胞感染工具。3. 安全系数高:迄今未发现野生型AAV对人体致病;ITR与rep/cap基因分别由独立的质粒传导表达,进一步去除感染风险。4. 免疫原性低:仅4.7kb的基因组便于重组DNA技术操作,在动物实验中局部大剂量使用极少造成非特异性反应与免疫抑制。5. 长时稳定表达:AAV感染可介导外源基因发生低频(<2%)定向整合,绝大多数重组AAV感染细胞后不会整合入基因组,而是在宿主细胞内形成伴随体,因此AAV能够介导外源基因长期、稳定的复制转录。6. 稳定性好:AAV在60℃不会被灭活,能抵抗多种有机溶剂的处理(例如氯仿)不同的AAV亚型具有不同的组织嗜亲性,我们推荐根据实验靶向的器官/细胞,选择具有相应亲和性的AAV亚型进行构建,能够有效提高感染效率。血清型组织嗜亲性AAV1肌肉,心脏,骨骼肌(包括心肌),神经组织AAV2中枢神经,肌肉,肝脏,脑组织,眼AAV3肌肉,肝脏,肺,眼AAV4中枢神经,肌肉,脑,眼AAV5中枢神经,肺,眼,关节滑膜,胰腺AAV6心脏,肺AAV7肝脏,肌肉AAV8中枢神经,肝脏,肌肉,眼AAV9中枢神经,肝脏,心脏,肌肉,肺(包括肺泡),可穿过血脑/胎盘屏障DJ肝脏,肾脏,肺,视网膜DJ/8中枢神经,肝脏,肌肉,眼Rh10中枢神经,肝脏,心脏,肌肉,肺PHP.eB中枢神经PHP. B中枢神经(神经元,神经胶质)PHP.S中枢神经(外周神经元)Retro中枢神经AAV-pan胰腺服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:将目的基因片段构建入我们的专有AAV转移质粒,测序验证3. 病毒包装:三质粒共转染(转移质粒+病毒包装质粒+辅助质粒)入293T细胞4. 收毒:72h孵育后分别收获培养上清与细胞沉淀中的病毒5. 纯化浓缩:碘克沙醇梯度离心,高效的分离空衣壳病毒与细胞杂质,将具备感染力的病毒富集到90%以上;超滤浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- qPCR检测病毒滴度- SDS-PAGE/考马斯亮蓝测定纯度- 细胞转导检测(带有荧光标签)- HPLC/内毒素检测/微生物检测(高纯度AAV可选)交付内容:定制AAV病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信腺相关病毒平台:1. 创新性AAV载体与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的AAV产品2. 多种AAV血清型可供选择(AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...)3. 20余种组织特异性启动子(CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等)与多种报告基因(EGFP、mCherry、RFP,EYFP等)可供选择,满足您的不同需求4. 滴度高:维洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求5. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务6. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们还提供以下AAV制备服务:用于基因过表达的腺相关病毒(AAV)制备>>用于RNA干扰的腺相关病毒(AAV)制备>>用于表达/抑制microRNA的腺相关病毒(AAV)制备>>

腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)是一种无被膜、具有20面体结构的病毒,含有4.7kb的线状单链DNA基因组。AAV具备宿主范围广、安全性高、免疫原性低、长期稳定表达等优点,是一种理想的基因治疗工具,广泛应用于各种领域的基础研究与临床试验中。基于先进的腺病毒技术平台,维洛信现提供基因过表达AAV制备服务。我们采用三质粒共转染的Helper-free系统在293T细胞中进行AAV的生产与包装,并建立了完善的纯化与质控方法,生产的AAV颗粒可直接应用于各类体内体外实验。腺相关病毒优势:1. 宿主范围广:可感染分裂细胞与非分裂细胞;多种亚型具有多种组织亲嗜性,可以应用于神经系统、心肌、肝脏、眼睛、肌肉等定位注射。2. 扩散性佳:体积小、滴度高,具有远优于腺病毒与慢病毒的扩散性,可穿越血脑屏障,是优秀的神经元与胶质细胞感染工具。3. 安全系数高:迄今未发现野生型AAV对人体致病;ITR与rep/cap基因分别由独立的质粒传导表达,进一步去除感染风险。4. 免疫原性低:仅4.7kb的基因组便于重组DNA技术操作,在动物实验中局部大剂量使用极少造成非特异性反应与免疫抑制。5. 长时稳定表达:AAV感染可介导外源基因发生低频(<2%)定向整合,绝大多数重组AAV感染细胞后不会整合入基因组,而是在宿主细胞内形成伴随体,因此AAV能够介导外源基因长期、稳定的复制转录。6. 稳定性好:AAV在60℃不会被灭活,能抵抗多种有机溶剂的处理(例如氯仿)不同的AAV亚型具有不同的组织嗜亲性,我们推荐根据实验靶向的器官/细胞,选择具有相应亲和性的AAV亚型进行构建,能够有效提高感染效率。服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:将目的基因cDNA(Gene of Interest)构建入我们的专有AAV转移质粒,测序验证3. 病毒包装:三质粒共转染(转移质粒+病毒包装质粒+辅助质粒)入293T细胞4. 收毒:72h孵育后分别收获培养上清与细胞沉淀中的病毒5. 纯化浓缩:碘克沙醇梯度离心,高效的分离空衣壳病毒与细胞杂质,将具备感染力的病毒富集到90%以上;超滤浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- qPCR检测病毒滴度- SDS-PAGE/考马斯亮蓝测定纯度- 细胞转导检测(带有荧光标签)- HPLC/内毒素检测/微生物检测(高纯度AAV可选)交付内容:定制AAV病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信腺相关病毒平台:1. 创新性AAV载体与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的AAV产品2. 多种AAV血清型可供选择(AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...)3. 20余种组织特异性启动子(CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等)与多种报告基因(EGFP、mCherry、RFP,EYFP等)可供选择,满足您的不同需求4. 滴度高:维洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求5. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务6. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们还提供以下AAV制备服务:用于RNA干扰的腺相关病毒(AAV)制备>>用于表达/抑制microRNA的腺相关病毒(AAV)制备>>用于基因编辑的腺相关病毒(AAV)制备>>

维洛信现推出以下四种病毒包装技术平台,结合专业技术团队,建立了完备的制备、纯化和质控的流程,确保生产的病毒颗粒产品满足各种体内、体外实验的需求。腺病毒平台:采用应用最广的5型腺病毒与新一代AdMax双质粒共转染系统进行重组腺病毒的生产与包装,能够得到高滴度、高纯度的病毒颗粒,确保满足各种类型的实验研究需求。腺相关病毒平台:采用三质粒共转染的Helper-free系统在293T细胞中进行AAV的生产与包装,确保满足各种体内/体外实验研究需求。慢病毒平台:基于国际学术界公认的标准流程,采用第三代包装系统系统在293T细胞中进行慢病毒的制备,确保生产出的慢病毒颗粒可应用于各种类型的体内与体外实验。Lenti-CAR平台:基于成熟的慢病毒包装技术平台,维洛信现提供CAR慢病毒(Lenti-CAR)包装服务,获得的病毒颗粒可以直接用于CAR-T细胞制备。多种病毒载体应用基因过表达RNA干扰MicroRNA研究基因编辑

基于国际学术界公认的标准流程,维洛信现提供介导基因过表达的慢病毒制备服务。我们采用第三代包装系统系统在293T细胞中进行慢病毒的生产与包装,并建立了完善的纯化和质控方法,生产的慢病毒颗粒可直接应用于各类体内体外试验。慢病毒优势:1. 广泛宿主细胞:与逆转录载体不同,能够感染分裂期与静止期细胞;包膜质粒使用疱疹病毒VSVG蛋白,宿主范围更广,包括神经元细胞、肿瘤细胞、心肌细胞、干细胞等多种类型的细胞。2. 极强感染能力:慢病毒载体具有极高的感染效率,尤其适用于难转染的神经元细胞、干细胞、原代细胞和其他不分化细胞。3. 长期稳定表达:外源基因整合入基因组,实现持久性表达,可应用于构建稳定细胞系、制备转基因动物等。4. 低免疫原性:体内实验不易造成非特异性反应与免疫抑制。5. 高安全系数:尚未发现对人的致病性,已被应用于临床治疗;采用三质粒包装系统,去除致病基因和辅助序列,包装质粒和载体质粒尽量降低同源性,进一步提高了生物安全性。服务流程:1. 方案沟通2. 基因克隆:将目的基因(Gene of Interest)构建入我们的专有慢病毒转移质粒,测序验证3. 病毒包装:三代慢病毒包装系统(转移质粒pLV-MNG + 包装质粒 + 包膜质粒)共转染入293T细胞4. 收毒:48 h、72 h孵育后收获培养上清5. 纯化浓缩:超速离心+超滤, 去除杂质蛋白和DNA;根据不同要求,我们还可应用切向流过滤、离子交换层析、蔗糖梯度离心等方式进一步纯化与浓缩6. 质量控制:- 多重酶切质粒鉴定- p24 ELISA核心蛋白定量- 细胞转导检测(带有荧光标签)- qPCR检测病毒滴度交付内容:定制慢病毒颗粒对照病毒(可用于转导测试)详细实验报告维洛信慢病毒平台:1. 三代慢病毒包装系统与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的慢病毒产品2. 多种优化启动子(CMV, mCMV, CAG, PGK, Ubc等)与报告基因(EGFP、mCherry、EYFP等)或药筛基因(Neo, Puro, Hygromycin等)可供选择,满足您的不同需求3. 滴度高:维洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求4. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务5. 具有竞争力的价格与货期针对不同应用方向,我们提供以下慢病毒制备服务:用于RNA干扰的慢病毒制备>>用于表达/抑制microRNA的慢病毒制备>>用于基因编辑的慢病毒制备>>